◎ 劉 璐,毛 震,崔倩倩,朱欣欣,賈松濤,趙林萍
(河南中標(biāo)檢測服務(wù)有限公司,河南 鄭州 450001)
金剛烷胺是一種廉價、高效的抗病毒藥物,曾用于禽流感的防治,但是過量使用金剛烷胺會對環(huán)境和人體產(chǎn)生嚴重危害[1]。氟蟲腈是一種廣譜殺蟲劑,曾在國內(nèi)被廣泛使用,但氟蟲腈會通過生物鏈富集最終對人體健康產(chǎn)生威脅[2]。金剛烷胺和氟蟲腈的常用檢測方法有液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫法和免疫層析法等[2-3]。本文采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞蛋中的金剛烷胺和氟蟲腈的含量,研究出同時提取雞蛋中金剛烷胺和氟蟲腈的前處理方法。
1.1.1 樣品
雞蛋,絞碎并均質(zhì),-18 ℃保存。
1.1.2 試劑
乙腈(色譜級)、氯化鈉(分析純)、無水硫酸鈉(分析純)、金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Dr.Ehrenstorfer GmbH)、金剛烷胺-D6(上海安譜璀世標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司)和4 種氟蟲腈及其代謝物混標(biāo)溶液(100 μg·mL-1,F(xiàn)int Standard)。
1.1.3 儀器
TSQ vanquish 超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源;天平:感量為0.01 g 和0.000 01 g;渦旋混合器;振蕩器;離心機;QuEChERS凈化管(COQ01002 型,深圳逗點生物科技有限公司);0.22 μm 微孔有機相濾膜。
1.2.1 溶液的配制
(1)金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 μg·mL-1)。精密稱取10 mg 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈溶解并定容至100 mL,-18 ℃保存。
(2)金剛烷胺內(nèi)標(biāo)工作液(1 μg·mL-1)。精密量取100 μg·mL-1的金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液100 μL 用乙腈溶解并定容至10 mL,-18 ℃保存。
(3)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(1 μg·mL-1)。準(zhǔn)確吸取100 μL 金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 μg·mL-1)和4 種氟蟲腈及其代謝物混標(biāo)溶液(100 μg·mL-1)用乙腈溶解并定容至10 mL,-18 ℃保存。
(4)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。吸取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL 于100 mL 容量瓶中,再分別加入金剛烷胺內(nèi)標(biāo)工作液0.50 mL,用乙腈定容,配制成濃度為0.20 ng·mL-1、0.50 ng·mL-1、1.00 ng·mL-1、2.00 ng·mL-1、5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1和20.00 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,含內(nèi)標(biāo)濃度為5.00 ng·mL-1,供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
1.2.2 測定步驟
①提取。稱取樣品5.00 g(精確到0.01 g)于50 mL離心管中,加入100 μL內(nèi)標(biāo)工作液,渦旋1 min,加入20 mL乙腈,2 g 氯化鈉,6 g 無水硫酸鈉,振蕩10 min,8 000 r·min-1離心5 min,取上清液,備用[4-6]。②凈化。取1 mL 備用液,加入QuEChERS 凈化管,渦旋混勻1 min,8 000 r·min-1離心3 min,取上清液,過0.22 μm微孔濾膜,供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。將試樣溶液注入儀器中,以保留時間和離子豐度比雙重定性,以金剛烷胺與金剛烷胺-D6峰面積的比值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線定量,以氟蟲腈峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。
1.3.1 色譜條件
(1)金剛烷胺色譜條件。色譜柱:BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm);流動相:0.1%甲酸水溶液(A)+0.1%甲酸甲醇溶液(B);梯度洗脫:0 ~0.50 min,80%A+20%B;1.25 ~3.25 min,15%A+85%B;4.00 ~5.00 min,80%A+20%B;流速:0.2 mL·min-1;柱溫:25 ℃;進樣量:2 μL。
(2)氟蟲腈色譜條件。色譜柱:BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm);流動相:水(A)+乙腈(B);梯度洗脫:0 ~0.5 min,80%A+20%B;1.0 ~3.0 min,5%A+95%B;3.5 ~5.0 min,80%A+20%B;流速:0.25 mL·min-1;柱溫:25 ℃;進樣量:2 μL。
1.3.2 質(zhì)譜條件
電噴霧離子源,金剛烷胺為正離子掃描,氟蟲腈為負離子掃描,多反應(yīng)監(jiān)測方式;毛細管溫度:350 ℃;噴霧器溫度:350 ℃;鞘氣壓力:40 Arb;輔助氣壓力:15 Arb;噴霧電壓:3 500 V;監(jiān)測離子對、碰撞氣能量和去簇電壓參數(shù)見表1。
表1 待測物定性離子對,定量離子對、碰撞能量、錐孔電壓參數(shù)表
質(zhì)譜條件優(yōu)化了待測物及對應(yīng)內(nèi)標(biāo)物,提高了靈敏度,得到了最優(yōu)離子對以及碰撞能(見表1)和離子色譜圖(見圖1)。
圖1 金剛烷胺離子對、氟蟲腈、金剛烷胺-D6 離子對色譜圖
在1.3.2 質(zhì)譜條件下測定,結(jié)果表明金剛烷胺、氟蟲腈在0.20 ~20.00 ng·mL-1有良好的線性關(guān)系。相關(guān)系數(shù)R均大于0.999 0。本方法的金剛烷胺定量限為2 μg·kg-1;氟蟲腈定量限為5 μg·kg-1。金剛烷胺、氟蟲腈線性方程和相關(guān)系數(shù)見表2。
表2 金剛烷胺和氟蟲腈的線性方程和相關(guān)系數(shù)表
準(zhǔn)確稱取空白雞蛋樣品,加入混合中間工作液,分別添加濃度水平為2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、20 μg·kg-1的金剛烷胺、氟蟲腈溶液,進行6 次平行實驗,計算加標(biāo)回收率和精密度。由表3 可知,樣品回收率在85.0%~103.3%,精密度在1.6%~8.9%。
表3 精密度和加標(biāo)回收率結(jié)果表
本研究建立了一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中金剛烷胺和氟蟲腈的方法。通過試驗優(yōu)化統(tǒng)一前處理過程,經(jīng)檢測樣品回收率在85.0%~103.3%,精密度在1.6%~8.9%,結(jié)果準(zhǔn)確,靈敏度高,此方法更適合于實驗室日常檢測。