肖雷,蔣亞新,許家亮,李海春

(信陽市中心醫(yī)院 腫瘤外科三病區(qū),河南 信陽 464200)

腹腔鏡切除術(shù)為治療早期原發(fā)性肝癌的主要手段,可將腫瘤完整切除并保留足夠維持功能的肝組織,但由于肝臟具有特殊的供血功能,使得癌細(xì)胞極易附著在血管內(nèi)壁,導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,影響患者預(yù)后[1-2]。因此,探究與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后有關(guān)的指標(biāo)具有重要意義。研究表明,輔助性T淋巴細(xì)胞亞群與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其中Th1、Th2細(xì)胞因子的分泌平衡對免疫功能起到主要介導(dǎo)作用,在抗腫瘤免疫、腫瘤免疫逃逸等方面發(fā)揮重要作用[3]。推測Th1/Th2細(xì)胞因子的表達(dá)與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)患者的預(yù)后具有一定關(guān)系?；诖?本研究通過對比原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療患者術(shù)前、術(shù)后Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)情況,探討Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用前瞻性研究,選取2018年12月至2021年12月于信陽市中心醫(yī)院擬行腹腔鏡手術(shù)的原發(fā)性肝癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》[4]中原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)Ⅰ期及Ⅱa期;(3)符合腹腔鏡手術(shù)指征且同意手術(shù);(4)患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他惡性腫瘤;(2)已接受過抗腫瘤治療;(3)合并肝、腎等器官功能不全;(4)妊娠期或哺乳期;(5)合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病;(6)合并精神、認(rèn)知障礙。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過(20230415)。

1.2 手術(shù)方法

所有患者術(shù)前均接受血常規(guī)、心電圖等檢查排除手術(shù)禁忌,并接受CT或MRI檢查明確切除平面及體積,在氣管插管全身麻醉下接受手術(shù)?；颊呷⊙雠P位,于臍下5～6 cm處做1 cm切口,將套管置入并建立二氧化碳?xì)飧?將腹壓設(shè)定在15 mmHg并維持,置入腹腔鏡探查病灶手術(shù)可行性,明確病變位置并初步評估大小;確定手術(shù)可行性并確定預(yù)切線后,在腹腔鏡引導(dǎo)下于左右上腹部分別置入2個(gè)套管作主、副操作孔;使用超聲刀沿預(yù)切線將肝實(shí)質(zhì)及周圍部分正常肝組織離斷,并應(yīng)用電凝刀或縫扎法對出血點(diǎn)進(jìn)行止血操作;將切除標(biāo)本沿切口取出后清洗斷面,檢查無出血后噴灑生物蛋白膠并放置腹腔引流管。

1.3 資料收集及指標(biāo)檢測

(1)統(tǒng)計(jì)所有患者一般資料,包括性別、年齡、體重指數(shù)、分期(Ⅰa期、Ⅰb期、Ⅱa期);(2)檢測術(shù)前、術(shù)后1周Th1細(xì)胞因子、Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平以及外周血Th1、Th2細(xì)胞頻數(shù),并計(jì)算Th1/Th2比值。具體檢測方法:所有患者均于清晨接受空腹靜脈血清檢查,抽取4 mL靜脈血,以8 cm離心半徑、4 000 r·min-1離心10 min,將離心后血清置于-80 ℃冰箱進(jìn)行保存,于室溫解凍后取2 mL采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測Th1型細(xì)胞因子[干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]、Th2細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)],另取200 μL外周血加入等體積1640培養(yǎng)液等比稀釋,分別加入各細(xì)胞因子單克隆抗體混勻并洗滌后,采用流式細(xì)胞儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司,型號BriCyte E6)檢測Th1、Th2細(xì)胞頻數(shù),計(jì)算Th1/Th2比值。

1.4 預(yù)后判定

所有患者術(shù)后均接受門診隨訪,每3個(gè)月隨訪1次。將經(jīng)影像學(xué)檢查且經(jīng)由活檢病理確診復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,且經(jīng)由活檢病理確診的患者判定為復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,與隨訪期間因癌癥死亡的患者共同納入為預(yù)后不良組;將剩余患者納入預(yù)后良好組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后情況

在1 a隨訪期間,92例患者23例出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或病死,納入預(yù)后不良組;69例患者病情穩(wěn)定,未出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,納入預(yù)后良好組。

2.2 一般資料

兩組患者性別、年齡、體重指數(shù)對比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);預(yù)后不良組Ⅱa期患者占比高于預(yù)后良好組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料對比

2.3 Th1細(xì)胞因子、Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平對比

兩組術(shù)前、術(shù)后1周的IFN-γ、IL-10對比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);預(yù)后不良組術(shù)前、術(shù)后1周TNF-α均低于預(yù)后良好組,IL-4高于預(yù)后不良組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 術(shù)前和術(shù)后1周兩組Th1細(xì)胞因子、Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平對比

2.4 Th1、Th2細(xì)胞頻數(shù)及Th1/Th2對比

兩組術(shù)前、術(shù)后1周的Th1、Th2細(xì)胞頻數(shù)對比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),預(yù)后不良組術(shù)前、術(shù)后1周的Th1/Th2均低于預(yù)后良好組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 術(shù)前和術(shù)后1周兩組Th1、Th2細(xì)胞頻數(shù)及 Th1/Th2對比

2.5 TNF-α、IL-4、Th1/Th2與預(yù)后相關(guān)性分析

將原發(fā)性肝癌患者腹腔鏡手術(shù)前、術(shù)后1周的IL-4、TNF-α、Th1/Th2作為自變量(連續(xù)變量),將患者隨訪預(yù)后情況作為因變量(有序分類變量:預(yù)后良好=0,預(yù)后不良=1),經(jīng)點(diǎn)二列相關(guān)性分析顯示,原發(fā)性肝癌患者腹腔鏡手術(shù)預(yù)后與術(shù)前、術(shù)后1周的IL-4水平呈正相關(guān)關(guān)系(r>0,P<0.05),與術(shù)前、術(shù)后1周的TNF-α、Th1/Th2水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r<0,P<0.05)。見表4。

表4 原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)患者預(yù)后與TNF-α、IL-4、 Th1/Th2的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

由于肝組織內(nèi)有豐富的血竇,腫瘤細(xì)胞極易侵犯門靜脈分支,形成癌栓導(dǎo)致肝內(nèi)散播并通過人體循環(huán)轉(zhuǎn)移至各個(gè)部位,原發(fā)性肝癌患者腹腔鏡切除術(shù)后極易出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,影響預(yù)后[5]。因此,若能盡早識別術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)并進(jìn)行早期干預(yù),或可在一定程度上降低復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移發(fā)生率。有研究表明,機(jī)體免疫功能與腫瘤細(xì)胞的出現(xiàn)、生長及發(fā)展密切相關(guān),Th細(xì)胞為參與免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞,包括Th1、Th2兩個(gè)不同亞群,若二者失衡,可導(dǎo)致免疫功能失調(diào),進(jìn)而影響機(jī)體抗腫瘤免疫功能[6-7]?；诖?推測Th1/Th2細(xì)胞因子與原發(fā)性肝癌腹腔鏡切除術(shù)治療預(yù)后具有一定相關(guān)性。

本研究結(jié)果表明,原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療后Th1型、Th2型細(xì)胞因子表達(dá)水平均降低,并且與預(yù)后良好患者比較,預(yù)后不良患者存在IL-4高表達(dá)情況,且經(jīng)點(diǎn)二列相關(guān)性分析表明IL-4表達(dá)與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后呈負(fù)相關(guān)性。分析其原因,IL-4為活化的Th2細(xì)胞分泌的具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子,主要介導(dǎo)體液免疫反應(yīng),可直接作用于腫瘤細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞生長,并能夠促進(jìn)Th2的極化反應(yīng)并維持其免疫反應(yīng),降低效應(yīng)T細(xì)胞的腫瘤殺傷活性進(jìn)而損害患者自身的腫瘤免疫功能[8-9]。部分原發(fā)性肝癌患者在腹腔鏡手術(shù)治療后仍有腫瘤細(xì)胞存在于病灶周圍的微血管,此時(shí)IL-4水平的升高表明效應(yīng)T細(xì)胞的腫瘤殺傷活性受到抑制,腫瘤細(xì)胞得以進(jìn)一步發(fā)展[10]。因此,IL-4高表達(dá)與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)患者治療預(yù)后有關(guān)。

本研究還顯示,與預(yù)后良好患者比較,預(yù)后不良患者存在TNF-α、Th1/Th2低表達(dá)情況,且經(jīng)點(diǎn)二列相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)TNF-α、Th1/Th2低表達(dá)與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后不良具有正相關(guān)性。分析其原因,TNF-α為一種多效細(xì)胞分子,當(dāng)TNF-α三聚體與靶細(xì)胞膜在胞外區(qū)結(jié)合可將抑制蛋白釋放,向細(xì)胞核傳遞信息,從而產(chǎn)生應(yīng)答,改變血管內(nèi)皮細(xì)胞特性,損傷內(nèi)皮細(xì)胞或?qū)е卵芄δ芪蓙y,造成腫瘤細(xì)胞的局部血流阻斷而發(fā)生出血、缺氧壞死[11-12]。因此,術(shù)后TNF-α低表達(dá)表明腫瘤細(xì)胞無法得到抑制,進(jìn)而影響腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后。Th1型細(xì)胞通過分泌IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,從而引起效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫,當(dāng)其細(xì)胞因子占優(yōu)勢可增強(qiáng)抗腫瘤免疫;而Th2細(xì)胞可通過分泌IL-4、IL-10等細(xì)胞因子引起較強(qiáng)的抗體反應(yīng)介導(dǎo)體液免疫,能夠?qū)h1細(xì)胞的增殖分化起到抑制作用,從而減弱機(jī)體抗腫瘤免疫功能,當(dāng)其細(xì)胞因子占優(yōu)勢可增強(qiáng)腫瘤免疫耐受[13]。正常情況下,機(jī)體內(nèi)的Th1、Th2型細(xì)胞處于動態(tài)平衡狀態(tài),當(dāng)Th1/Th2出現(xiàn)低表達(dá),表明Th1型細(xì)胞受到Th2型細(xì)胞的過度抑制,腫瘤免疫耐受增強(qiáng),抗腫瘤免疫功能減退[14]。因此,Th1/Th2表達(dá)與腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后密切相關(guān)。此外,本研究對比兩組患者一般資料發(fā)現(xiàn),預(yù)后不良組Ⅱa期患者占比高于預(yù)后良好組,提示分期可能與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后不良有關(guān),但考慮本研究目的,加之分期與預(yù)后的關(guān)系已有其他研究證實(shí),故而本研究未進(jìn)行進(jìn)一步相關(guān)性分析,這也為本研究局限性所在,未來可進(jìn)一步研究完善結(jié)論。

4 結(jié)論

與術(shù)前相比,原發(fā)性肝癌腹腔鏡手Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平降低,且術(shù)后低表達(dá)與原發(fā)性肝癌腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后不良具有相關(guān)性。