李治洛 辛雅萍

甲狀腺癌為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤,起源于甲狀腺濾泡上皮組織,早期癥狀不明顯,待瘤體增大后可壓迫臨近器官,誘發(fā)吞咽困難、呼吸困難、聲音嘶啞等癥狀,若未得到及時(shí)診治,可經(jīng)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,增加臨床治療難度[1-2]。手術(shù)為該病當(dāng)前主要治療方式,通過(guò)手術(shù)切除腫瘤組織,能夠終止腫瘤進(jìn)展,以避免其擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移[3-4]。目前,多數(shù)患者經(jīng)手術(shù)治療后可獲得良好預(yù)后,但仍有少數(shù)患者術(shù)后出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,增加患者痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。超聲為當(dāng)前診斷甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要手段,雖具有較高診斷價(jià)值,但其難以預(yù)測(cè)術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),還需尋找可對(duì)術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移造成影響的高危指標(biāo),以便于臨床早期開(kāi)展針對(duì)性預(yù)防工作。白細(xì)胞分化抗原147(CD147)屬于跨膜糖蛋白,在腫瘤細(xì)胞膜上分布廣泛,可刺激血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子生成,與腫瘤惡性程度存在密切關(guān)系[5]。survivin屬于蛋白水解酶,與細(xì)胞凋亡存在密切關(guān)系,在多種惡性腫瘤中均存在較高表達(dá)。但關(guān)于兩者與甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否存在關(guān)系尚未明確[6]。鑒于此,本研究旨在分析甲狀腺癌組織中CD147及survivin表達(dá)與術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2021年5月我院收治的82例甲狀腺癌患者作為研究對(duì)象,其中男性39例,女性43例;年齡37～68歲,平均年齡(52.49±5.12)歲;體質(zhì)量指數(shù)19～28 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(24.36±1.52)kg/m2。經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)病理檢查確診為甲狀腺癌;均開(kāi)展手術(shù)治療;臨床資料完整;精神狀態(tài)正常;患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):心肺功能欠佳;肝腎衰竭;凝血功能障礙;合并其他惡性腫瘤。

1.2 方法

所有患者均行手術(shù)治療,術(shù)中需采集腫瘤標(biāo)本及癌旁正常組織標(biāo)本送檢。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤標(biāo)本及癌旁正常組織標(biāo)本內(nèi)CD147、survivin表達(dá):先以10%甲醛固定,石蠟包埋后進(jìn)行連續(xù)切片,切片厚度為5 μm;切片行脫蠟處理,梯度乙醇脫水處理,再以3%過(guò)氧化氫封閉,室溫下孵育10 min;將切片浸泡在EDTA溶液內(nèi),微波抗原修復(fù)10 min;待冷卻后以PBS溶液沖洗3次,每次3 min;滴加山羊血清封閉液抗原,室溫孵育20 min,甩去多余液體后,加入過(guò)氧化物酶阻斷,加入CD147(1∶100)、survivin單抗(1∶100),置于4 ℃環(huán)境內(nèi)過(guò)夜;復(fù)溫30 min,再以PBS溶液沖洗3次,每次3 min;滴加兔抗羊二抗工作液覆蓋于標(biāo)本上,置于恒溫箱內(nèi)以37 ℃孵育15 min;再以PBS溶液沖洗3次,每次3 min;之后進(jìn)行DBA溶液配置,室溫下開(kāi)展DBA顯色處理,蘇木精復(fù)染3 min,以鹽酸乙醇分化10 s,碳酸鋰返藍(lán)10 s,玻片風(fēng)干處理后加入中性樹(shù)膠封固,并以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。兩者陽(yáng)性表達(dá)均定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),以半定量積分法判斷,于高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,之后以染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)算陽(yáng)性情況。染色強(qiáng)度分為0、1、2、3分,對(duì)應(yīng)未著色、淺黃、棕黃及棕褐色;陽(yáng)性細(xì)胞百分比為0、1、2、3、4分,對(duì)應(yīng)<10%、10%～25%、>25%～50%、>50%～75%、>75%;得分0分為陰性,≥1分為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)CD147、survivin陽(yáng)性表達(dá)情況:比較腫瘤標(biāo)本及癌旁正常組織內(nèi)CD147、survivin陽(yáng)性表達(dá)情況。(2)影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素分析:隨訪1年,記錄82例甲狀腺癌患者術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況,依據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為兩組,收集兩組年齡、性別、腫瘤分期、體質(zhì)量指數(shù)、CD147表達(dá)、survivin表達(dá)、腫瘤直徑等多方面資料,分別行單因素、Logistic回歸分析,獲得影響甲狀腺癌患者術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CD147、survivin陽(yáng)性表達(dá)情況

腫瘤組織CD147陽(yáng)性率、survivin陽(yáng)性率高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

表1 兩組CD147、survivin陽(yáng)性表達(dá)情況對(duì)比(例,%)

2.2 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析

82例患者術(shù)后隨訪1年,其中30例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,52例未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移者腫瘤分期、CD147表達(dá)、survivin表達(dá)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析(例,%)

2.3 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的多因素分析

多因素顯示,腫瘤分期Ⅲ期、CD147陽(yáng)性表達(dá)、survivin陽(yáng)性表達(dá)為影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素(P<0.05且OR>1),見(jiàn)表3。

表3 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的多因素分析

3 討論

甲狀腺癌發(fā)病復(fù)雜,臨床認(rèn)為該病的發(fā)生及發(fā)展受多種癌基因及生長(zhǎng)因子影響,一旦原癌基因過(guò)度表達(dá)、突變等,可引起癌基因與抑癌基因失衡,增加細(xì)胞癌變風(fēng)險(xiǎn),且生長(zhǎng)因子持續(xù)作用下可促使甲狀腺濾泡正常細(xì)胞生長(zhǎng)分化,協(xié)同癌基因誘發(fā)細(xì)胞增殖失控,增加惡性腫瘤形成風(fēng)險(xiǎn)[7-8]。同時(shí),甲狀腺癌還可涉及碘攝入、電離輻射等多個(gè)方面,均可一定程度上刺激甲狀腺濾泡正常細(xì)胞,使其發(fā)生惡性變化[9-10]。甲狀腺癌的首選治療方式為手術(shù),多數(shù)患者經(jīng)手術(shù)切除病灶后可取得理想預(yù)后,但受多種因素影響,部分患者術(shù)后仍伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)不僅增加臨床治療難度,還增加患者死亡風(fēng)險(xiǎn),故早期若能識(shí)別術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),則有助于開(kāi)展針對(duì)性治療方案,避免淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生。

CD147是在人腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液內(nèi)發(fā)現(xiàn)的跨膜糖蛋白,其能夠?qū)?xì)胞外基質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生刺激,促使基質(zhì)金屬蛋白酶生成,加快細(xì)胞外基質(zhì)降解,從而為腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移提供一定便利[11]。臨床發(fā)現(xiàn),CD147在正常組織內(nèi)表達(dá)較低,高表達(dá)廣泛存在于多種惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi),且參與腫瘤細(xì)胞的新生血管生成、能量代謝等方面[12-13]。Survivin屬于抗凋亡蛋白,其相對(duì)分子質(zhì)量小,能夠?qū)?xì)胞周期起到調(diào)控作用,從而影響細(xì)胞的增殖及凋亡,且該物質(zhì)具有腫瘤特異性,在乳腺癌、直腸癌等多種惡性腫瘤內(nèi)也存在較高表達(dá),腫瘤分期越晚則表達(dá)水平越高[14-15]。本研究結(jié)果顯示,腫瘤標(biāo)本內(nèi)CD147陽(yáng)性率、survivin陽(yáng)性率高于癌旁正常組織;兩組腫瘤分期、CD147表達(dá)、survivin表達(dá)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);多因素顯示,腫瘤分期Ⅲ期、CD147陽(yáng)性表達(dá)、survivin陽(yáng)性表達(dá)為影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素(P<0.05且OR>1);提示CD147、survivin在甲狀腺癌中存在較高陽(yáng)性表達(dá),且與術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,可作為指導(dǎo)臨床治療的重要指標(biāo)。分析原因?yàn)?當(dāng)CD147處于高陽(yáng)性表達(dá)狀態(tài)時(shí),能夠加快細(xì)胞外基質(zhì)降解、促進(jìn)腫瘤新生血管形成,以提高腫瘤細(xì)胞增殖速度,使得腫瘤細(xì)胞可迅速擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致手術(shù)難以徹底清除腫瘤細(xì)胞,術(shù)后易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。而survivin高表達(dá)亦是如此,可對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡起到調(diào)控作用,阻止腫瘤細(xì)胞凋亡,提高腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移能力,故該類患者術(shù)后更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

綜上所述,CD147及survivin在甲狀腺癌中呈高表達(dá),且兩者陽(yáng)性表達(dá)為術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素,早期監(jiān)測(cè)該類指標(biāo)有助于完善治療方案,降低術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。