摘 要：通過對中藥發(fā)酵和烏蘭十三味湯的研究現(xiàn)狀的綜述確定烏蘭十三味湯發(fā)酵的最佳方法以及烏蘭十三味湯發(fā)酵工藝研究的必要性。通過中國知網(wǎng)、萬方、維普等三大中文期刊全文數(shù)據(jù)庫，采用文獻(xiàn)調(diào)查和數(shù)據(jù)庫檢索相結(jié)合，查找中藥發(fā)酵工藝研究的相關(guān)文獻(xiàn)，并分析烏蘭十三味湯發(fā)酵工藝研究的最佳方法，同時通過對烏蘭十三味湯的研究綜述及分析，明確烏蘭十三味湯發(fā)酵工藝研究的必要性。研究已知烏蘭十三味湯可以顯著改善原發(fā)性高血壓患者的預(yù)后，并且中藥發(fā)酵可提高有效成分提取率、增強(qiáng)藥物療效等。

關(guān)鍵詞：烏蘭十三味湯;中藥發(fā)酵;研究進(jìn)展

中圖分類號：R29;R92" 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" 文章編號：1673-260X（2024）02-0027-04

腸道菌群與疾病的發(fā)生、轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切。諸多研究證實發(fā)酵后的中藥、蒙藥所含菌屬與腸道有效菌群發(fā)生協(xié)同作用，可以抑制腸道有害菌群的繁殖，從而提升藥物的整體療效。經(jīng)過發(fā)酵后的中藥、蒙藥有效成分含量提升，同時還可產(chǎn)生新的有效物質(zhì)。因此，本文通過對中藥發(fā)酵的研究現(xiàn)狀和烏蘭十三味湯的研究進(jìn)展的綜述確定烏蘭十三味湯發(fā)酵的最佳方法以及烏蘭十三味湯發(fā)酵工藝研究的必要性。為發(fā)揮烏蘭十三味湯治療疾病的療效，遴選中藥發(fā)酵最佳工藝，為烏蘭十三味湯發(fā)酵工藝研究提供借鑒。

1 中藥發(fā)酵技術(shù)的研究進(jìn)展

1.1 發(fā)酵的歷史沿革及現(xiàn)狀

《神農(nóng)本草經(jīng)》最早記錄了中藥發(fā)酵釀造技藝，它是一種將經(jīng)過凈制或前處理過程的產(chǎn)品，在特定的溫度和濕度條件下，通過細(xì)菌和酶的催化劑相互作用，使其發(fā)泡，形成黃白色霉衣的方式[1]。傳統(tǒng)中醫(yī)藥食品發(fā)酵釀造技藝源于古代，它利用自然界中的多菌種混合，其中包含半夏曲、神曲、百藥煎等，這些中國優(yōu)良傳統(tǒng)曲劑一直流傳至今。但是，傳統(tǒng)發(fā)酵工藝存在效率低下、周期長、不確定因素較多、缺少精確度和可把控的科學(xué)流程等問題。而現(xiàn)代中醫(yī)藥發(fā)酵制備工藝技術(shù)，是在傳承優(yōu)良傳統(tǒng)中醫(yī)藥發(fā)酵制備工藝技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代微生物學(xué)、發(fā)酵工藝等專業(yè)技術(shù)，創(chuàng)新發(fā)展而成的一種不受自然條件限制的中藥現(xiàn)代化制藥工藝技術(shù)，具有更高的精確度和可靠性[1，2]。通過采用特定菌種和定向發(fā)酵技術(shù)，現(xiàn)代中草藥生產(chǎn)工藝可以得到有效控制，從而確保產(chǎn)品質(zhì)量。

1.2 發(fā)酵方式

1.2.1 固體發(fā)酵

固體發(fā)酵技藝源遠(yuǎn)流長，它是在中國傳統(tǒng)的制曲技藝的基礎(chǔ)上演變而來的，以中醫(yī)藥為原料，通常由一種或多種益生菌組成，在特定的環(huán)境條件下進(jìn)行發(fā)酵從而提升藥效[3，4]。研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過酵母菌固體發(fā)酵處理，新鮮黨參的有效成分含量和抗氧化活性得到了顯著提升[5]。通過使用白耙齒菌固態(tài)發(fā)酵物，對受腺嘌啶、鹽酸乙胺丁醇和酵母膏等誘發(fā)的小鼠實施了高尿酸血癥干擾工作，并監(jiān)測了它們血清肌酐和尿酸的濃度，結(jié)果顯示白耙齒菌固體發(fā)酵物對小鼠高尿酸血癥以及尿酸鈉誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎具有一定的治療作用[6]。因此，固體發(fā)酵具有操作簡單、環(huán)境條件易于控制、不易感染雜菌等優(yōu)點，使得藥物的有效性得到充分發(fā)揮。

1.2.2 液體發(fā)酵

液體發(fā)酵是一種現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)，依據(jù)抗生素生產(chǎn)工藝，將生長情況良好的菌絲接種到含有一定比例的中藥材培養(yǎng)基中，然后將培養(yǎng)基置于適宜的環(huán)境條件下進(jìn)行發(fā)酵[7]。細(xì)腳蟲草經(jīng)液體發(fā)酵，胞外多糖的產(chǎn)量顯著提升了37.89%，而胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量增加了24.59%，純化后的蛋白質(zhì)脫除率超過75%[8]。茯苓胞外多糖物質(zhì)可以明顯促使高胰島素抵抗HepG細(xì)菌的體內(nèi)葡萄糖耗盡，加快糖原制備，但對細(xì)菌生長沒有抑制作用[9]。因此液體發(fā)酵茯苓胞外多糖有卓越的抗糖作用，其制造要求簡單、產(chǎn)量見效快、產(chǎn)量可觀、智能化水平高，能夠進(jìn)行大量的機(jī)械化持續(xù)制造，為臨床提供更有效的抗糖方案。盡管液態(tài)發(fā)酵技術(shù)具有許多優(yōu)勢，但仍存在一些缺點，如能耗高、設(shè)備結(jié)構(gòu)復(fù)雜、成本高昂以及后期污染嚴(yán)重等。

1.2.3 中藥雙向發(fā)酵

采用中藥材作為藥性基質(zhì)來替代傳統(tǒng)發(fā)酵菌微生物營養(yǎng)基質(zhì)，微生物改變中藥材的藥性，中藥材中的活性與營養(yǎng)成分為微生物提供碳源、氮源、微量元素等，在此過程中微生物的活性物質(zhì)也會受中藥材影響而改變，它們之間相互作用相互影響，從而產(chǎn)生新的成分和新的藥效，因此稱為雙向發(fā)酵[10]。研究發(fā)現(xiàn)，山藥-蛹蟲草雙向乳酸菌可以顯著提升菌質(zhì)的抗氧化能力[11]。趙崇妍則構(gòu)建了蟬擬青霉和黃芪的雙向乳酸菌系統(tǒng)，通過實驗證明，這種乳酸菌方法可以有效改善菌質(zhì)的抗氧化性能，隨著黃芪藥物中黃酮濃度的提高，黃芪藥渣中黃酮和皂苷的濃度也有所提升[12]。因此，雙向發(fā)酵具備高效率、易生成新物質(zhì)新功效等優(yōu)點，但由于菌類與藥物相互的重復(fù)組合，使得發(fā)酵產(chǎn)物和結(jié)構(gòu)變得更加復(fù)雜，而且發(fā)酵過程中藥用菌對藥性基質(zhì)的影響機(jī)理仍然不明確。

1.3 中藥發(fā)酵的作用研究

（1）提高有效成分提取率、增強(qiáng)藥物療效。中醫(yī)通過微生物發(fā)酵，形成各種生物酶，當(dāng)中纖維素酶能夠通過分解植物細(xì)胞壁的纖維素，增加藥品的高效成分透過率和溶出率，進(jìn)而提升藥效[12]。研究發(fā)現(xiàn)，以山楂、澤瀉和決明子作為培養(yǎng)基，并以紅曲菌株M為菌種，可以生產(chǎn)出含有傳統(tǒng)中醫(yī)減脂成分，又含有他汀類降脂成分的中藥，這種發(fā)酵工藝技術(shù)可以高效地控制大鼠食源性高脂血癥的產(chǎn)生，同時還可以顯著降低高脂血癥大鼠的脂質(zhì)[13]。

（2）產(chǎn)生新的活性物質(zhì)，擴(kuò)大適應(yīng)證。通過酶催化反應(yīng)，中藥發(fā)酵過程中的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使得藥物更容易被人體吸收，從而最大限度地發(fā)揮其藥理活性。通過使用紅曲發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)丹參中總皂苷濃度提高了40%，人參皂苷Rb1或Rb逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楹币姷腞g3，這為丹參的臨床應(yīng)用提供了新的思路[14]。馬宗敏等選用鮮活黃芪植株作為素材，通過馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）平板培育消毒組織塊，隔離單菌落，并通過黃芪藥粉選擇性培養(yǎng)法進(jìn)行初篩，隨后進(jìn)行黃芩苷發(fā)酵轉(zhuǎn)移試驗復(fù)篩，最后通過高效液相色譜法（HPLC）分析轉(zhuǎn)移產(chǎn)物，篩選得到黃芩內(nèi)生菌[15]。Penicillium sp. R3這種菌能夠?qū)ⅫS芩苷轉(zhuǎn)化為更具活性和更容易被人體吸收的黃芩素。

（3）改善中藥口感。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過微生物發(fā)酵處理后，代謝產(chǎn)生的多種高級醇、有機(jī)酸或具有香味的酯類，如異戊醇、乳酸、檸檬酸、乙酸異戊酯等，這些成分在保證中藥藥效有效發(fā)揮的同時極大地改善了中藥產(chǎn)品的口感和風(fēng)味[2]?，F(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)復(fù)合菌劑發(fā)酵后能改善中藥廢渣的氣味、質(zhì)地和顏色[16]。也有研究發(fā)現(xiàn)，中藥經(jīng)過微生物發(fā)酵預(yù)消化和轉(zhuǎn)化，可改善中藥湯劑的口感[17]。

2 烏蘭十三味湯的研究進(jìn)展

2.1 烏蘭十三味湯的來源及功能主治

蒙藥烏蘭十三味湯載自《觀者之喜》第五章收錄的“烏蘭-13（別名為瑪日欽朱素木或白脈紅湯）”。1984年載入《內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)》，方名為“伊赫-烏蘭-13湯”[18]。1998年升入國家標(biāo)準(zhǔn)，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（蒙藥分冊），方名改為烏蘭十三味湯散或烏蘭-13，由土木香、苦參、懸鉤子木、山柰、訶子、梔子、川楝子、茜草、枇杷葉、紫草茸、橡子、紫草、金蓮花等十三種藥材構(gòu)成的氣微香，味苦、澀，紅棕色粉末，具有清血熱之功效。主治血熱上盛、頭痛、目赤、高血壓癥[19]。

2.2 有效成分研究及臨床研究現(xiàn)狀

組方中單藥的有效成分研究報道較多，沒有針對整方的有效成分研究報道，本文整理了方中11味藥物的主要有效成分，如表1所示。

臨床藥理學(xué)對烏蘭十三味湯整方研究發(fā)現(xiàn)，具有治療高血壓病、冠心病的功效，還可以保護(hù)腦缺血再灌注損傷[31-33]。目前臨床上廣泛用于心腦血管疾病、血液系統(tǒng)、增殖性腫瘤、皮膚病等[34]。

3 討論

烏蘭十三味湯主要用于降血壓、改善腦缺血再灌注損傷的治療。實際臨床當(dāng)中依據(jù)“同病異治，異病同治”的理念，烏蘭十三味湯用于治療很多西醫(yī)病種。例如高血壓、高脂血癥、過敏性紫癜、真性紅細(xì)胞增多癥、血小板增多癥等。因此，烏蘭十三味湯開發(fā)應(yīng)用前景良好，有必要對烏蘭十三味湯療效機(jī)制、有效成分、制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等進(jìn)行深入研究。為此本文圍繞烏蘭十三味湯的有效成分、臨床療效、臨床藥理學(xué)，以及可能實現(xiàn)的制備工藝改進(jìn)，例如發(fā)酵工藝研究等方面進(jìn)行了探討，同時為了提供可靠的發(fā)酵工藝方法，對于目前中藥發(fā)酵工藝研究進(jìn)行了綜述。

中藥發(fā)酵技術(shù)是一種將現(xiàn)代生物學(xué)原理與傳統(tǒng)中藥結(jié)合起來的新型方法，經(jīng)過發(fā)酵以后有效成分、藥物療效都有一定的提升，并且還可能產(chǎn)生新的活性物質(zhì)，擴(kuò)大適應(yīng)證、改善中藥口感等作用。

烏蘭十三味湯中活性成分最多的是黃酮類化合物、具有保護(hù)神經(jīng)、預(yù)防心肌缺血、降壓、改善記憶力減退、促進(jìn)胃潰瘍愈合、保護(hù)生殖組織、抗炎癥、抗腫瘤以及降血糖等藥理作用。它也是目前很多中蒙藥的共性有效成分，依據(jù)研究經(jīng)過發(fā)酵后黃酮類化合物的含量明顯提升。中草藥的有效成分大多包裹在細(xì)胞壁內(nèi)，微生物發(fā)酵可以針對不同成分構(gòu)成的壁結(jié)構(gòu)，分泌各種胞外酶，使其分解，從而提高有效成分的提取率、這對提高烏蘭十三味湯總體療效有很好的幫助。而烏蘭十三味湯中黃酮類化合物包括槲皮素、山柰酚、金合歡素、柳川魚黃素等，它主要存在于烏蘭十三味湯組方藥物苦參、土木香、懸鉤子木、山柰、川楝子、枇杷葉、金蓮花等多種單藥中。在蒙醫(yī)學(xué)理論上，苦參味苦、性寒，有清熱燥濕、消粘蟲、利尿等功效。土木香味苦，具有健脾和胃，行氣止痛，安胎等功能。而川楝子為楝科植物，味苦，性寒，具有疏肝泄熱，行氣止痛，消粘蟲等功效。枇杷葉味苦、性寒，具有清肺止咳，降逆止嘔功效。其主要有效成分還有三萜類化合物、它廣泛存在于烏蘭十三味湯組方藥物苦參、土木香、懸鉤子木、訶子、梔子、川楝子、枇杷葉中，具有降血糖、抗腫瘤、抗氧化、保肝等功效。

雖然，蒙藥方劑不以組方單藥或單體有效成分、化合物論其療效和功能主治，但目前對于藥物的療效機(jī)制探討依然遵循現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的有效成分評價方法，這是由于到目前為止還沒有探索出一條完全適合中蒙醫(yī)藥自身特點的科學(xué)研究方法。因此，在探索中蒙醫(yī)藥療效機(jī)制依然側(cè)重從有效成分著手研究，雖然不能完全反映中蒙醫(yī)藥的療效機(jī)制，但也起到了啟發(fā)和指引方向的作用，例如中蒙醫(yī)藥多靶點協(xié)同作用機(jī)制，分子復(fù)方蒙藥研發(fā)等。這也從側(cè)面證實了烏蘭十三味湯多靶點協(xié)同發(fā)揮作用的可能性，而經(jīng)過發(fā)酵后不僅可以提升其整體療效還有可能開發(fā)出新的有效成分、新的治療功效，有待下一步深入研究、開發(fā)利用。

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收稿日期：2024-01-15

通訊作者：布仁巴圖（1962-），男，蒙古族，內(nèi)蒙古通遼人，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師。研究方向：蒙醫(yī)內(nèi)科、蒙藥方劑配伍規(guī)律及臨床研究。

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（82274210）