王勝濤 徐淑娟 貴鵬 李欣嚀 隋玉涵 李朝旭

基金項(xiàng)目：廣西醫(yī)療衛(wèi)生重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（桂衛(wèi)教科發(fā)〔2022〕4號(hào)）和廣西醫(yī)療衛(wèi)生重點(diǎn)培育學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（桂衛(wèi)教科發(fā)〔2022〕4號(hào)）

摘要：目的? 探討葡萄球菌核酸酶樣結(jié)構(gòu)蛋白1（SND1）對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，及其通過SLC7A11調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞鐵死亡的作用機(jī)制。方法? 檢測(cè)人成骨細(xì)胞hFOB1.19以及骨肉瘤細(xì)胞系Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1的表達(dá)水平。采用小干擾RNA敲減骨肉瘤細(xì)胞HOS和143B中SND1的表達(dá)（si-SND1），采用CCK8法、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)探究SND1的表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響；調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞中SND1以及SLC7A11基因的表達(dá)，探究SND1通過SLC7A1基因?qū)侨饬鲨F死亡介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果? 骨肉瘤細(xì)胞Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平顯著高于人成骨細(xì)胞hFOB1.19（P均<0.01）。與對(duì)照組比較，si-SND1轉(zhuǎn)染顯著降低HOS和143B細(xì)胞中SND1的表達(dá)水平（P均<0.01），且細(xì)胞活性顯著降低，克隆形成數(shù)量顯著減少，細(xì)胞遷移和侵襲能力顯著降低（P均<0.001）。鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin促進(jìn)骨肉瘤HOS和143B細(xì)胞凋亡，而抑制劑Ferrostatin-1刺激上調(diào)細(xì)胞活性（P均<0.001）。敲減SND-1后使用Erastin可進(jìn)一步降低骨肉瘤HOS和143B細(xì)胞活性，而使用Ferrostatin-1刺激后可顯著恢復(fù)細(xì)胞活性（P均<0.001）；Erastin處理后，si-SND1組細(xì)胞中鐵離子和丙二醛表達(dá)增高，谷胱甘肽表達(dá)降低（P均<0.001）。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，敲減SND1可以明顯抑制143B裸鼠移植瘤的瘤體質(zhì)量（P<0.001）。敲減SND1后骨肉瘤HOS和143B細(xì)胞中SLC7A11的表達(dá)水平顯著減少（P均<0.001），且鐵死亡水平升高（P<0.001，P=0.020）。結(jié)論? 骨肉瘤細(xì)胞中SND1表達(dá)顯著增高，其可能通過上調(diào)SLC7A11的表達(dá)抑制鐵死亡，進(jìn)而促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞活性。

關(guān)鍵詞：骨肉瘤；葡萄球菌核酸酶樣結(jié)構(gòu)蛋白1；鐵死亡

中圖分類號(hào)： R738.1? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A? 文章編號(hào)：1000-503X（2024）01-0011-08

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.15746

Effect of Staphylococcal Nuclease and Tudor Domain Containing 1/SLC7A11 on the Occurrence and Development of Osteosarcoma by Inhibiting Ferroptosis

WANG Shengtao1，XU Shujuan2，GUI Peng3，LI Xinning4，SUI Yuhan4，LI Zhaoxu1

1Department of Joint Surgery and Sports Medicine，Nanxishan Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guilin，Guangxi 541002，China

2Department of Hematology，Affiliated Hospital of Guilin Medical University，Guilin，Guangxi 541001，China

3Department of Trauma and Hand Surgery，Nanxishan Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guilin，Guangxi 541002，China

4Graduate School，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200，China

Corresponding author：LI Zhaoxu? Tel：0773-3830680，E-mail：lzxpds@126.com

ABSTRACT：Objective? To investigate the effect of staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1（SND1） on the biological function of osteosarcoma cells and decipher the mechanism of SND1 in regulating ferroptosis in osteosarcoma cells via SLC7A11.Methods? Human osteoblasts hFOB1.19 and osteosarcoma cell lines Saos-2，U2OS，HOS，and 143B were cultured，in which the expression level of SND1 was determined.Small interfering RNA was employed to knock down the expression of SND1（si-SND1） in the osteosarcoma cell line HOS and 143B.The CCK8 assay kit，colony formation assay，and Transwell assay were employed to examine the effect of SND1 expression on the biological function of osteosarcoma cells.Furthermore，we altered the expression of SND1 and SLC7A11 in osteosarcoma cells to investigate the effect of SND1 on osteosarcoma ferroptosis via SLC7A11.Results? The mRNA and protein levels of SND1 in Saos-2，U2OS，HOS，and 143B cells were higher than those in hFOB1.19 cells（all P<0.01）.Compared with the control group，transfection with si-SND1 down-regulated the expression level of SND1 in HOS and 143B cells（all P<0.01），decreased the viability of HOS and 143B cells，reduced the number of colony formation，and inhibited cell invasion and migration（all P<0.001）.The ferroptosis inducer Erastin promoted the apoptosis of HOS and 143B cells，while the ferroptosis inhibitor Ferrostatin-1 improved the viability of HOS and 143B cells（all P<0.001）.After SND-1 knockdown，Erastin reduced the viability of HOS and 143B cells，while Ferrostatin-1 restored the cell viability（all P<0.001）.After treatment with Erastin in the si-SND1 group，the levels of iron and malondialdehyde were elevated，and the level of glutathione was lowered（all P<0.001）.The results of in vivo experiments showed that SND1 knockdown inhibited the mass of the transplanted tumor in 143B tumor-bearing nude mice（P<0.001）.Knocking down the expression of SND1 resulted in down-regulated SLC7A11 expression（all P<0.001） and increased ferroptosis in HOS and 143B cells（P<0.001，P=0.020）.Conclusions? SND1 presents up-regulated expression in osteosarcoma cells.It may inhibit ferroptosis by up-regulating the expression of SLC7A11，thereby improving the viability of osteosarcoma cells.

Key words：osteosarcoma；staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1；ferroptosis

Acta Acad Med Sin，2024，46（1）：11-18

骨肉瘤是起源于間充質(zhì)細(xì)胞的惡性骨腫瘤，具有轉(zhuǎn)移早、易耐藥、致殘率高、死亡率高等特點(diǎn)［1］。葡萄球菌核酸酶樣結(jié)構(gòu)蛋白1（staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1，SND1）是進(jìn)化上高度保守的蛋白質(zhì)，廣泛表達(dá)于人類、小鼠、大鼠等多種生物［2］。研究表明SND1與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，能促進(jìn)乳腺癌起始細(xì)胞的存活和致瘤性［3］；還參與調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲［4］。但SND1對(duì)骨肉瘤的作用目前研究較少，機(jī)制尚不清楚。鐵死亡是一種由鐵依賴性脂質(zhì)過氧化驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞死亡形式，以游離鐵增加和脂質(zhì)過氧化物累積為特征，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生和氧化性細(xì)胞凋亡［5］。研究證實(shí)鐵死亡能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。應(yīng)用鐵死亡誘導(dǎo)劑RSL3、Erastin和抑制劑Ferrostatin-1調(diào)節(jié)鐵死亡相關(guān)通路能夠有效增強(qiáng)化療、靶向治療甚至免疫治療的效果［6］。因此誘導(dǎo)鐵死亡可能成為一種新型的癌癥治療方法?，F(xiàn)已有研究證實(shí)P53、RSL3、FSP1和SLC7A11等多個(gè)基因均參與癌細(xì)胞對(duì)鐵死亡的敏感性調(diào)節(jié)［7］。其中，SLC7A11編碼蛋白在多種癌癥中均呈高表達(dá)，是向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)胱氨酸以進(jìn)行谷胱甘肽（glutathione，GSH）合成的關(guān)鍵膜通道蛋白［8］。作為細(xì)胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，抑制SLC7A11表達(dá)可能為抗腫瘤提供基于鐵死亡的新策略。因此，本研究采用多種骨肉瘤細(xì)胞系和裸鼠異種移植瘤模型，觀察SND1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞活性、克隆形成、遷移、侵襲的影響，探討SND1/SLC7A11對(duì)骨肉瘤細(xì)胞鐵死亡的調(diào)控機(jī)制，旨在為骨肉瘤治療靶點(diǎn)的選擇提供全新視角。

1? 材料和方法

1.1? 細(xì)胞株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

人成骨細(xì)胞系hFOB1.19和骨肉瘤細(xì)胞系Saos-2、U2OS、HOS和143B均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。6周齡雄性BALB/c裸鼠購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2? 主要試劑與儀器

鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin、抑制劑Ferrostatin-1購(gòu)自美國(guó)MedChemExpress公司，DMEM/F-12和DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，胎牛血清購(gòu)自美國(guó)HyClone公司，ECL發(fā)光液、BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司，PVDF膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司，CCK-8購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，一次性細(xì)胞嵌入皿24孔（8 μm）購(gòu)自廣州潔特生物過濾股份有限公司，丙二醛含量檢測(cè)試劑盒和還原型GSH含量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，鐵離子檢測(cè)試劑盒、SND1和β-actin抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）轉(zhuǎn)染SND1和對(duì)照序列購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。SpectraMax iD3多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Molecular Devices公司，CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司，電泳系統(tǒng)和凝膠成像分析系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3? 細(xì)胞培養(yǎng)

人成骨細(xì)胞hFOB1.19使用含10%胎牛血清、2.5 mmol/L L-谷氨酰胺和0.3 mg/mL遺傳霉素的DMEM/F-12培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%時(shí)，胰蛋白酶消化并傳代培養(yǎng)。骨肉瘤細(xì)胞Saos-2、U2OS、HOS和143B使用含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)和傳代。

1.4? 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將143B細(xì)胞接種于6孔板中培養(yǎng)，按照Lipofectamine 2000試劑盒說(shuō)明書將靶向SND1的siRNA（si-SND1）以及陰性對(duì)照（si-NC）分別轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中。si-SND1基因序列：5-GGACAAGGCCGGCAACTTTAT-3，si-NC基因序列：5-GGAGATTCTAGTAGGAGAA-3。采用10 μmol/L Erastin或2 μmol/L Ferrostatin-1處理各組細(xì)胞48 h，以誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞內(nèi)鐵死亡。

1.5? 細(xì)胞活性檢測(cè)

將HOS和143B細(xì)胞以5×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，分別在0、24、48、72 h向每孔加入10 μL CCK-8溶液孵育2 h，采用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處各孔光密度值。

1.6? 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

將HOS和143B細(xì)胞以3×103個(gè)/孔的密度接種于6孔板中，輕搖使細(xì)胞分散均勻，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)14 d，PBS清洗細(xì)胞2次，室溫甲醇固定15 min，1%結(jié)晶紫染色10 min，光學(xué)顯微鏡下觀察克隆形成情況，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞克隆數(shù)量。

1.7? 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)

將懸浮在無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基中的HOS和143B細(xì)胞以4×104/mL的密度分別接種于無(wú)基質(zhì)膠和涂有Matrigel基質(zhì)膠的上室內(nèi)，另將含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基加入下室，培養(yǎng)24 h后，4%多聚甲醛固定30 min，1%結(jié)晶紫溶液染色30 min，清洗小室并用干凈的棉棒擦去小室內(nèi)部的細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞遷移和侵襲情況，并統(tǒng)計(jì)遷移和侵襲細(xì)胞的數(shù)目。

1.8? 活性氧、鐵離子、GSH和丙二醛水平測(cè)定

分別使用活性氧（reactive oxygen species，ROS）流式檢測(cè)試劑盒、鐵離子測(cè)定試劑盒、還原型GSH檢測(cè)試劑盒和丙二醛檢測(cè)試劑檢測(cè)細(xì)胞蛋白樣品中鐵離子、GSH和丙二醛的水平，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.9? Western blot檢測(cè)

使用含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度。向蛋白樣品中加入5×上樣緩沖液，100 ℃金屬浴使蛋白變性。取30 μg蛋白樣品經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分離（濃縮膠80 V、30 min，分離膠120 V、90 min），轉(zhuǎn)膜至PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉1 h，加入一抗4 ℃孵育過夜，TBST洗膜3次，每次10 min，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育2 h，ECL顯影，凝膠成像系統(tǒng)拍照，采用Image J軟件進(jìn)行灰度分析。

1.10? 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)

收集各組細(xì)胞，使用TRIzol試劑提取細(xì)胞總RNA，采用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，并采用實(shí)時(shí)定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增。以GAPDH為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。引物序列：SND1正向引物：5-TGCAGCGGGGTAATCCTGA-3，反向引物：5-CCTCCGACACTTCGTCATCC-3；SLC7A11正向引物：5-GGTGGTGTGTTTGCTGTC-3，反向引物：5-GCTGGTAGAGGAGTGTGC-3；GAPDH正向引物：5-GGTCTCTGACTTCAACA-3，反向引物：5-GTGAGGG-TCTCTCTCTTCCT-3。

1.11? 異種移植瘤模型建立

轉(zhuǎn)染si-SND1或si-NC的143B細(xì)胞以1×106個(gè)/mL細(xì)胞密度經(jīng)皮下注射到裸鼠體內(nèi)。每4 d測(cè)量腫瘤體積1次，3周后處死裸鼠，收集異種移植腫瘤。腫瘤體積（mm3）=0.5×長(zhǎng)徑×寬徑2。

1.12? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 8.0統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的連續(xù)性變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，并使用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較；非連續(xù)變量以百分比表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallistest檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? SND1在骨肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá)水平

qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，骨肉瘤細(xì)胞Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1 mRNA的表達(dá)水平顯著高于人成骨細(xì)胞hFOB1.19（P=0.002，P<0.001，P<0.001，P<0.001）（圖1A）；Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，骨肉瘤細(xì)胞Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1蛋白的表達(dá)水平顯著高于人成骨細(xì)胞hFOB1.19（P均<0.001）（圖1B），選取SND1表達(dá)較高的HOS和143B細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2? 敲減SND1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞活性、克隆形成、遷移和侵襲能力的影響

敲減SND1后，與si-NC組比較，si-SND1組HOS和143B細(xì)胞中SND1的mRNA（P均<0.001）及蛋白（P=0.008，P<0.001）表達(dá)水平顯著減少；細(xì)胞的活性顯著降低，細(xì)胞克隆形成數(shù)量顯著減少，細(xì)胞遷移和侵襲能力顯著降低（P均<0.001）（圖2）。

2.3? 敲減SND1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞鐵死亡的影響

與DMSO對(duì)照比較，鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin顯著降低HOS和143B細(xì)胞活性，使用抑制劑Ferrostatin-1后HOS和143B細(xì)胞活性恢復(fù)升高（P均<0.001）（圖3A）。敲減SND-1后使用鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin可進(jìn)一步降低骨肉瘤HOS和143B細(xì)胞活性，使用Ferrostatin-1刺激后細(xì)胞活性恢復(fù)升高（P均<0.001）（圖3B）。此外，與Erastin+si-NC組比較，Erastin+si-SND1組細(xì)胞中鐵離子、丙二醛以及ROS表達(dá)升高，GSH表達(dá)降低（P均<0.001）（圖3C）。

2.4? 敲減SND1對(duì)裸鼠移植瘤體積和質(zhì)量的影響

與對(duì)照組比較，敲減SND1后的143B細(xì)胞裸鼠移植瘤在8、12、16、20 d腫瘤體積均明顯降低（P均<0.05）（圖4）。第21天si-SND1組腫瘤質(zhì)量小于si-NC組［（435.72±84.80）mg比（882.60±119.71）mg，P<0.001］。

2.5? SND1調(diào)控SLC7A11表達(dá)對(duì)鐵死亡的抑制作用

qPCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，骨肉瘤HOS和143B細(xì)胞中SLC7A11 mRNA和蛋白的表達(dá)水平均顯著高于人成骨細(xì)胞hFOB1.19（P均<0.001）（圖5A、5B）。敲減SND1或Erastin處理均能夠抑制骨肉瘤HOS和143B細(xì)胞中SLC7A11的表達(dá)水平（P均<0.05）（圖5C、5D）。敲減SND1后，細(xì)胞鐵死亡標(biāo)志物鐵離子、MDA、ROS表達(dá)升高，GSH表達(dá)下降（P均<0.05）（圖5E）。

3? 討論

骨肉瘤惡性程度高，預(yù)后較差，患者5年生存率相對(duì)較低。盡管嘗試開發(fā)多種藥物和新型治療手段，但是效果并不理想。探明骨肉瘤的調(diào)控機(jī)制有助于臨床開發(fā)新型治療靶點(diǎn)藥物。本研究關(guān)注SND1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，并強(qiáng)調(diào)了其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞鐵死亡過程的重要調(diào)節(jié)作用，這為揭示骨肉瘤的病理機(jī)制提供了更深層次的理論基礎(chǔ)。

SND1是維持生物體正常發(fā)育的關(guān)鍵蛋白，主要表達(dá)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，并在33種腫瘤中具有潛在的致癌作用，其機(jī)制可能與主要組織相容復(fù)合體Ⅰ在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的降解有關(guān)［9］?；诎┌Y基因組圖譜和基因表達(dá)數(shù)

據(jù)庫(kù)的數(shù)據(jù)集分析結(jié)果表明，SND1在結(jié)腸癌、黑色素瘤中調(diào)控CD8+ T細(xì)胞相關(guān)的免疫逃逸［10］。SND1可能通過靶向miRNA665促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖。然而SND1對(duì)骨肉瘤的其他調(diào)節(jié)作用尚不清楚［11］。本研究以成骨細(xì)胞hFOB1.19為對(duì)照，檢測(cè)了4種骨肉瘤細(xì)胞中SND1的表達(dá)，結(jié)果顯示SND1表達(dá)水平顯著升高。調(diào)減SND1表達(dá)后HOS和143B細(xì)胞的活性降低、克隆形成數(shù)量明顯減少，遷移和侵襲能力下降，表明下調(diào)SND1可抑制骨肉瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展。

鐵死亡作為一種新型的細(xì)胞死亡形式，在腫瘤的臨床治療中具有重要的研究和應(yīng)用價(jià)值［12］。既往文獻(xiàn)表明鐵死亡能夠促進(jìn)包括骨肉瘤在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的凋亡［13-14］。但是SND1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞鐵死亡的影響不明確。本研究采用鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin和抑制劑Ferrostatin-1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的鐵死亡過程進(jìn)行細(xì)胞水平上的調(diào)控，結(jié)果表明誘導(dǎo)鐵死亡后骨肉瘤細(xì)胞的活性顯著下降，敲減骨肉瘤細(xì)胞中SND1的表達(dá)后腫瘤細(xì)胞活性進(jìn)一步降低。當(dāng)使用鐵死亡抑制劑Ferrostatin-1抑制腫瘤細(xì)胞鐵死亡后，si-SND1組骨肉瘤細(xì)胞的活性逐漸恢復(fù)，說(shuō)明SND-1通過鐵死亡調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的活性。同時(shí)，Erastin+si-SND1組鐵死亡標(biāo)志物鐵、丙二醛表達(dá)量增加，GSH表達(dá)下降，說(shuō)明敲減SND1可能通過促進(jìn)鐵死亡抑制腫瘤細(xì)胞的活性。既往研究表明，胱氨酸/谷氨酸反轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC7A11是抗氧化的關(guān)鍵蛋白，在肺癌［15］、卵巢癌［16］等多種癌癥中過度表達(dá)，且通過抑制鐵死亡促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。SLC7A11在骨肉瘤中的研究較少，布比卡因、替拉扎明［17］等化療藥物被證實(shí)是通過SLC7A11介導(dǎo)的鐵死亡過程抑制腫瘤生長(zhǎng)。本研究探討SND1是否通過SLC7A11途徑調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的鐵死亡，結(jié)果表明骨肉瘤細(xì)胞中SLC7A11的表達(dá)上調(diào)，抑制SND1或促進(jìn)鐵死亡都可以降低SLC7A11的表達(dá)水平。此外，SND1敲減還促進(jìn)了Erastin介導(dǎo)的SLC7A11表達(dá)下調(diào)，并導(dǎo)致細(xì)胞鐵死亡水平的升高；而過表達(dá)SLC7A11骨肉瘤細(xì)胞的鐵死亡水平顯著降低。因此，敲減SND1可能是通過下調(diào)SLC7A11的表達(dá)促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的鐵死亡，進(jìn)而抑制骨肉瘤。

本研究還通過異種移植瘤模型初步探索了干預(yù)SND1對(duì)骨肉瘤的影響，結(jié)果顯示下調(diào)腫瘤細(xì)胞中SND1的表達(dá)能夠減少裸鼠成瘤體積和質(zhì)量，說(shuō)明以SND1為靶點(diǎn)的治療方式可能會(huì)延緩骨肉瘤的疾病進(jìn)展。然而本研究尚存在不足，SND1通過SLC7A11調(diào)控骨肉瘤鐵死亡的機(jī)制尚不明確，未來(lái)的研究應(yīng)加以完善，以闡明SND1調(diào)控骨肉瘤的分子機(jī)制。

綜上，本研究結(jié)果表明，SND1在骨肉瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，下調(diào)SND1表達(dá)可以抑制骨肉瘤細(xì)胞活性，降低骨肉瘤細(xì)胞克隆形成、遷移和侵襲能力，并抑制異種移植瘤的生長(zhǎng)。SND1可能通過促進(jìn)SLC7A11的表達(dá)抑制鐵死亡進(jìn)而促進(jìn)骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。SND1及其靶向鐵死亡的調(diào)控為骨肉瘤的臨床治療提供了潛在的新思路。

利益沖突? 所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明? 王勝濤：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)研究、統(tǒng)計(jì)分析、撰寫論文；徐淑娟：實(shí)驗(yàn)實(shí)施、統(tǒng)計(jì)分析；貴鵬、李欣嚀、隋玉涵：收集數(shù)據(jù)、整理數(shù)據(jù)；李朝旭：指導(dǎo)研究、修改論文

參? 考? 文? 獻(xiàn)

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（收稿日期：2023-06-28）