張應祥

（曲靖市馬龍區(qū)舊縣街道農業(yè)和農村綜合服務中心，云南 馬龍 655103）

彌勒苣苔（Paraisometrum mileense W.T.Wang），苦苣苔科，彌勒苣苔屬植物，是云南特有珍惜植物一個很特殊的單種屬。彌勒苣苔一般生長在海拔2 000～2 600 m的石灰?guī)r林內石壁上，僅分布于滇東南彌勒市及石林縣，被發(fā)現(xiàn)于石林縣石灰?guī)r山植物區(qū)系，是100年來首次在野外發(fā)現(xiàn)的該種活體植株。彌勒苣苔野外居群被再次發(fā)現(xiàn)，對于云南喀斯特地區(qū)物種多樣性、中國苦苣苔科植物的起源與分化、喀斯特地區(qū)生物多樣性保護等方面都將有重要研究和參考價值。我國苦苣苔科植物藥用歷史悠久，目前國內苦苣苔科植物研究基本上側重科研價值，如植物區(qū)系地理分布、系統(tǒng)進化、植物分類學等方面，其實用價值的應用仍為野生挖掘用作藥材，對該類植物具有觀賞價值等方面研究甚少。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

挑選成熟、健壯、無病斑的彌勒苣苔葉片，輕輕從葉柄基部取下，葉片切割方式用全葉插、兩段式切段和三段式切段3種。記錄成活率、生根所需時間、出現(xiàn)子株所需時間、每種葉段產生子株數(shù)及子株葉片數(shù)5方面的數(shù)據(jù)。

1.1.1 扦插葉片切割方式試驗

葉片切割方式包括全葉插、兩段式切割和三段式切割，目的是篩選扦插最適合的葉片切割方式。

1.1.2 不同扦插基質試驗

選擇扦插常用的草炭、蛭石和珍珠巖3種基質，混合為5種不同配比，篩選扦插最適基質。結合研究結果，尋找彌勒苣苔繁殖系數(shù)最高的扦插葉片切割方式和基質組合。

1.2 試驗過程

1.2.1 扦插葉片切割方式

（1）全葉插。即將完整葉片的葉柄插入基質約2 cm。扦插基質草炭、珍珠巖、蛭石體積比為1∶1∶1，分3組，每組15個插穗。

（2）兩段式切段。即將葉片自中間1/2處切開得到2段插穗，將留有葉柄的部分葉柄插入基質1～2 cm，葉片約45°角斜立；無葉柄部分將葉下部插入相同基質1～2 cm。上段、下段各分3組作為重復，每組15個插穗。

（3）三段式切段。即將葉片切為3段，帶葉柄部分的下段葉片將葉柄完全插入基質中，無葉柄部分（中、上段）將葉片下端插入基質1～2 cm。扦插基質同上。每個處理設3次重復，每個重復15盆。

1.2.2 扦插基質

將剛采摘下的葉片自中間1/2處切斷，然后將留有葉柄的部分葉柄完全插入基質，葉片斜立，無葉柄部分將葉片下端插入基質1～2 cm。以河沙為對照，設置5個處理，每個處理3個重復各15盆。5個處理基質配置比例（見表1）。扦插后第2周開始記錄成活率[100%×（成活株數(shù)/扦插株數(shù)）]、生根所需時間、出現(xiàn)子株所需時間、不同葉段產生子株數(shù)及子株葉片數(shù)等數(shù)據(jù)。

表1 彌勒苣苔不同扦插基質試驗處理方案

1.3 扦插管理

1.3.1 管理內容

所有扦插容器均為直徑6 cm的花盆，按照隨機區(qū)組排列放入保濕育苗盒（62.5 cm×35 cm×24 cm）中，貼上標簽做好標記。每盆澆透水后噴施0.2%多菌靈溶液消毒，蓋上育苗盒蓋子保濕。每次澆水使用育苗溫室噴霧系統(tǒng)，確保每個盆濕度相同，溫室內應嚴格控制澆水，保持盆土濕潤即可，注意通風，防止根系腐爛，濕度保持75%～95%。管理過程中注意病蟲害的發(fā)生，扦插管理時要保證基質排水和濕度，扦插過程維持空氣相對濕度90%以上，適當通風防止腐爛。

1.3.2 調查方法

扦插后第2周開始每天觀察記錄扦插生根和出苗情況。扦插結束時分離并記錄子株數(shù)，子株定植于120 mm花盆。

2 結果與分析

2.1 彌勒苣苔組培擴繁

對石林縣采集的彌勒苣苔種子采用無菌萌發(fā)，再用無菌小苗葉片作為外植體誘導不定芽。具體過程如下：

種子用75%乙醇消毒30 s后用0.1%升汞浸泡5 min，再用無菌水沖洗3次。種子播種在含有0.5%活性炭MS的基本培養(yǎng)基上，條件設定培養(yǎng)溫度（25±2）℃、光照強度20μmol/m2·s、光照時間12 h/d。20 d后種子開始萌發(fā)，萌發(fā)幼苗經過19周生長，葉片用來做外植體誘導不定芽。增殖培養(yǎng)基為MS + NAA 0.1 mg/L + 6-BA 2 mg/L。選擇分化出的不定芽高約1 cm、生長健壯的苗接種至生根培養(yǎng)基（0.5 MS + 0.5%活性炭）上，1周后可見葉片明顯增大且有根發(fā)生。6周后生根率達90%以上。將生根組培苗打開瓶蓋在瓶中過度3～5 d后，小心從培養(yǎng)器皿中取出，用水洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，栽入盛有不同基質配比的基質盆中，放入育苗箱中。放置在實驗室中，注意溫濕度管理。后期澆1/2霍格蘭營養(yǎng)液促進生長。

2.2 扦插葉片切割方式試驗

2.2.1 全葉插和兩段式試驗

本研究選用彌勒苣苔為試材，挑選成熟、健壯、無病斑的彌勒苣苔葉片，設全葉扦插、兩段式切段扦插和三段式切段扦插3個處理，每個處理3次重復，每次重復10片葉子。栽培基質采用原生地石灰土、草炭、珍珠巖體積比2∶1∶1，半個月后全葉插成活率100%，兩段式上段成活率73.3%，下段成活率100%。各處理生根特性（見表2），幼苗生長特性（見表3）。不帶葉柄的葉片上段扦插生根和子株出土所需要時間均短于帶葉柄的葉片下段或全葉插；葉片切割方式影響子株產生，不帶葉柄葉片切口大，生成子株較多。上半葉扦插生根時間明顯短于帶葉柄的下半葉和全葉插，出現(xiàn)子株的時間也明顯縮短，說明不帶葉柄有利于生根和出苗。全葉插出苗相對較慢但幼苗較肥大。

表2 全葉插和兩段式試驗生根特性比較

表3 全葉插和兩段式試驗幼苗生長特性比較

2.2.2 三段式葉插試驗

三段式葉插各10片葉，1個月后統(tǒng)計，上段和中段生根時間短于下段，但生根數(shù)量和最大根長均小于下段（見表4）。上段成活率76.2%，中段成活率85.7%，下段成活率100%。出現(xiàn)子株所需時間中段最短、下段最長。中段生成子株數(shù)較多，下段子株葉片數(shù)為3.2片，最大葉寬9.12 mm，在3種扦插方式中達到最大值，子株最大（見表5）。

表4 三段式試驗生根特性比較

表5 三段式試驗幼苗生長特性比較

3 討論與結論

3.1 試驗存在問題

（1）栽培環(huán)境溫度過高，濕度低，出現(xiàn)燒葉現(xiàn)象。葉片生根數(shù)少，吸水慢，有些基質透水性差，造成爛根及葉片腐爛，出現(xiàn)飛蟲。

（2）隊員缺少試驗操作能力，過程中因人為因素造成試驗誤差。

（3）試驗過程中沒有勤澆水，導致植株萎蔫或部分致死。

（4）試驗數(shù)據(jù)收集不夠，降低試驗結果的準確性。

總結經驗，開展試驗前要充分考慮試驗需要測定的項目，為降低誤差、估算誤差、提高精確度，試驗設計時要設置重復、隨機排列、局部控制。管理中要適當遮陰、通風，噴水霧提高空氣濕度。

3.2 討 論

通過葉片切割扦插試驗，初步探索珍稀瀕危植物彌勒苣苔的繁殖方法，以無菌種子萌發(fā)組培苗葉片切割扦插試驗，研究3種葉片切割處理方式對其子株產生數(shù)量的影響。葉插繁殖成苗時間短，開花時間早，較其他方法易操作實施、成本較低，易實現(xiàn)定量生產，并可以保持品種的遺傳穩(wěn)定性，目前該方法已經成為唇柱苣苔屬和報春苣苔屬植物最佳商業(yè)化快速繁殖方式。因此，在彌勒苣苔繁殖栽培中，可以利用兩段式或三段式葉插方法進行繁殖，本試驗結果將對彌勒苣苔的保護和引種栽培提供重要理論依據(jù)，具有較高的應用價值。

3.3 結 論

試驗結果表明，不帶葉柄的葉片上段或中段由于切口大，扦插生根和子株出土所需要時間均短于帶葉柄的葉片下段或全葉插，生成子株數(shù)也多，說明不帶葉柄有利于生根和出苗。扦插繁殖以葉片切段為好，根據(jù)葉片長短可兩段式切割扦插或三段式切割扦插，每段5 cm左右，可得到最佳扦插結果。結合以上試驗結果，彌勒苣苔繁殖采用兩段或三段式葉片切割扦插，繁殖系數(shù)最高，扦插苗質量最佳。