董亞娟 魯林楠

腎癌是一種臨床患病率較高的惡性腫瘤,會引起血尿、腰痛等,且發(fā)病率呈逐年升高趨勢,嚴(yán)重影響廣大居民健康[1]。腎癌的發(fā)病機制較為復(fù)雜,與遺傳、獲得性囊性腎臟疾病等密切相關(guān)[1-2]。手術(shù)為治療早期腎癌的首選治療措施,可有效延長患者生存周期。相關(guān)調(diào)查發(fā)現(xiàn),30%以上的腎癌患者在行根治性手術(shù)后存在復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,3年生存率較低[3]。腫瘤分子標(biāo)志物可對腎癌復(fù)發(fā)進行預(yù)測評估,故探尋與腎癌發(fā)展聯(lián)系緊密的分子標(biāo)志物,對于評估患者預(yù)后、調(diào)控臨床診治方案至關(guān)重要[4]。腫瘤高表達細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(cell cycle-related and expression elevated pmtein in tumor,CREPT)為酵母Rtt103基因的人類同源類似物,于較多的惡性腫瘤病灶內(nèi)呈現(xiàn)出過高水平。但臨床關(guān)于CREPT在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中的研究報道較為缺乏,還有待進一步研究?；诖?本研究旨在分析CREPT在腎癌組織中的表達及對患者預(yù)后的影響。信息示下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2019年10月該院診治的68例腎癌患者為研究對象,研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理檢查證實為腎癌;所有患者均無手術(shù)相關(guān)禁忌證,且均在本院行手術(shù)治療;所有患者納入均遵從自愿原則,依從性較高,簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):伴有凝血功能異常者;合并其余惡性腫瘤者;存在血液系統(tǒng)疾病者;存在精神疾病者;意識障礙,難以進行正常交流者;合并傳染性疾病者;存有酒精、藥物依賴史者;存在免疫功能異常者;合并心肝腎等重要臟器功能不全者;存有嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者。所有患者中男性38例,女性30例;年齡35～68歲,平均(50.59±2.34)歲;體重指數(shù)(body mass index,BMI)為18.6～27.2 kg/m2,平均BMI為(23.57±168)kg/m2;TNM分期:15例Ⅰ期,12例Ⅱ期,26例Ⅲ期,15例Ⅳ期;Fuhrman分級:13例Ⅰ級,12例Ⅱ級,26例Ⅲ級,17例Ⅳ級。

1.2 方法

(1)標(biāo)本采集:在行手術(shù)治療時切取患者的癌組織與癌旁正常組織標(biāo)本,以免疫組織化學(xué)法測定患者的CREPT表達。(2)檢測方法:取癌組織與癌旁正常組織的石蠟包埋切片,將其均制作成4 μm切片,進行脫蠟、水化;以檸檬酸鈉緩沖液行抗原修復(fù),滴如3%過氧化氫溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶,于室溫環(huán)境之下進行15 min的孵育,之后以磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗3次;然后以10%山羊血清在室溫條件之下封存30 min,滴加鼠抗人CREPT單克隆體,在4 ℃環(huán)境下過夜,次日以PBS洗滌3次,滴加二抗后在室溫條件下孵育30 min;然后采用蘇木精施行染色,脫水并封片,于顯微鏡下觀察。(3)判定標(biāo)準(zhǔn):①染色強度評分:0分:無著色;1分:淺黃色;2分:棕黃色;3分:棕褐色。②陽性細(xì)胞數(shù)評分:隨機取10個具有代表性的視野計算陽性表達率,陽性表達率=陽性細(xì)胞數(shù)/腫瘤細(xì)胞總數(shù)×100%;1分:陽性表達率為1%～25%;2分:26%～50%;3分:>50%。兩者得分相乘為總分,其中0～3分為低表達,4～9分為高表達。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)癌旁正常組織與癌組織中CREPT表達情況。(2)CREPT表達水平與腎癌患者的臨床病理特征關(guān)系:收集患者的年齡、性別、腫瘤直徑、BMI、TNM分期、Fuhrman分級資料,統(tǒng)計分析CREPT表達與上述資料之間的聯(lián)系。(3)CREPT表達水平與腎癌患者預(yù)后關(guān)系:隨訪3年,分析CREPT表達與患者生存率的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 癌旁正常組織與癌組織中CREPT表達對比

癌組織中CREPT高表達率為67.65%(46/68),高于癌旁正常組織的22.06%(15/68),有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=28.567,P=0.000)。

2.2 CREPT表達與腎癌患者的臨床病理特征關(guān)系

CREPT表達水平與腎癌患者的年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、腫瘤直徑無關(guān),無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);CREPT表達水平與腎癌患者的TNM分期、Fuhrman分級有關(guān),有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 CREPT表達與腎癌患者的臨床病理特征關(guān)系(例,%)

2.3 CREPT表達與腎癌患者預(yù)后關(guān)系

CREPT高表達腎癌患者的3年生存率為52.17%(24/46),低于CREPT低表達患者的77.27%(17/22),有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=3.916,P=0.048)。

3 討論

腎癌的臨床發(fā)病率占腎臟惡性腫瘤的80%～90%,其病理類型包括透明細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、嫌色細(xì)胞癌等,其中以透明細(xì)胞癌最為常見[5-6]。隨著臨床診斷技術(shù)的不斷提高,越來越多的腎癌在發(fā)病早期被檢出,可采取根治手術(shù)治療,從而提升生存率[7-8]。然而,仍有部分腎癌患者經(jīng)手術(shù)治療后出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移,而復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生后會增加治療難度,影響遠(yuǎn)期生存率[9]。因此,臨床探尋與腎癌進展相關(guān)的分子標(biāo)志物,為評估患者預(yù)后、調(diào)整治療方案提供指導(dǎo)。

臨床普遍認(rèn)為細(xì)胞周期的紊亂幾乎與所有人類腫瘤細(xì)胞密切相關(guān)。CREPT是存在RPR重要構(gòu)造領(lǐng)域的酵母RTT103基因的人類同源基因,其定位于人第20號染色體長臂1區(qū)。CREPT可通過與轉(zhuǎn)錄中的關(guān)鍵酶RNA聚合酶Ⅱ在細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1基因的啟動子上相互結(jié)合,并使Cyclin D1基因形成環(huán)狀結(jié)構(gòu),該環(huán)狀構(gòu)造的產(chǎn)生將導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的形成[10-11]。CREPT屬Cyclin D1的調(diào)控因子,目前已被臨床發(fā)現(xiàn)其在肺癌、肝癌、乳腺癌等不同的腫瘤組織內(nèi)過高表達,而其表達水平與患者的生存周期聯(lián)系緊密[12]。CREPT在腫瘤中的作用機制如下:①調(diào)節(jié)免疫炎癥,影響腫瘤微環(huán)境;②調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,促進細(xì)胞周期G1/s轉(zhuǎn)換。然而臨床關(guān)于CREPT在腎癌組織中的表達及其與患者預(yù)后關(guān)系的研究報道較為缺乏,尚需進一步探究。本研究結(jié)果顯示,癌組織中CREPT高表達率高于癌旁正常組織,表明CREPT在腎癌組織中呈高表達。本研究結(jié)果顯示,CREPT表達水平與腎癌患者的年齡、性別、BMI、腫瘤直徑無關(guān);CREPT表達水平與腎癌患者的TNM分期、Fuhrman分級有關(guān)。提示CREPT參與腎癌的發(fā)生與發(fā)展。TNM分期分期越高,患者病情越為嚴(yán)重。而Fuhrman分級是目前應(yīng)用最廣泛的腎癌的核分級系統(tǒng),亦被廣泛認(rèn)為是腎癌預(yù)后判斷的獨立參考指標(biāo)之一。Fuhrman分級根據(jù)細(xì)胞核大小、形狀與核仁是否明顯而分為四級,其中Ⅰ級為高分化,Ⅱ級高分化,Ⅲ級中分化,Ⅳ級低分化(未分化),如若分化程度高,則表示異質(zhì)性較小,預(yù)后較好;低分化提示高度異質(zhì)性與預(yù)后差。本研究結(jié)果顯示:CREPT高表達腎癌患者的3年生存率52.17%(24/46)低于CREPT低表達患者77.27%(17/22),表明CREPT高表達的腎癌患者預(yù)后較差。但還需注意的是,本研究尚存在納入樣本量較少等不足,可能會影響本試驗結(jié)果的精準(zhǔn)性。因此,臨床還需完善試驗設(shè)計,擴大樣本量,進行更深入的分析。

綜上所述,腎癌組織中CREPT表達水平較高,且與患者的TNM分期、Fuhrman分級有關(guān),CREPT的表達越高,則患者預(yù)后越差,3年生存率較低,CREPT可作為判斷患者預(yù)后的重要指標(biāo)。