蔣 軼,葉 韜,陳 周,高加勝,張文圣

(九江市第一人民醫(yī)院,江西 九江 332001)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見的一種惡性腫瘤性疾病,多數(shù)患者表現(xiàn)為無(wú)痛血尿、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難,隨著膀胱癌腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移,可引起累及系統(tǒng)的相關(guān)癥狀,嚴(yán)重的甚至出現(xiàn)腎功能不全,嚴(yán)重威脅患者的日常生活和生命安全[1-2]。臨床上治療膀胱癌主要以手術(shù)治療為主,并聯(lián)合其他治療方式。根據(jù)膀胱癌局部腫瘤浸潤(rùn)程度將其分為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌和肌層浸潤(rùn)性膀胱癌,并依據(jù)分期、分級(jí)以及全身情況采用個(gè)體化治療方案。臨床確診病例中非肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌患者占70%～75%,肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者占25%～30%,且診斷時(shí)往往有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。經(jīng)過根治性膀胱切除術(shù)聯(lián)合雙側(cè)盆腔淋巴結(jié)清掃治療后,膀胱癌患者仍面臨著術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡的風(fēng)險(xiǎn)[3-4]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展,全身免疫治療逐漸被應(yīng)用到膀胱癌的治療中,程序性死亡受體1(PD-1)在轉(zhuǎn)移性膀胱癌或者化療失敗的膀胱癌中展現(xiàn)出了良好的效果。本文旨在探討膀胱癌細(xì)胞內(nèi)在PD-1受體功能對(duì)腫瘤的影響。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2023年1月膀胱癌患者80 例,其中男39 例,女41 例;年齡(53.55±4.56) 歲;體質(zhì)量指數(shù)(21.22±1.02) kg/m2;臨床TNM分期:T1期13 例,T2期17 例,T3期20 例,T4期30 例;腫瘤分級(jí):G1者18 例,G2者22 例,G3者40 例;非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌42 例,肌層浸潤(rùn)性膀胱癌38 例。研究對(duì)象簽署知情同意書,且研究通過倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):臨床診斷均為膀胱癌,且符合《中國(guó)膀胱癌保膀胱治療多學(xué)科診治協(xié)作共識(shí)》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn);研究前均未接受過任何治療者;生命體征穩(wěn)定均無(wú)生命危險(xiǎn)者;個(gè)人臨床資料齊全者。

排除標(biāo)準(zhǔn):合并心、肝、腎等器官功能異常或者惡性腫瘤者;精神異常無(wú)法正常溝通交流者;研究期間患者組織標(biāo)本遺失或者損害者。

1.3 方法

采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)膀胱癌患者癌組織以及距離腫瘤邊緣3 cm的膀胱癌旁組織中PD-1的表達(dá):將標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理,浸泡在多聚甲醛中48 h后用石蠟進(jìn)行包埋、切片、烘烤、脫蠟水化、磷酸鹽緩沖液漂洗。在顯微鏡下進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺法(DAB)顯色,自來(lái)水沖洗,蘇木精復(fù)染色,自來(lái)水沖洗,隨后脫水、封片、鏡檢。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)膀胱癌患者癌組織以及距離腫瘤邊緣3 cm的膀胱癌旁組織中PD-1 mRNA的表達(dá):使用Trizol試劑提取膀胱癌組織總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA,并進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和電泳。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 PD-1 mRNA在膀胱癌中的表達(dá)

膀胱癌患者癌組織中PD-1陽(yáng)性表達(dá)率63.75%(51/80),PD-1 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率68.75%(55/80),而距離腫瘤邊緣3 cm的膀胱癌旁組織均未見明顯的PD-1和PD-1 mRNA表達(dá)。

2.2 PD-1在膀胱癌中的表達(dá)強(qiáng)度與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

PD-1和PD-1 mRNA的表達(dá)強(qiáng)度與膀胱癌患者的年齡、性別、腫瘤分級(jí)之間無(wú)明顯的相關(guān)性(P>0.05),而PD-1和PD-1 mRNA的表達(dá)強(qiáng)度與TNM分期具有明顯的相關(guān)性(P<0.05),即隨著膀胱癌患者腫瘤分期的增加,PD-1和PD-1 mRNA表達(dá)逐漸增加(P<0.05)(見表1和表2)。

表1 膀胱癌患者PD-1表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系 單位:例

表2 膀胱癌患者PD-1 mRNA表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系

3 討 論

膀胱癌是女性常見的惡性腫瘤,也是男性第四大常見惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計(jì),全世界有50萬(wàn)例新發(fā)膀胱癌病例和20萬(wàn)死亡病例,僅在美國(guó),每年就有8萬(wàn)多例新發(fā)病例和1.7萬(wàn)死亡病例[6-7]。膀胱癌的病因目前尚不明確,主要受內(nèi)在遺傳因素和外在環(huán)境因素的影響,且其發(fā)生發(fā)展受多因素影響。研究[8-9]表明,膀胱癌與其他癌癥一樣,是由于多種致癌因素長(zhǎng)期作用于正常細(xì)胞,導(dǎo)致原癌基因被激活,在復(fù)制及轉(zhuǎn)錄過程中沒能及時(shí)修復(fù)受損的DNA,使癌細(xì)胞無(wú)限制地復(fù)制增殖直至發(fā)生癌變。

PD-1是一種重要的免疫抑制分子,細(xì)胞程序性死亡受體1-配體(PD-L1)蛋白正是PD-1的配體。T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫由檢查/平衡系統(tǒng)控制,PD-1/PD-L1抑制通路也叫做免疫檢查點(diǎn),負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化和效應(yīng)功能,維持自身的耐受性[10-11]。PD-1位于T細(xì)胞,能夠與基質(zhì)細(xì)胞中的PD-L1結(jié)合,二者結(jié)合后可使T細(xì)胞失去攻擊癌細(xì)胞的能力。PD-L1與PD-1的結(jié)合作為介導(dǎo)T細(xì)胞活化的共抑制信號(hào),可抑制T細(xì)胞的殺傷功能,對(duì)人體免疫應(yīng)答起到負(fù)調(diào)節(jié)作用[12-13]。在正常細(xì)胞中,PD-1的激活使T細(xì)胞失去攻擊能力,減輕由于慢性感染引起的組織損傷,這種機(jī)制是為了保護(hù)機(jī)體在炎癥狀態(tài)時(shí)免受不必要的組織損傷[14-15]。然而腫瘤卻將這種機(jī)體免疫保護(hù)機(jī)制用于自身的生存。因?yàn)槟[瘤細(xì)胞能夠上調(diào)PD-1配體的表達(dá),PD-L1是癌癥細(xì)胞使用的主要的PD-1配體,PD-L1與PD-1的結(jié)合導(dǎo)致腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞失去殺傷能力,使得腫瘤生長(zhǎng)不受抑制[3,16-17]。本研究發(fā)現(xiàn),膀胱癌患者癌組織PD-1陽(yáng)性表達(dá)率為63.75%(51/80),PD-1 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為68.75%(55/80),而距離腫瘤邊緣3 cm的膀胱癌旁組織均未見明顯的PD-1表達(dá)。通過臨床相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),PD-1的表達(dá)與膀胱癌腫瘤臨床TNM分期密切相關(guān)(P<0.05),但與膀胱癌患者的年齡、性別、腫瘤分級(jí)等無(wú)明顯的相關(guān)性(P<0.05),說明在膀胱癌患者腫瘤細(xì)胞中PD-1高表達(dá),且其表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤TNM分期密切相關(guān)。隨著膀胱癌患者腫瘤TNM分期的增加,機(jī)體內(nèi)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞失去殺傷能力,使免疫系統(tǒng)處于失衡狀態(tài),導(dǎo)致膀胱癌細(xì)胞不斷地生長(zhǎng)增殖、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移,致使病情加重,進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞中PD-1表達(dá)增加,威脅生命安全。腫瘤細(xì)胞中PD-1的高表達(dá)能夠促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的快速生長(zhǎng),因此臨床上可通過注射PD-1抗體進(jìn)行治療,以控制疾病進(jìn)展,提高生存率。明確PD-1受體功能對(duì)膀胱癌的影響具有非常重要的價(jià)值和意義,可為膀胱癌患者提供最優(yōu)治療方案,改善生活質(zhì)量。

綜上所述,膀胱癌患者癌組織中PD-1高度表達(dá),其在膀胱癌腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中具有一定的作用,可用來(lái)評(píng)估膀胱癌進(jìn)展程度。