劉 丹， 米佳麗， 王俊麗， 閆 瀟， 秦超彬，楊麗萍， 徐歆歆， 聶國興*

(1. 河南師范大學生命科學學院，河南 新鄉(xiāng) 453007；2. 河南師范大學水產(chǎn)學院，河南 新鄉(xiāng) 453007)

脂質(zhì)作為魚類飼料中必不可少的營養(yǎng)素，為魚類生長發(fā)育提供必需營養(yǎng)物質(zhì)，是魚類重要的能量來源[1]。然而，脂類在飼料的制備、加工和儲存過程中會產(chǎn)生許多氧化產(chǎn)物，主要包括初級氧化產(chǎn)物(氫過氧化物)和次級氧化產(chǎn)物(羥基醛)，會對水產(chǎn)動物的健康造成嚴重傷害[2]。魚油是商業(yè)飼料中最重要的脂質(zhì)來源之一，因其富含長鏈多不飽和脂肪酸(主要是DHA 和EPA)，較其他油源更容易被氧化[3]。氧化脂質(zhì)不僅會損傷細胞生物膜、破壞飼料的營養(yǎng)成分，對水產(chǎn)動物的健康也會產(chǎn)生許多負面影響[2]。據(jù)報道，用脂質(zhì)氧化飼料飼喂拉氏鱥(Rhynchocypris lagowski)會顯著降低其生長性能、飼料效率和蛋白質(zhì)效率[4]。此外，脂質(zhì)氧化飼料也會對魚類腸道健康帶來不良影響。研究表明，用氧化脂質(zhì)飼料飼喂尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus) 12 周后，會降低其抗氧化水平，破壞腸道的結(jié)構(gòu)完整性，誘導腸道炎癥，引起腸道菌群的失調(diào)[5]。因此，有必要尋找合適的飼料添加劑來緩解脂質(zhì)氧化飼料對魚類帶來的不利影響。

?；撬?2-氨基乙基磺酸)是從牛膽汁中首次發(fā)現(xiàn)的一種以游離氨基酸形式存在的非蛋白氨基酸，占總氨基酸庫的30%～50%[6-7]。水產(chǎn)養(yǎng)殖研究的最新進展強調(diào)了飼料中?；撬釋λ鷦游锒喾N生理功能的重要性，包括促進黃鱔(Monopterus albus)和鯉(Cyprinus carpio)的生長性能[8-9]，改善革胡子鲇(Clarias gariepinus)的抗氧化和免疫能力[10]，提高虹鱒(Oncorhynchus mykiss)的細胞滲透調(diào)節(jié)能力[11]。此外，?；撬釋︳~類腸道健康也有重要的調(diào)節(jié)作用。在高碳水化合物飼料中添加?；撬峥梢蕴岣唿S鱔腸道菌群的多樣性[8]。添加?；撬峥山档脱趸~油飼料對腸道微生物組成和種群間相互作用的負面影響，恢復(fù)魚類腸道菌群的功能[12]。但是對?；撬嵩隰~類腸道健康方面的研究仍然非常有限，有待進一步研究。本研究以黃河鯉為對象，從生長性能、抗氧化性能、消化能力、腸道組織形態(tài)以及微生物組成的角度，探究?；撬釋ρ趸|(zhì)飼料飼喂下黃河鯉生長性能和腸道健康的影響。此外，本研究為脂質(zhì)氧化飼料對水產(chǎn)動物的危害提供了有效應(yīng)對策略，并為進一步研究?；撬釋︳~類腸道健康調(diào)節(jié)提供了理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料

以魚粉為主要蛋白源、魚油為主要脂肪源、小麥粉為糖源制作5 組等氮等脂飼料。本實驗所用的正常魚油購自新鄉(xiāng)東祥化工有限公司，氧化魚油由正常魚油制備。參考Long 等[13]描述的方法制備氧化魚油?；A(chǔ)對照飼料中添加3%正常魚油，其余4 組飼料中分別添加等量氧化魚油和0%、0.4%、0.8%和1.2%?；撬帷１? 展示具體的飼料配方。將飼料原料粉碎后，過60 目篩，采用逐級混勻的方法均勻混合，制成1.5 mm 粒徑的飼料，待自然風干后保存于-20 °C 冰箱中。

表1 實驗組飼料配方及營養(yǎng)組成Tab. 1 Experimental group feed formula and nutritional composition %

1.2 實驗管理及樣品采集

由河南省水產(chǎn)科學研究院提供實驗用黃河鯉，在漯河養(yǎng)殖基地戶外大型魚塘的網(wǎng)箱中進行養(yǎng)殖實驗。正式實驗前，所有實驗魚用商品飼料(購于通威股份有限公司)馴化2 周以適應(yīng)環(huán)境。選取225 尾初始體重為(8.74±0.01) g，大小均一、體格健全的黃河鯉，隨機分為5 個實驗組，共15 個網(wǎng)箱(2.0 m×2.0 m×1.5 m)，每個實驗組設(shè)置3 個重復(fù)。每天按體重的3%～5% 分3 次投喂(每天7：30、11：30 和17：30)，根據(jù)每周實驗魚體重對投喂量進行調(diào)整，持續(xù)10 周。養(yǎng)殖期間，水體溶解氧含量為(9.0±1.1) mg/L，水溫為26～28 °C、pH 為7.4±0.2、亞硝酸鹽濃度小于 0.1 mg/L、氨氮含量小于 0.2 mg/L。本實驗獲得河南師范大學動物實驗倫理委員會的授權(quán)(HNSD—2024BS—0108)，實驗過程中操作人員嚴格遵守河南師范大學倫理規(guī)范，并按照河南師范大學動物實驗倫理委員會制定的規(guī)章制度執(zhí)行。

養(yǎng)殖實驗結(jié)束禁食24 h 后，用麻醉劑(MS-222, 0.02%)麻醉實驗魚，記錄每個網(wǎng)箱實驗魚總數(shù)和體重，并隨機測量其中3 尾實驗魚的體長，然后解剖并分離出完整的腸道，取中腸的相同部位(約1 cm)固定于4%多聚甲醛溶液，用來對腸道組織形態(tài)進行分析。每個處理組選擇9 條實驗魚，在冰上解剖后迅速分離肝胰臟和腸道，立即放入無菌無酶1.5 mL 離心管中，在液氮中短暫冷凍，保存于-80 °C 用于實時熒光定量PCR 分析。各實驗組隨機選取3 尾實驗魚，用無菌解剖工具在冰上分離黃河鯉腸道組織，并小心取出內(nèi)容物，混勻裝入1.5 mL 無菌離心管后保存于-80 °C，用來進行腸道菌群16SrRNA測序。

1.3 氧化魚油的制備

制備實驗飼料之前，按照Long 等[13]描述的方法制備氧化魚油：將400 g 正常魚油放入500 mL 燒杯中，插入空氣泵管，在55 °C 恒溫水浴中持續(xù)加熱攪拌5 d。氧化過程結(jié)束后，按照中國食品安全國家標準(GB/T 5 009.37—2003)對魚油的過氧化值進行測定，每份飼料和魚油樣品均重復(fù)測定3 次，新鮮魚油的過氧化值為(2.51±0.11)meq O2/kg，氧化魚油的過氧化值為(175.39±3.83)meq O2/kg。

1.4 飼料常規(guī)成分的檢測

根據(jù)Mi 等[14]描述的方法對飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分進行檢測。在-50 °C 下將飼料冷凍干燥至恒重以檢測水分。分別用凱氏定氮法(GB/T6432 —2018)，索氏提取儀(SX-360,OPSIS，瑞典)和550 °C 馬弗爐煅燒法(GB/T 212—2008)來測定飼料中粗蛋白、粗脂肪和粗灰分的含量。

1.5 生長性能相關(guān)指標的計算

按照下列公式對生長性能相關(guān)指標進行計算：

式中，W0和Wt分別表示初始體重和終末體重(g)，N0和Nt分別代表初始實驗魚和終末實驗魚尾數(shù)，t為養(yǎng)殖周期(d)，F(xiàn)為攝食量(g)，L為體長(cm)。

1.6 腸道的消化酶活性測定

腸道組織的總蛋白(total protein，TP，貨號A045-4-2)、胰蛋白酶(trypsin，貨號A080-2-1)、淀粉酶(amylase，AMS，貨號C016-1-1)和脂肪酶(lipase，LPS，貨號C016-1-1)均使用南京建成生物工程研究所的試劑盒，按照相應(yīng)的說明書進行檢測。

1.7 腸道組織形態(tài)的分析

從固定液中取出腸道組織后，用PBS 緩沖液沖洗3 遍，用不同濃度的乙醇溶液逐級脫水，用二甲苯溶液進行透明處理，最后將樣品包埋固定于石蠟中。用切片機(ZEISS，德國)將石蠟組織塊連續(xù)切成5 μm 薄片后，用蘇木精-伊紅染色試劑盒(索萊寶，北京)進行染色。最終使用光學顯微鏡(Carl Zeiss Micro GmbH，德國)對切片進行觀察和拍照，用ZEN 2 lite 軟件測量腸絨毛長度、腸絨毛寬度和肌層厚度。

1.8 實時熒光定量PCR (qRT-PCR)

樣品的總RNA 用trizol 試劑(TaKaRa, 日本)提取后，分別用分光光度計(Nano Drop 2 000C)和1%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA 的濃度和質(zhì)量。使用PrimeScript? RT Reagent 試劑盒(TaKaRa, 日本)去除基因組DNA 并反轉(zhuǎn)錄。用LightCycler 480 儀器(Roche，瑞士)測定所有基因的mRNA表達水平，反應(yīng)體系為：5 μL 2×ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix (諾唯贊，中國)，0.3 μL正向引物和0.3 μL 反向引物，0.1 μL cDNA 模板和4.3 μL 無菌水。擴增程序為：95 °C 下3 min，95 °C 下30 s，循環(huán)40 次。以18SrRNA(18S)作為內(nèi)參，具體引物序列如表2 所示。

表2 實時熒光定量PCR 引物序列Tab. 2 The primers of qRT-PCR

1.9 腸道菌群 16S rRNA 測序

對黃河鯉腸道內(nèi)容物樣本進行 16SrRNA測序分析，該工作由上海派森諾生物科技股份有限公司執(zhí)行。原始序列通過質(zhì)量初篩后，按照index和Barcode 進行文庫和樣本劃分，并去除barcode 序列。通過QIIME2 dada2 的分析流程進行序列OTU 聚類。采用QIIME2 的classify-sklearn 算法進行物種注釋分析(https: //github.com/QIIME2/q2-feature-classifier)。使用QIIME2 (2019.4)軟件，對未抽平的OUT 數(shù)據(jù)進行抽平處理，分析菌群alpha 多 樣 性 (Chao1 index、 Observed species、Shannon index 和Simpson index)。依據(jù)序列物種分類學注釋的結(jié)果，統(tǒng)計所有樣本在門水平和屬水平的分布情況。最后使用R 語言和pheatmap 軟件包，根據(jù)豐度排名前15 的差異菌屬制作物種組成熱圖。

1.10 數(shù)據(jù)分析

用SPSS 23.0 軟件(IBM，美國)對實驗數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗分析(students't-test)，結(jié)果用平均值±標準誤(mean±SE)表示。用GraphPad 6.02軟件(GraphPad Software Inc.，美國)進行圖形表示。OFO 組與FO 組的獨立方差t檢驗結(jié)果用星號 “*” 表示，T0.4、T0.8 和T1.2 組與OFO 組的獨立方差t檢驗結(jié)果用井號 “#” 表示。顯著性水平設(shè)為P＜0.05，用 “*” 或 者 “#” 表示。極 顯 著 水 平 設(shè) 為P＜0.01，用 “**” 或者 “##” 表示。

2 結(jié)果

2.1 生長性能

相比于FO 組，OFO 組的FBW、WGR、SGR和FE 均顯著降低(P＜0.05)。對比OFO 組，T0.4組和T0.8 組中上述指標均顯著得到提高(P＜0.05)，T1.2 組的FE 和FBW 也顯著上升(P＜0.05)。各組之間的SGR 和CF 沒有顯著差異(P＞0.05) (表3)。

表3 各實驗組黃河鯉生長性能Tab. 3 Growth performance of C. carpio in all experimental groups

2.2 抗氧化相關(guān)基因表達水平

與氧化魚油組相比，添加0.8%?；撬峥娠@著提高腸道組織中g(shù)px和grmRNA 表達水平(P＜0.05)。肝胰臟中抗氧化相關(guān)基因表達結(jié)果顯示，與正常魚油組相比，氧化魚油顯著下調(diào)了grmRNA的表達(P＜0.05)。與氧化魚油組相比，添加3 種不同濃度的牛磺酸均顯著上調(diào)grmRNA 的表達(P＜0.05)。各處理組中，T0.4 組肝胰臟sod和gpxmRNA 表達水平最高，顯著高于OFO 組(P＜0.05)。另外，肝胰臟keap1 mRNA 表達水平在T0.8 組和T1.2 組中顯著低于其在OFO 組中的表達水平(P＜0.05) (圖1)。

圖1 各實驗組黃河鯉腸道(a)和肝胰臟(b)抗氧化相關(guān)基因的相對表達量Fig. 1 Relative expression levels of antioxidant-related genes in the intestinal (a) and hepatopancreas (b) of C. carpio in every group

2.3 腸道消化酶活性

OFO 組中的脂肪酶和淀粉酶活性分別顯著(P＜0.05)和極顯著(P＜0.01)低于FO 組，說明氧化魚油降低了黃河鯉的消化能力。相比于OFO 組，脂肪酶活性在添加?；撬岷缶鶚O顯著提高(P＜0.01)。胰蛋白酶活性在T0.8 組達到最高水平，并極顯著高于OFO 組(P＜0.01) (表4)。

2.4 腸道組織形態(tài)

飼料中添加氧化魚油破壞了中腸組織結(jié)構(gòu)的完整性，補充?；撬峥删徑庋趸~油對中腸組織結(jié)構(gòu)的破壞(圖版)。相比于FO 組，OFO 顯著降低了中腸絨毛高度、絨毛寬度以及肌層厚度(P＜0.05)。反之，補充?；撬岷笊鲜鲋笜司岣?，其中，添加1.2% ?；撬峥娠@著增加腸絨毛高度和寬度(P＜0.05)，添加0.8%?；撬峥娠@著增加中腸肌層厚度(P＜0.05) (表5)。

表5 各實驗組黃河鯉腸絨毛高度、寬度和肌層厚度Tab. 5 Intestinal villus height, intestinal villus width and muscle thickness of C. carpio in all experimental groups μm

圖版 各實驗組黃河鯉中腸組織結(jié)構(gòu)圖1～5 分別代表FO、OFO、T0.4、T0.8 和T1.2 組；A 和B 分別代表腸絨毛高度和肌層厚度。Plate Midgut tissue morphological structure of C. carpio in every group 1-5 respectively represent FO, OFO, T0.4, T0.8 and T1.2 groups; A and B represent intestinal villus height and muscular thickness, respectively.

2.5 腸道菌群

FO、OFO、T0.4、T0.8 和T1.2 組OTU 數(shù)目分別為8 647、6 285、5 668、7 995、6 547 個，其中共有的 OTU 數(shù)目為314 個，各自獨有的OTU數(shù)目分別為8 333、5 971、5 354、7 681 和6 233個(圖2)。分析黃河鯉腸道菌群α-多樣性指數(shù)發(fā)現(xiàn)， OFO 組Observed species 指 數(shù) 和Simpson 指數(shù)顯著低于FO 組(P＜0.05)，Shannon 指數(shù)極顯著低 于FO 組(P＜0.01)。相 比 于OFO 組， Shannon 指數(shù)在T0.8 組中顯著增高(P＜0.05)，Chao1 指數(shù)在T0.8 組和T1.2 組均顯著提高(P＜0.05)。補充?；撬岷驩bserved species 指數(shù)均高于OFO 組(P＞0.05) (圖3)。

圖2 黃河鯉腸道微生物 OTU 韋恩圖Fig. 2 OTU Venn diagram of intestinal microbiota in C. carpio

圖3 黃河鯉腸道微生物α 多樣性Fig. 3 Alpha-diversity of intestinal microbiota in C. carpio

黃河鯉的腸道微生物在門水平上主要由厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)和擬桿菌門(Bacteroidetes)組成(圖4-a)。與正常魚油組相比，氧化魚油組厚壁菌門(從60.98%下降到20.18%)、放線菌門(從11.06%下降到5.56%)、擬桿菌門(10.00%下降到4.10%)的相對豐度顯著降低，而變形菌門(從8.58%上升到57.13%)的相對豐度顯著上升。在屬水平上，氣單胞菌屬(Aeromonas)和乳酸菌屬(Lactobacillus)為豐度最高的屬(圖4-b)。

圖4 在門(a)和屬(b)水平上的黃河鯉腸道微生物相對豐度Fig. 4 Relative abundance of intestinal species of C. carpio at phylums (a) and genus (b) levels

為了進一步比較不同處理組間的物種組成差異，篩選出豐度排名前15 的差異菌屬并制作了相對豐度熱圖(圖5)。結(jié)果顯示，OFO 組中梭桿菌屬(Fusobacterium)、 氣單胞菌屬、梭菌屬(Clostridium)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、芽孢桿菌屬(Bacillu)的相對豐度比FO 組高，而乳酸菌屬、別樣棒菌屬(Allobaculum)、普雷沃氏菌屬(Prevotella)、鯨桿菌屬(Cetobacterium)、布勞特氏菌屬(Blautia)、擬桿菌屬(Bacteroides)、阿克曼氏菌屬(Akkermansia)的相對豐度比FO 組低。補充0.8%?；撬岷?，梭桿菌屬、氣單胞菌屬、分枝桿菌屬、梭菌屬的豐度均顯著降低，乳酸菌屬、別樣棒菌屬、布勞特氏菌屬、普雷沃氏菌屬、阿克曼氏菌屬、擬桿菌屬、鯨桿菌屬的豐度均明顯得到提高。另外，在氧化魚油飼料中補充4%～12%?；撬岷?，腸道中芽孢桿菌屬和不動桿菌屬的豐度均明顯降低。

圖5 黃河鯉腸道菌群中差異菌屬的聚類熱圖藍色代表相對豐度較高，顏色越深表示相對豐度越高；紅色代表相對豐度較低，顏色越深代表相對豐度越低。Fig. 5 Clustering heat map of differential bacterial genera in the gut microbiota of C. carpio Blue represents the relative abundance is higher, the darker the color the higher the relative abundance; red represents lower relative abundance, and darker colors represent lower relative abundance.

3 討論

3.1 ?；撬峥商岣咧|(zhì)氧化飼料飼喂下黃河鯉的生長性能

在本研究中，使用脂質(zhì)氧化日糧飼喂黃河鯉后，會表現(xiàn)出較低的成長性能和飼料效率。這與在其他水生動物中的報道基本一致[4,15]。抑制生長的原因可能是脂質(zhì)氧化過程中產(chǎn)生的醛類、酮類和酸類等有害物質(zhì)降低了飼料的營養(yǎng)價值，從而降低黃河鯉的飼料效率，導致生長性能下降[15]。脂質(zhì)氧化產(chǎn)生的有害物質(zhì)會引起體內(nèi)氧化應(yīng)激，破壞動物生理穩(wěn)態(tài)，抑制生長[5]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，在脂質(zhì)氧化飼料中補充牛磺酸會促進黃河鯉的生長性能，提高飼料效率。與本研究結(jié)果一致的是，在高植物蛋白飼料[10]、高碳水化合物飼料[8]及正常配合飼料[16]中補充一定量的?；撬幔筛纳扑a(chǎn)動物的生長性能。牛磺酸促進生長的能力可能歸因于其對抗氧化能力的提高和腸道消化酶活性的增強[9]。

3.2 ?；撬峥筛纳浦|(zhì)氧化飼料飼喂下黃河鯉的抗氧化水平

抗氧化能力與生長密切相關(guān)，可以反映水生動物的健康狀況[17]。在抗氧化防御系統(tǒng)中，谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)可以保護機體抵抗氧化應(yīng)激，是重要的抗氧化酶，并受到相應(yīng)基因的調(diào)控[18]。有研究表明，氧化脂質(zhì)飼料飼喂虹鱒12 周后，顯著降低了其肝胰臟cat、gpx等抗氧化相關(guān)基因表達水平[19]。此外，氧化魚油飼料對黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)的腸道帶來了嚴重的氧化損傷，降低了sod和catmRNA 表達水平，抑制了抗氧化酶的活性[20]。?；撬嶙鳛橐环N抗氧化劑，可以顯著降低氧化魚油對魚類組織的氧化損傷[6]。飼料中添加?；撬峥梢蕴岣唿S鰭棘鯛(Acanthopagrus latus)的生長速率，同時提高魚的抗氧化能力和消化酶活性[21]。在本研究中，脂質(zhì)氧化飼料降低了肝胰臟grmRNA 的表達水平，但是補充?；撬崽岣吡烁我扰K和腸道組織中g(shù)px和grmRNA 表達水平。這表明在脂質(zhì)氧化飼料中補充?；撬峥梢愿纳泣S河鯉的抗氧化性能，進而有利于魚體健康。

3.3 ?；撬峥商岣咧|(zhì)氧化飼料飼喂下黃河鯉的腸道消化能力

消化酶是指消化系統(tǒng)和消化腺分泌的酶，可促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，是反映魚類消化能力、營養(yǎng)狀況和生長性能的重要指標[22]。脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶是魚類腸道的主要消化酶。脂肪酶可促進腸道對食物中脂肪的消化和吸收，尤其是三酰甘油[23]。淀粉酶參與膳食碳水化合物的分解，其活性取決于魚類的食性[24]。胰蛋白酶在蛋白質(zhì)水解過程中起關(guān)鍵作用，同時也參與氨基酸的消化過程[24]。在對半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)幼魚的研究中發(fā)現(xiàn)，魚類生長性能與胰蛋白酶和脂肪酶的活性密切相關(guān)[25]。在本研究中，氧化魚油可顯著抑制魚類腸道中淀粉酶和脂肪酶的活性，推測這可能是降低黃河鯉生長性能的主要原因。在對尼羅羅非魚[5]和羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)[26]的研究中也得到類似的結(jié)果。在本研究中，添加?；撬岷罂娠@著提高消化酶活性，緩解脂質(zhì)氧化飼料對脂肪酶和淀粉酶活性的抑制作用。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加?；撬峥梢蕴岣唿S河鯉腸道消化能力，促進飼料中碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)的分解，從而提高飼料利用率，最終提高魚類的生長性能[9]。有理由推測，消化酶活性的增強提高了食物的消化率，從而提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，這可部分解釋?；撬崽岣呱L性能的原因。

3.4 ?；撬峥删徑庵|(zhì)氧化飼料對黃河鯉腸道組織的損傷

腸道是魚類消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，其消化水平與組織形態(tài)和微生物組成密切相關(guān)[27]。腸道絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度是評估腸道健康狀態(tài)和功能的重要指標，腸絨毛面積越大，腸道吸收面積就越大，機體的消化吸收能力也就越強[28]。本研究發(fā)現(xiàn)，氧化魚油降低了黃河鯉腸道絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度，這表明飼料中氧化魚油可破壞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，減少營養(yǎng)物質(zhì)吸收的表面積。在對尼羅羅非魚[5]的研究中也發(fā)現(xiàn)，氧化魚油飼料可降低腸絨毛的高度和寬度。對團頭魴(Megalobrama amblycephala)[15]的研究表明，氧化魚油飼料明顯損傷了腸道組織結(jié)構(gòu)。進一步研究發(fā)現(xiàn)，補充牛磺酸可提高腸絨毛高度和寬度，改善腸道組織形態(tài)。與本研究結(jié)果一致的是，在高脂肪日糧中添加?；撬?，顯著增加了黃鱔腸道絨毛的長度，減輕了高脂飲食對腸道物理屏障的損傷[29]。?；撬崽砑咏M中鯉的腸道組織形態(tài)明顯得到改善，說明?；撬嵊行У鼐徑饬搜趸~油對腸道的損傷，能夠更好地促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，這些結(jié)果與消化酶活性測定結(jié)果一致。

3.5 ?；撬峥删徑庵|(zhì)氧化飼料對黃河鯉造成的腸道菌群紊亂

腸道微生物組被生動地描述為宿主的外部器官或第二基因組[30]，通過影響宿主腸道功能從而影響宿主健康，在動物宿主的營養(yǎng)、免疫和防御功能中發(fā)揮著重要作用[31]。Alpha 多樣性是判斷腸道微生物群落動態(tài)平衡的重要指標之一，其中Observed species 和Chao1 指數(shù)分別表示微生物群落的OTU 數(shù)和物種豐度。微生物群落的多樣性常用Simpson 和Shannon 指數(shù)來表征。在本研究中，脂質(zhì)氧化飼料顯著降低了腸道微生物群落的Observed species、Shannon 和Simpson 指數(shù)，表明脂質(zhì)氧化飼料可降低腸道菌群的物種多樣性和豐度，這與對黃鱔的研究結(jié)果一致[12]。在本研究中，補充?；撬峥擅黠@提高腸道菌群物種豐度和多樣性。進一步分析菌群的具體組成發(fā)現(xiàn)，黃河鯉的優(yōu)勢菌門主要由變形菌門和厚壁菌門組成，這與對大菱鲆(Scophthalmus maximus)的研究結(jié)果相一致[32]。有研究表明，變形菌門的相對豐度增加與腸道疾病和菌群失調(diào)密切相關(guān)[33]。厚壁菌門和擬桿菌門的大部分微生物具有分解碳水化合物的能力，參與食物的消化吸收和代謝，可提高宿主的消化能力[28]。與正常魚油組相比，氧化魚油組中變形菌門的豐度大幅度提升，而擬桿菌門和厚壁菌門的豐度卻明顯下降，初步證明脂質(zhì)氧化飼料可改變黃河鯉腸道菌群的組成。

條件致病菌和益生菌的比例失調(diào)，會破壞腸道的穩(wěn)定狀態(tài)，誘導各種腸道疾病的發(fā)生[32]。有報道稱，乳酸菌是一種益生菌，能夠產(chǎn)生丁酸，廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中，具有提高生長性能、免疫力、抗氧化能力和抗病能力的作用[34]。鯨桿菌屬能產(chǎn)生維生素B12，在一定程度上可抑制病原菌的繁殖，增強機體的免疫能力，是鯉腸道的優(yōu)勢菌群[35]。阿克曼氏菌能促進鯉的糖原合成和糖酵解相關(guān)基因的表達，提高葡萄糖的轉(zhuǎn)運能力[36]。普雷沃氏菌可協(xié)助分解蛋白質(zhì)和碳水化合物，提高機體對糖類的吸收和利用[37]。擬桿菌屬則參與腸道的消化過程，可以分泌大量蛋白以分解多糖和代謝糖類物質(zhì)[38]。氣單胞菌是鯉腸道中最常見的致病菌，魚類感染后會出現(xiàn)敗血癥、腸炎和皮膚潰爛等疾病，嚴重威脅魚類的健康[39]。不動桿菌和分枝桿菌是大多數(shù)魚類的條件致病菌，會威脅魚類的機體健康[40]。本研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)氧化飼料可降低乳酸菌屬、普雷沃氏菌屬、鯨桿菌屬、阿克曼氏菌屬和擬桿菌屬的豐度，提升不動桿菌屬、氣單胞菌屬和分枝桿菌屬的豐度，這說明脂質(zhì)氧化飼料會減少有益菌豐度，增加條件致病菌豐度，導致腸道菌群紊亂。在對雜交石斑魚[褐點石斑魚(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍帶石斑魚(E.lanceolatus)♂] 的研究中得到相反的結(jié)果，在脂質(zhì)氧化飼料的應(yīng)激下，乳酸菌的豐度不僅沒有減少反而增加[41]。造成這一現(xiàn)象的原因可能是腸道菌群通過增加乳酸菌含量來應(yīng)對腸道的氧化應(yīng)激，但具體機制有待進一步研究。本研究表明，在氧化脂質(zhì)飼料中添加?；撬峥苫謴?fù)黃河鯉腸道菌群組成，改善脂質(zhì)氧化飼料帶來的腸道菌群紊亂。這一結(jié)果與?；撬嵩邳S鱔腸道菌群中的研究結(jié)果一致[12]。

綜上所述，脂質(zhì)氧化飼料可抑制黃河鯉的生長，降低抗氧化和消化能力。然而，補充適量?；撬峥梢源龠M黃河鯉的生長性能、提高抗氧化和消化能力。此外，?；撬峥赏ㄟ^提升有益菌豐度，降低條件致病菌豐度來緩解氧化脂質(zhì)誘導的腸道組織損傷和腸道菌群的紊亂，維持腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。本研究中，結(jié)合生長性能、消化水平、腸道形態(tài)學指標和腸道菌群組成，在氧化魚油飼料中的?；撬徇m宜添加劑量為0.4%～0.8%。

（作者聲明本文無實際或潛在的利益沖突）