曹秋菊 張利娟 李圓圓

腦梗死是腦部血液供應(yīng)障礙、血管閉塞致局部腦組織缺血缺氧而引起的一種神經(jīng)功能缺失表現(xiàn)，也稱缺血性腦卒中。腦梗死在臨床多表現(xiàn)為突發(fā)性的昏倒、意識(shí)喪失，語言智力障礙等［1］。根據(jù)腦梗死發(fā)病原因可分為心源性和非心源性，心源性往往自身具有心血管疾病，臨床常予以預(yù)防手段；而非心源性患者因無明顯誘因易被忽視，常以急性腦梗死為主，對(duì)患者的生命威脅更大。頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊脫落是非心源性腦梗死的常見原因，頸動(dòng)脈狹窄程度也與腦梗死病變程度密切相關(guān)，且頸動(dòng)脈狹窄的患者腦梗死復(fù)發(fā)率也較高［2］，故認(rèn)為對(duì)非心源性腦梗死患者頸動(dòng)脈狹窄情況進(jìn)行評(píng)估對(duì)其臨床診療具有重要意義。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類由20～25 個(gè)核苷酸組成的小分子單鏈RNA，其在細(xì)胞內(nèi)具有多種重要的調(diào)節(jié)作用［3］。miR-124，miR-210具有調(diào)控血管生成、介導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用，在血管類疾病和代謝性疾病中具有重要地位［4-5］。本研究將探討非心源性腦梗死患者miR-124、miR-210表達(dá)與頸動(dòng)脈狹窄的關(guān)系，以期為臨床診療補(bǔ)充循證依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究獲取院方倫理委員會(huì)通過，選取2021年1 月至2022 年12 月成都醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院·核工業(yè)四一六醫(yī)院收治的124 例非心源性腦梗死患者作為觀察對(duì)象，根據(jù)是否存在頸動(dòng)脈狹窄分為狹窄組（n=64）和無狹窄組（n=60）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合非心源性腦梗死標(biāo)準(zhǔn)［6］，且經(jīng)MRI 影像學(xué)確診；②狹窄組患者均經(jīng)頸動(dòng)脈超聲確診存在斑塊或有內(nèi)膜增厚［7］；③患者家屬對(duì)研究內(nèi)容了解并同意入組。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心血管疾??；②合并惡性腫瘤；③精神疾病或意識(shí)障礙；④臨床資料缺失者。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-124、miR-210表達(dá)水平檢測

均于入院時(shí)抽取患者靜脈血3 mL，采用Ficollhypzue 細(xì)胞分離液（美國phannacia 公司）分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞。采用Trizol 試劑（上海雙達(dá)生物技術(shù)有限公司）抽提單核細(xì)胞中總RNA，計(jì)算RNA的濃度和純度。按TaqMan MicroRNA Reverse Transcription kit 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書（北京伊塔生物科技有限公司）以RNA 為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA 并置于4℃保存。實(shí)時(shí)熒光定量法進(jìn)行血清miR-124、miR-210相對(duì)表達(dá)量測定，以U6為內(nèi)參，2-ΔΔCT法表示表達(dá)水平，反應(yīng)體系為20 μL。miR-124反應(yīng)條件為：95℃15 s，60℃60 s，85℃15 s，60℃15 s，設(shè)置40 個(gè)循環(huán)。miR-210反應(yīng)條件為：95℃15 min、94℃20 s、60℃34 s，設(shè)置40 個(gè)循環(huán)。引物序列：U6：上游引物序列：5′-TGCGGGTGCTCCGCTT-3′，下游引物序列：5′-CAGTGCAGGGTCCGA-3′；miR-124：上游引物序列：5′-GATACTCATAAGGCAC GCGG-3′；下游引物序列：5′-GTGCAGGGTCCGAG GT-3′。miR-210：上游引物序列：5′-CGTGTGAGAGCGGCTGAAA-3′；下游引物序列：5′-TATGGTTGTTCTTCTCGTCTCCTTCTC-3′。

1.2.2 血清超敏C 反應(yīng)蛋白（high-sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）檢測

抽取患者空腹靜脈血3 mL，分離血清（3 500 r/min，10 min，離心半徑8 cm），提取上清液，采用ELISA 法檢測Hcy、hs-CRP 水平（試劑盒：上海酶研生物科技有限公司）。

1.2.3 頸動(dòng)脈狹窄程度分級(jí)［7］

輕度狹窄為＜30%；中度狹窄為30%～70%（包含30%）；重度狹窄為70%及以上。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理并分析，計(jì)量資料經(jīng)檢驗(yàn)后滿足正態(tài)分布以（）表示，兩組間行t檢驗(yàn)，多組間用方差分析；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)性分析相關(guān)指標(biāo)，采用Spearman 相關(guān)性分析不同狹窄程度與血清miR-124、miR-210的相關(guān)性，以P＜0.05 時(shí)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組一般資料（年齡、性別、BMI、基礎(chǔ)疾病、家族遺傳史、吸煙史、飲酒史）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較［（），n（%）］Table 1 Comparison of general data between the two groups［（），n（%）］

表1 兩組一般資料比較［（），n（%）］Table 1 Comparison of general data between the two groups［（），n（%）］

2.2 兩組血清miR-124、miR-210 表達(dá)水平比較

狹窄組血清miR-124、miR-210表達(dá)水平均低于無狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清miR-124、miR-210 表達(dá)水平比較（）Table 2 Comparison on expression levels of serum miR-124 and miR-210 between the two groups（）

表2 兩組血清miR-124、miR-210 表達(dá)水平比較（）Table 2 Comparison on expression levels of serum miR-124 and miR-210 between the two groups（）

2.3 兩組血清hs-CRP、Hcy 水平比較

狹窄組血清hs-CRP、Hcy 水平高于無狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組血清hs-CRP、Hcy 水平比較［（），mg/L］Table 3 Comparison of serum hs-CRP and Hcy levels between the two groups［（），mg/L］

表3 兩組血清hs-CRP、Hcy 水平比較［（），mg/L］Table 3 Comparison of serum hs-CRP and Hcy levels between the two groups［（），mg/L］

2.4 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清miR-124、miR-210 表達(dá)水平比較

重度狹窄組患者的血清miR-124、miR-210表達(dá)水平均低于輕度和中度狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清miR-124、miR-210表達(dá)水平比較（）Table 4 Comparison on expression levels of serum miR-124 and miR-210 in patients with different severity of carotid stenosis（）

表4 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清miR-124、miR-210表達(dá)水平比較（）Table 4 Comparison on expression levels of serum miR-124 and miR-210 in patients with different severity of carotid stenosis（）

注：與輕度狹窄組比較，aP＜0.05；與中度狹窄組比較，bP＜0.05。

2.5 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清hs-CRP、Hcy水平比較

hs-CRP、Hcy 水平：重度狹窄組＞中度狹窄組＞輕度狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表5 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清hs-CRP、Hcy 水平比較［（），mg/L］Table 5 Comparison of serum hs-CRP and Hcy levels in patients with different severity of carotid stenosis［（），mg/L］

表5 不同頸動(dòng)脈狹窄程度患者血清hs-CRP、Hcy 水平比較［（），mg/L］Table 5 Comparison of serum hs-CRP and Hcy levels in patients with different severity of carotid stenosis［（），mg/L］

注：與輕度狹窄組比較，aP＜0.05；與中度狹窄組比較，bP＜0.05。

2.6 血清指標(biāo)間及與頸動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性

hs-CRP、Hcy 水平與頸動(dòng)脈狹窄程度均呈正相關(guān)（P＜0.05），miR-124、miR-210與hs-CRP、Hcy水平、頸動(dòng)脈狹窄程度均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表6。

表6 血清指標(biāo)間及與頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)性Table 6 Correlation among serum indexes and their correlation with carotid stenosis

3 討論

頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊脫落是非心源性腦梗死常見病因，頸動(dòng)脈狹窄程度與病變程度及復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，故對(duì)頸動(dòng)脈狹窄程度進(jìn)行評(píng)估具有重要意義。

既往有研究顯示［8］，在由頸內(nèi)動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致的急性冠狀動(dòng)脈綜合征（ACS）或缺血性腦卒中中，miRs是潛在的重要診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，狹窄組患者血清miR-124、miR-210表達(dá)水平均低于無狹窄組，說明miR-124與miR-210可能與頸動(dòng)脈狹窄發(fā)生有關(guān)。分析其原因可能是，miR-124可有效增加抗調(diào)亡蛋白（Bcl-2、Bcl-xl）表達(dá)，促進(jìn)M2 表型小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞生成，具有減輕神經(jīng)炎性反應(yīng)、抑制神經(jīng)元調(diào)亡、減少缺血性腦損傷的作用，在神經(jīng)血管重塑中具有重要地位［9］，當(dāng)其水平降低，說明腦缺血癥狀嚴(yán)重，可能與狹窄形成有關(guān)。既往也有研究［10］提出，miR-124是真核生物中保守的非編碼RNA，是調(diào)控基因表達(dá)的關(guān)鍵途徑，在中樞神經(jīng)功能調(diào)節(jié)和腦發(fā)育中具有重要地位。miR-210是一種缺氧激活因子，可在缺氧環(huán)境中促進(jìn)新生血管生成，改善機(jī)體缺血缺氧狀態(tài)。一項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［11］表明，miR-210可促進(jìn)腦缺血后血管新生，與腦梗死的疾病進(jìn)展有關(guān)。在頸動(dòng)脈狹窄形成初期，腦供血處于微缺氧狀態(tài)，此時(shí)miR-210水平仍處于較高水平狀態(tài)，但出現(xiàn)嚴(yán)重腦出血時(shí)，血管堵塞嚴(yán)重，此時(shí)機(jī)體呈現(xiàn)低氧狀態(tài)，miR-210受低氧誘導(dǎo)因子的誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄，水平降低，促進(jìn)頸動(dòng)脈狹窄發(fā)展。本研究結(jié)果與既往研究部分相似［12-14］。

炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的病理基礎(chǔ)。本研究結(jié)果顯示，狹窄組hs-CRP、Hcy 水平高于非狹窄組。分析其原因是，hs-CRP是機(jī)體炎性反應(yīng)標(biāo)志物，可激活多種補(bǔ)體系統(tǒng)，合成和釋放炎性介質(zhì)，生成氧化自由基分子，損害血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，形成動(dòng)脈狹窄。Hcy 屬于氨基酸的一種，正常情況下在機(jī)體內(nèi)濃度水平較低，而當(dāng)Hcy 代謝異常時(shí)，可引起機(jī)體糖脂代謝紊亂，導(dǎo)致機(jī)體脂質(zhì)物堆積，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成；Hcy 還可促進(jìn)低密度脂蛋白進(jìn)行自我氧化，形成氧化修飾低密度脂蛋白，被巨噬細(xì)胞攝取轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞而損害血管內(nèi)皮細(xì)胞功能［15］，進(jìn)一步加速動(dòng)脈粥樣硬化，形成頸動(dòng)脈狹窄。既往亦多有研究證實(shí)hs-CRP、Hcy 水平增高與腦梗死患者頸動(dòng)脈狹窄的關(guān)系［16-17］。進(jìn)一步研究說明miR-124、miR-210可能通過調(diào)控hs-CRP、Hcy 促進(jìn)頸動(dòng)脈狹窄形成，提示血清miR-124、miR-210表達(dá)水平可成為評(píng)估頸動(dòng)脈狹窄的輔助性指標(biāo)，為臨床診療提供指導(dǎo)。

綜上所述，miR-124、miR-210可能參與頸動(dòng)脈狹窄的形成，其表達(dá)水平檢測或可作為評(píng)估非心源性腦梗死頸動(dòng)脈狹窄程度的輔助性指標(biāo)。