【摘"要】 目的：鑒定白薇與其常見偽品（大理白前、合掌消、徐長卿、老瓜頭和潮風(fēng)草），為白薇的理化鑒定提供理論依據(jù)，確保用藥安全。方法：通過化學(xué)方法和薄層色譜法，根據(jù)呈色反應(yīng)和熒光斑點的顏色、位置，鑒定白薇及其偽品。結(jié)果：蔓生白薇和直立白薇加入試劑后即顯深棕紅色和紫紅色，隨著溶劑揮干，顏色變深，最后變成深棕色和墨綠色，其他偽品與之大有不同；不同樣品薄層色譜的斑點位置及顏色有明顯的差異，白薇主要在Rf=0.56和Rf=0.75有紫紅色的熒光斑點，而混淆品斑點大都在起始位置有明顯的熒光斑點。結(jié)論：理化鑒定法可用于鑒定白薇的真?zhèn)危_保白薇質(zhì)量，并且為白薇藥用的真實性、有效性、安全性提供了科學(xué)理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】"白薇；真?zhèn)舞b別；理化鑒定；薄層色譜

【中圖分類號】R284.1"""【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A""""【文章編號】1007-8517（2024）01-0038-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.01.zgmzmjyyzz202401009

Physicochemical Identification of Cynanchum atratum Bunge and its Counterfeits

LI Xinpei"LI Jie"CUI Lijuan"ZHANG Kefan"WANG Kunjia"XU Lingchuan*

Shandong university of Chinese medicine， "Jinan 250355，China

Abstract：Objective To distinguish C. atratum Bunge.from its common counterfeits （C. forrestii Schlechter， C. amplexicaule （S. et. Z.） Hemsl.， C. komarovii Al. Iljinski， C. panniculatum（Bge.）Kitag. and C. ascyrifolium）. To expand the identification way and ensure the drug safety. Methods By chemical method and TLC， according to the color reaction and the color and location of fluorescent spots， C. atratum Bunge. and its counterfeits were identified. Results After the addition of reagent， the trailing and upright C. atratum Bunge. showed deep brown red and purplish red. With the solvent drying， the color became darker and finally became dark brown and dark green.The spots and colors of different samples in TLC showed obvious differences. C. atratum Bunge. mainly had purple red fluorescence spots at Rf=0.56 and Rf=0.75， while most of the mixed product spots had obvious fluorescence spots at the starting position. Conclusion The physicochemical identification method can be used to identify the authenticity of C. atratum Bunge.， ensure the quality of C. atratum Bunge.， and provide a scientific theoretical basis for the authenticity， effectiveness and safety of the medicinal use of C. atratum Bunge..

Keywords：Cynanchum atratum Bunge; Authenticity Identification; Physical and Chemical Identification; Thin Layer Chromatography

藥用白薇為蘿藦科鵝絨藤屬植物直立白薇C.atratum Bunge.和蔓生白薇（《中國植物志》原植物名為變色白前）C.versicolor Bunge.的干燥根及根莖。味苦、咸，具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效［1］。自《神農(nóng)本草經(jīng)》記載起，迄今已有2000多年的用藥歷史，現(xiàn)仍為臨床常用藥，可用于治療各種炎癥?！睹耖g常用草藥匯編》記載，白薇可以“清肺熱，治吐血及老年咳嗽”。目前市場上白薇的混淆品很多，常見的有大理白前、合掌消、老瓜頭、徐長卿等。大理白前C.forrestii Schlechter為同科屬植物屬植物，其根具有清熱散邪、利尿、生肌止痛等功效，但其醇提物具有一定的細(xì)胞毒性［2］。同科屬植物合掌消C.amplexicaule （Sieb.et Zucc.） Hemsl.全草可祛風(fēng)、消腫、行氣；根有行氣活血、解毒的功效［3］。徐長卿C.paniculatum（Bunge） Kitagawa也為其同科屬的中藥，有祛風(fēng)化濕，止痛等功效。同科屬中藥老瓜頭C.komarovii Al.Iljinski.具有活血鎮(zhèn)痛的作用［4］，但其全株有毒，應(yīng)慎用。潮風(fēng)草C.ascyrifolium具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效，有研究［5-6］表明其含有C₂₁甾類，有很好的抗炎活性及免疫抑制作用。白薇及其偽品的藥理作用、功效等都有很大的差別，若不慎混用，會造成嚴(yán)重的臨床問題。

目前，白薇常用的鑒定方法是性狀鑒定和顯微鑒定［7-9］，何芳等［10］對白薇及5種混淆品的微性狀及顯微鑒別進(jìn)行了詳細(xì)的研究與分析。但對于藥材粉末通過肉眼觀察難以鑒別，在顯微觀察時有些特征結(jié)構(gòu)很難找到，而理化鑒定方法就可用于輔助鑒定。理化鑒定也是中藥藥材鑒別的常用方法［11］，但少有研究在鑒定白薇及其偽品時會使用理化鑒定法。蘇永林［12］在鑒定白薇、徐長卿和白前這三種藥材時，采用性狀鑒定的同時，輔以性狀鑒定將其區(qū)分。

本實驗找了白薇常見的5種偽品和兩種不同基原的白薇進(jìn)行鑒定，采用化學(xué)定性法和薄層色譜法2種方法對其進(jìn)行鑒定。化學(xué)定性法采用醋酐-濃硫酸（Liebermann-Burchard）反應(yīng)［13］，通過其含有的甾體皂苷［14］與醋酸酐的反應(yīng)，與偽品進(jìn)行鑒別。本實驗旨在從理化鑒別方向?qū)ふ诣b定白薇及其混淆品比較簡便快速的方法，此外薄層色譜法還可定性定量的反應(yīng)中藥的鑒別特征，可謂其定量鑒定提供參考，為白薇的準(zhǔn)確、快速鑒別及安全用藥提供依據(jù)，把控質(zhì)量的“大門”，對于中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展具有重要作用。

1"材料與方法

1.1"實驗對象"實驗所用白薇（直立白薇、蔓生白薇）及偽品（大理白前、合掌消、老瓜頭、徐長卿、潮風(fēng)草）的樣品經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)徐凌川教授鑒定。樣品編號及來源信息見表1。白薇對照品（121518-201604，SXPB-3Y5X）購買自中國食品藥品檢定研究院。

1.2"試劑"乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；甲苯（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；二氯甲烷（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；乙酸乙酯（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；乙酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；濃硫酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；乙酸酐（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。以上試劑皆為分析純。

1.3"儀器"超KQ-2508聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；抽濾裝置（布氏燒瓶、布氏漏斗）；移液槍（100-1000 μL，大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司）；H-35循環(huán)水冷卻器（萊伯泰科）；薄層色譜硅膠G板（青島海洋化工有限公司）；DZW-D-1電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；FA12048電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；WFH-203C四用紫外分析儀（上海馳唐實業(yè)有限公司）；毛細(xì)管（0.5 mm業(yè)有限公司），華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；GZX-9023MBE電熱鼓風(fēng)干燥機(jī)（上海博訊）。

1.4"方法

1.4.1"化學(xué)定性法"利用皂苷顯色反應(yīng)的原理，將材料分為7組，編號1～7分別為：直立白薇、蔓生白薇、大理白前、合掌消、老瓜頭、徐長卿、潮風(fēng)草。各取藥材粉末0.5 g，加入配制的70%的乙醇溶液，超聲30min，冷卻后抽濾，得到濾液。取濾液0.5 mL在水浴鍋上蒸干，蒸干后的殘渣中加入1 mL的醋酐溶解，并加入1滴濃硫酸，分時間段觀察顏色變化。觀察提取液顏色、蒸干加液后立即顯色、揮發(fā)15min、30min以及揮干后樣品呈色情況，并拍照記錄。

1.4.2"薄層色譜法"將藥品編號1～8為：直立白薇、蔓生白薇、大理白前、合掌消、徐長卿、老瓜頭、白薇對照品、潮風(fēng)草。7號為白薇對照品，起標(biāo)準(zhǔn)對照的作用。8號為潮風(fēng)草，看其是否為四種偽品中的一種。參照文豪等［15］的白薇薄層鑒定的改進(jìn)方法進(jìn)行實驗，改變展開劑。

供試品制備：取1 g藥材粉末，加入30 mL甲醇，超聲處理20min，放冷，過濾，蒸干濾液，取2 mL甲醇超聲溶解殘渣制成樣品溶液。對照品制備方法同上。依據(jù)薄層色譜法（通則0502）試驗［1］，提前將薄層板置于110 烘箱內(nèi)活化30min，吸取上述兩種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上。甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15∶[KG-*3/5]5∶[KG-*3/5]7∶[KG-*3/5]0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，均勻噴以硫酸乙醇溶液（1→10），105 ℃烘箱加熱至斑點顯色清晰。在此期間要注意觀察，防止薄層板糊化。分別在日光下和365 nm紫外下觀察斑點的顏色、位置。

2"結(jié)果

2.1"化學(xué)定性法"白薇及其偽品的理化鑒定的顯色變化情況如下，超聲抽濾后獲得的提取液顏色如圖1所示；蒸干后加入醋酐和濃硫酸立即顯色如圖2所示；放置15min后顯色如圖3所示；放置30min后顯色如圖4所示；溶液揮干后顯色如圖5所示。

由圖1、圖2、圖3、圖4和圖5可知，未加試劑前提取液的顏色相似，但大理白前顏色呈淡紫紅色，可明顯鑒別出。觀察加入醋酐和濃硫酸后溶液的變化，以及放置后隨著溶劑揮發(fā)，溶液顏色也逐漸發(fā)生改變。提取液加入溶劑后溶液顏色發(fā)生變化。直立白薇提取液由深棕紅色到溶劑揮干后變成深棕色，揮干后顏色加深；蔓生白薇的提取液由紫紅色，放置揮發(fā)30min后變成墨綠色，其中甾體皂苷含量可能較高；大理白前提取液加入試劑后由淡紫色變成了淺棕紅色，放置揮發(fā)30min后變成黃綠色，揮干后變成了棕黃色；合掌消提取液加入試劑后，溶液顏色由變紅加深變?yōu)樽虾谏軇]干后變成了橄欖色；老瓜頭提取液加入試劑后變成了淺橙黃色，隨著試劑的揮干，顏色加深；徐長卿提取液的顏色變化與老瓜頭的有些相似；潮風(fēng)草提取液加入試劑后呈深棕色，放置揮發(fā)30min后變成深咖布色，揮干后變成棕黃色。可見這些藥材在容積揮干后基本呈現(xiàn)深棕色或棕黃色。結(jié)果見表2。

因此，利用化學(xué)定性法的醋酐-濃硫酸反應(yīng)的顏色變化可以將白薇及其5種偽品區(qū)別開，因白薇中含有甾體皂苷，顏色偏綠。此外藥材的質(zhì)量、皂苷的含量等也會影響顏色的深淺及變化。

2.2"薄層色譜"白薇及其偽品的薄層色譜圖如圖6所示?？梢?，日光下和紫外365 nm下樣品的斑點情況。

由圖6可知，對照品（7號樣）能清晰地觀察到兩個斑點，在Rf=0.56和Rf=0.75兩處有明顯的紫紅色熒光斑點。直立白薇（1號樣）和蔓生白薇（2號樣）與對照品在同樣的位置有相同的熒光斑點。大理白前（3號樣）在初始位置有明顯的熒光斑點；合掌消（4號樣）在Rf=0.25處有熒光斑點，Rf=0.56處有深棕色的斑點；徐長卿（5號樣）初始位置（Rf=0.25）有熒光斑點，Rf=0.56處無斑點；老瓜頭（6號樣）整條色譜帶呈藍(lán)色熒光，且在初始位置（Rf=0.25）有明顯的熒光斑點；潮風(fēng)草（8號樣）譜帶與6號樣類似。譜帶總結(jié)見表3。

3"討論

白薇及其5種偽品可以通過理化鑒定的顯色現(xiàn)象及譜帶特征等進(jìn)行區(qū)分。本實驗利用醋酐-濃硫酸反應(yīng)和薄層色譜法，對白薇及其5種混淆品進(jìn)行鑒定，明確正品白薇的皂苷反應(yīng)現(xiàn)象及薄層譜帶特性。較傳統(tǒng)的顯微鑒別和性狀鑒別，理化鑒定方法可以更直觀地反映白薇與其偽品的差異，還可以應(yīng)對一些白薇粉末或藥材難以直觀鑒別的情況，也為白薇藥材的拓展應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

由結(jié)果可知，白薇與5種混淆品的皂苷呈色反應(yīng)差異明顯，可知正品白薇中甾體皂苷含量較高，顏色反應(yīng)偏綠色。但因其放置時間或藥材質(zhì)量有不同，顏色可能不甚明顯，但蔓生白薇皂苷反應(yīng)現(xiàn)象明顯，可與其他偽品區(qū)分開。樣品薄層色譜圖的斑點顏色及位置也有明顯的差異，直立白薇和蔓生白薇在Rf=0.56均有紫紅色斑點，Rf=0.75處也均有熒光斑點，也可用于鑒定其余偽品。

此外，白薇的兩個基原植物——蔓生白薇［16］和直立白薇［17］，其顯色反應(yīng)及薄層色譜也不全然相同。在化學(xué)定性反應(yīng)中，直立白薇由深棕紅色變成深棕色，蔓生白薇由紫紅色變成墨綠色，顯然，蔓生白薇中甾體皂苷的含量可能更高一些；在薄層色譜中，直立白薇和蔓生白薇在同樣的位置有相同的熒光斑點，但蔓生白薇Rf=0.56處的斑點略顯棕色，且在Rf=0.42處有一不甚明顯的熒光亮段，通過這一現(xiàn)象在鑒別不同基原白薇時可輔助條件，將兩者甄別。

本實驗為白薇鑒定建立了兩種穩(wěn)定、可靠、簡單易行的理化鑒定方法，豐富了白薇偽品鑒定方法。隨著科學(xué)技術(shù)進(jìn)步，也涌現(xiàn)出許多新型的鑒定技術(shù)，例如新型科學(xué)技術(shù)的DNA條形碼鑒定方法、分子鑒定方法、現(xiàn)代分析技術(shù)等，準(zhǔn)確度更高，擴(kuò)大了檢測樣本范圍；同時樣本部分受損也不會影響識別結(jié)果，但因其價格昂貴等特點并不常用。為確保中藥藥用的安全性和有效性，促進(jìn)中醫(yī)藥事業(yè)的磅礴發(fā)展，未來還需對中藥鑒定技術(shù)進(jìn)行更深入地研究。開發(fā)新型鑒定技術(shù)和鑒定方法，對中藥品種的真實性、純度、品質(zhì)優(yōu)良等加以鑒定，為中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展保駕護(hù)航。

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（收稿日期：2023-04-04"編輯：陶希睿）

作者簡介：李欣培（1999—），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為中藥鑒定及資源利用。E-mail：lixinpei0702@163.com

通信作者：徐凌川（1962—），男，漢族，本科，教授，研究方向為生藥鑒定與品質(zhì)評價及生藥、中藥質(zhì)量控制與資源開發(fā)工作。