張瑜++曾聰彥胡玉良++卓斌++陳健聰

【摘要】目的：建立腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1含量測(cè)定的方法，為其制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：采用C18色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水梯度洗脫；流速：10mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm。結(jié)果：三七皂苷R1進(jìn)樣量在005～03μg之間與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，r=09993，平均回收率9930%，RSD為074%（n=6）。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，可用于腦脈醒神膠囊制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】腦脈醒神膠囊；三七皂苷R1；HPLC；含量測(cè)定

【中圖分類(lèi)號(hào)】R9141【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）21-0004-03

Determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsules by HPLC

ZHANG YuZENG Congyan*HU YuliangZHUO BinCHEN Jiancong

Affiliated Zhongshan Hospital of Guangzhou University of TCM，Zhongshan 528401 ，China

Abstract：Objective To establish a method for the determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsule and control its quanlity. Methods Separation and determination of allantoin were accessed by using an C18 column and a mobile phase of acetonitrile- water gradient elution.The flow rate was 10mL/min，temperature at 25℃ and detection wavelength at 203nm. Results The linear range was 005～03μg，r=09993，marked recovety rate was 9930%，and RSD=074%（n=6）.Conclusion The method in this paper could provide an evidence for quality control of Naomai Xingshen Capsule.

Keywords：Naomai Xingshen Capsule；Notoginsenoside R1；HPLC；Content Determination

腦脈醒神膠囊系由三七、枳實(shí)、大黃、梔子、黃芩、桃仁、丹參等十七味中藥經(jīng)提取加工制成的膠囊劑，具有活血化瘀、化痰開(kāi)竅、通腑瀉熱、開(kāi)竅醒腦的功效，臨床用于腦外傷、中風(fēng)之神昏、頭暈頭痛、大便秘結(jié)等。其中三七為方中主藥，而三七皂苷R1又是三七中的主要活性成分之一。現(xiàn)代藥理研究表明，三七皂苷R1能改善微循環(huán)并適度延長(zhǎng)凝血時(shí)間，[1]是三七活血化瘀的有效成分，這與腦脈醒神膠囊活血化瘀功效一致，提示三七皂苷R1為該制劑中主要活性成分。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，研究建立了高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定該制劑中三七皂苷R1含量的方法現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

11儀器Agilent1260高效液相色譜儀；色譜柱：Venusil XBP C18（L）柱（250mm×46mm，5μm，Agela Technologies）。

[JP2]12材料三七皂苷R1對(duì)照品（批號(hào)：110745-200617，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；腦脈醒神膠囊（批號(hào)：20140313、20150302、20160130）。乙腈為色譜純（批號(hào)：AC-12960217，瑞典OCEANPAK公司）；甲醇為分析純（批號(hào)：1506031，西隴化工股份有限公司）。[JP]

2方法與結(jié)果

21色譜條件以十八烷基硅烷鍵全硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A ，水為流動(dòng)相 B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為10mL/min；柱溫為25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為 203nm；進(jìn)樣10μL。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰算應(yīng)不低于3000。

22對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取三七皂苷R1對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成每lmL含50μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

23供試品溶液制備取本品10粒，內(nèi)容物研細(xì)，精密稱(chēng)取約1g，置于塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱(chēng)定重量，放置過(guò)夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

24陰性干擾試驗(yàn)取缺三七陰性樣品，按照“23”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備缺三七陰性樣品溶液，再按“21”項(xiàng)下色譜條件分析，結(jié)果在與對(duì)照品保留時(shí)間相同的位置上無(wú)峰出現(xiàn)，表明腦脈醒神膠囊中其他成分對(duì)三七皂苷Rl的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

25線(xiàn)性范圍考察精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6μL，進(jìn)樣，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，三七皂苷R1對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為Y=47218X+11542，r=09993。結(jié)果表明三七皂苷R1進(jìn)樣量在005～03μg之間呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

26精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液按“21”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，三七皂苷R1峰面積的RSD為140%，結(jié)果表明精密度良好。

27重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)：20160130）6份，分別按“23”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣20μL，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果三七皂苷R1峰面積的RSD為120%，表明方法重現(xiàn)性良好。

28穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品（批號(hào)：20160130）適量，按“23”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，放置0、1、2、4、8、24h，分別進(jìn)樣20μL，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果三七皂苷R1峰面積的RSD為111%，表明樣品溶液室溫放置24h穩(wěn)定。

29回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的樣品（批號(hào)：20140313）6份，分別添加三七皂苷R1對(duì)照品適量，按“23”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，各進(jìn)樣10μL，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

210樣品含量測(cè)定取3個(gè)批號(hào)的樣品，按 “23”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取20μL進(jìn)樣，測(cè)定三七皂苷R1峰面積，根據(jù)峰面積用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法計(jì)算樣品含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

3討論

三七具有散瘀止血，消腫定痛的作用[2]，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表明其在抗凝血、抗冠心病、擴(kuò)張血管及保護(hù)腦損傷等方面作用明顯[3]，是腦脈醒神膠囊處方中具有活血化瘀作用的主要藥物，故建立其有效成分含量測(cè)定方法，可進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)腦脈醒神膠囊的整體質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)中供試品溶液的制備方法及色譜條件均參照2015年版《中國(guó)藥典》一部中三七含量測(cè)定項(xiàng)下的方法和條件[2]，流動(dòng)相曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水等度洗脫，結(jié)果分離效果均不佳，且分析時(shí)間較長(zhǎng)。后采甲醇-水、乙腈-水進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-水較甲醇-水分離效果好，也大大節(jié)省了分析時(shí)間，并能有效排除其他成分干擾，這與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的一致[4]。實(shí)驗(yàn)表明，采用文中方法測(cè)定腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1的含量重現(xiàn)性好，專(zhuān)屬?gòu)?qiáng)，穩(wěn)定可靠，方便快捷，可作為腦脈醒神膠囊的質(zhì)量控制方法之一。

參考文獻(xiàn)

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（編輯：梁志慶）