郭鳳英 閆鳳杰 關金鳳 莫日根高娃 于海云

【摘 要】 目的：建立高效液相法測定金露梅中沒食子酸含量。方法：采用Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以甲醇-0.1 %磷酸（10∶90）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長273 nm，柱溫30 ℃，進樣量為10 μL。結果：沒食子酸在3.44～137.52 μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，相關系數(shù)r=1.000；平均回收率為99.4 %（RSD %=1.588 %）；6批不同產(chǎn)地金露梅中沒食子酸含量在3.156～11.537 mg/g之間。結論：所建立的高效液相法穩(wěn)定可靠，可用于金露梅中沒食子酸的含量測定。

【關鍵詞】 蒙藥材；金露梅；沒食子酸；高效液相；含量測定

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2024）02-0024-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402006

Determination of Gallic Acid in Mongolian Medicine Potentilla Fruticosa by HPLC

GUO Fengying YAN Fengjie GUAN Jinfeng Morigengaowa YU Haiyun

Tongliao Market Testing and Inspection Center，Tongliao 028000，China

Abstract：Objective To establish an high performance liquid chromatography method for determination of gallic acid in Mongolian medicine potentilla fruticosa.Methods The test was performed in Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）under the elution of methanol-0.1 % phosphoric acid（10∶90）.The flow rate was 1.0 ml/min and the wavelength was set as 273 nm.The column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 10 μL.Result The liner ranges of gallic acid fell into 3.44-137.52 μg/mL（r=1.000）.The average recovery of gallic acid was 99.4 %（RSD=1.588 %）.The determination of galllic acid in potentilla fruticosa from 6 places of origin fell into 3.156-11.537 mg/g.Conclusion The established method is simple，stable and reliable.It can be used for determination of gallic acid in Mongolian medicine potentilla fruticosa.

Keywords：Mongolian Medicine;Potentilla Fruticosa;Gallic Acid;HPLC;Contention Determination

金露梅（Potentilla fruticosa L.）又名“金老梅”“藥王茶”等，為薔薇科委陵菜屬落葉灌木，株高0.5～2 m，多分枝，羽狀復葉，花瓣黃色［1］。全株可入藥，具有清暑熱、益腦清心、健胃消食及預防心腦血管疾病等藥用功效［2］。沒食子酸為金露梅中活性成分之一［3］，具有抗炎、抗菌、抗病毒和抗腫瘤等多種生物活性［4-11］。目前未見對金露梅中沒食子酸含量測定的研究。本文以不同產(chǎn)地來源的金露梅為試驗藥材，建立其活性成分沒食子酸的高效液相含量測定方法，同時比較了不同產(chǎn)地的含量差異，為金露梅在臨床上的應用提供科學依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SHIMADZU LC-2030C 3D Plus 高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器，LabSolution 工作站）；Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；MS105DU型電子天平；DZKW-S-6數(shù)顯恒溫水浴鍋。

1.2 材料 沒食子酸對照品（批號：110831-201906，含量91.5 %，中國食品藥品檢定研究院）；水為高純水；甲醇為色譜純，鹽酸及磷酸均為優(yōu)級純。6批藥材均為自采，經(jīng)鑒定，均為金露梅（Potentilla fruticosa L.）。樣品來源見表1。

2 方法與結果

《中華人民共和國藥典》［12］所載藥材余甘子、五倍子、委陵菜和地榆與金露梅含有相同的藥效成分——沒食子酸，故本研究以其含量測定項下的色譜條件作為參考，經(jīng)反復對比試驗，從理論塔板數(shù)，分離效果，拖尾因子及出鋒時間等方面進行考察，最終采用以下色譜條件進行試驗。

2.1 色譜條件 Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；流動相為甲醇-0.1 %磷酸（10∶90）；流速為1.0 mL/min；檢測波長273 nm；柱溫30 ℃；進樣量為10 μL；記錄時間為20 min；理論板數(shù)按沒食子酸計算，不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液的制備 精密稱取沒食子酸對照品（含量91.5%）0.01252 g，置10 mL量瓶中，加50 %甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.146 mg/mL的沒食子酸對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取金露梅供試品粉末（過四號篩）0.1 g，置250 mL錐形瓶中，精密加入4 mol/L鹽酸溶液25 mL，稱定重量，于水浴上加熱回流60 min，冷卻，稱定重量，用4 moL/L鹽酸補足減失重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液過0.45 μm濾膜，即得。

2.3 線性關系考察 分別精密量取“2.2.1”項下的沒食子酸對照品儲備液30 μL、50 μL、100 μL、150 μL、300 μL、400 μL、500 μL、600 μL、1200 μL，置10 mL量瓶中，用4 mol/L鹽酸稀釋至刻度，搖勻，即得實際含沒食子酸分別為3.44 μg/mL、5.73 μg/mL、11.46 μg/mL、17.19 μg/mL、34.38 μg/mL、45.84 μg/mL、57.30 μg/mL、68.78 μg/mL、137.52 μg/mL系列濃度的對照品溶液。精密量取上述系列溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品濃度（μg/mL）為橫坐標X，以對照品峰面積為縱坐標Y，做線性回歸方程，得到Y=24561X-41022，r=1.000。表明沒食子酸在3.44～137.52 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系。如圖1所示。

2.4 精密度試驗 精密稱取內(nèi)蒙古阿爾山Sample-2樣品0.1013 g，按“2.2.2”項下的方法制成精密度試驗溶液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，重復進樣6次，測得峰面積的平均值為883641，RSD %為0.241 %，表明該方法的精密度良好。見表2。

2.5 穩(wěn)定性試驗 精密稱取內(nèi)蒙古阿爾山Sample-2樣品0.1016 g，按“2.2.2”項下的方法制成穩(wěn)定性試驗溶液，精密吸取10 μL，分別于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h注入液相色譜儀，測定峰面積。結果顯示24 h內(nèi)峰面積RSD %為0.348 %，表明該方法提取的樣品溶液在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。見表3。

2.6 重復性試驗 取約0.1 g內(nèi)蒙古阿爾山Sample-2樣品6份，精密稱定，按“2.2.2”項下的方法制成重復性試驗溶液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。依據(jù)2.3項中的線性回歸方程計算6份樣品中沒食子酸含量，結果顯示6份樣品中沒食子酸平均含量為9.261 mg/g，含量RSD %為0.675 %，表明該方法的重復性良好。見表4。

2.7 加標回收率試驗 取已知含量內(nèi)蒙古阿爾山Sample-2樣品（平均含量9.261 mg/g）6份，各約0.05 g，精密稱定，置250? mL錐形瓶中，分別精密加入沒食子酸對照品儲備液0.4 ml，按2.2.2項下的方法，制成加標回收溶液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。計算回收率，結果見表5，加標回收率平均值為99.4 %，RSD %為1.588 %。

2.8 不同產(chǎn)地樣品含量測定 取表1中6批產(chǎn)地藥材，按照2.2.2項下的方法，制成6批供試品溶液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，按外標法計算每批樣品中沒食子酸含量，結果見表6。從表中數(shù)據(jù)可以看出，6批產(chǎn)地的金露梅中，沒食子酸含量在3.156～11.537 mg/g之間，差異明顯。其中圖里河產(chǎn)地的含量約是蠻漢山產(chǎn)地的4倍。造成含量差別大的原因可能是生長環(huán)境不同，光照、土壤、水源及溫濕度等條件的差異，影響了金露梅植株的生長和代謝過程。

3 討論

參照《中華人民共和國藥典》2020年版一部“余甘子、五倍子、委陵菜和地榆”等藥材含量測定項下沒食子酸的測定方法［9］，以甲醇-0.1%磷酸（10∶90）為流動相，檢測波長273 nm，此條件下沒食子酸檢測靈敏度高，其它組分對目標峰無干擾，保留時間適宜，理論塔板數(shù)較高。

藥材粉末以4 moL/L鹽酸為提取溶劑，采用加熱回流方式提取，為保證沒食子酸提取完全，考察了回流30 min、60 min和120 min的提取含量，結果在回流60 min時含量已達到最高，故提取時間定為60 min。

含量測定結果顯示：6批產(chǎn)地金露梅中沒食子酸含量差異明顯，在3.156～11.537 mg/g之間。內(nèi)蒙古圖里河產(chǎn)地的金露梅中沒食子酸含量最高，在金露梅選購和臨床選用上可作為首選參考因素。

通過精密度、穩(wěn)定性、重復性和加標回收率試驗，結果表明該方法簡便易行，準確可靠，可作為金露梅中沒食子酸含量測定的方法。

參考文獻

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（收稿日期：2023-04-07 編輯：陶希睿）