鄭文靜，田亞東，李轉(zhuǎn)見，李東華

（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南鄭州 450046）

禽白血病(Avian leukosis，AL)是由禽白血病病毒(Avian leukemia virus，ALV)引起的禽類多種細(xì)胞腫瘤性免疫抑制性傳染病[1]。該病在世界范圍內(nèi)均有發(fā)生和流行[2,3]，是影響?zhàn)B禽業(yè)發(fā)展的重要傳染病之一，屬于我國二類動(dòng)物傳染病，被列入《國家動(dòng)物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃（2021—2025）》 防治計(jì)劃[4]。由于尚無有效的治療和防治方法，目前主要是通過凈化種群來進(jìn)行預(yù)防[5]。在我國的地方品種中均分離出ALV 的亞群，現(xiàn)有的預(yù)防手段不能控制AL 的發(fā)生和流行。國外已經(jīng)從研究宿主的遺傳抗性方面尋求防控策略。因此，我們可以試圖借鑒這種策略來提高AL 的凈化效率，降低AL 的傳播和流行，培育出更多抵抗AL 的品種。

1 病原學(xué)特征

禽白血病病毒屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科，禽C 型反轉(zhuǎn)錄病毒屬[6]。ALV 屬于單股正鏈RNA 病毒，病毒的基因組順序從左往右依次為5'-U3-R-U5-gagpol-env-U3-R-U5-3'（其中ALV 的前病毒基因組結(jié)構(gòu)簡圖見圖1[7]），病毒基因組中g(shù)ag、pol 和env3 個(gè)結(jié)構(gòu)基因的作用分別是編碼衣殼蛋白、包膜蛋白、囊膜糖蛋白，由于env 基因可以編碼出不同的囊膜糖蛋白[8]，根據(jù)囊膜糖蛋白的差異性、宿主的范圍、基因組結(jié)構(gòu)等，將該病毒分為A-J、K 等11 種亞型[9]。其中A、B、C、D、E 和J 亞群主要存在于自然感染的雞群中[10]，A、B、J 亞群為外源性病毒，E、F、G、H、I 亞群為內(nèi)源性病毒，E 亞群是存在于雞體內(nèi)的內(nèi)源性病毒。杜巖等[11]于1999 年在國內(nèi)肉雞中首次檢出J 亞型，此后，在蛋雞和地方品系中也發(fā)現(xiàn)J 亞群的流行，對(duì)我國養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重影響。此外，在我國地方品種雞群中分離和鑒定出了一個(gè)新的致病力較弱的ALV-K 亞型[12,13]。

圖1 ALV 前病毒基因組結(jié)構(gòu)簡圖

2 流行病學(xué)特點(diǎn)

禽白血病病毒可感染各種年齡的雞，但其主要感染雞群是雛雞。在雛雞中，其感染高峰一般發(fā)生在出殼后7d，高峰期在4～5 周，而在成雞中，感染高峰一般發(fā)生在12～24 周。ALV 主要通過血液和消化道傳播，通常呈垂直傳播。經(jīng)口途徑的傳播可能是通過糞便污染的飼料、飲水或接觸被污染的雞群而實(shí)現(xiàn)的。ALV 在不同動(dòng)物中具有不同的生物學(xué)特性，對(duì)雞的危害較大。根據(jù)感染的部位不同，可將ALV 分為血源性和組織源性兩類。血源性ALV 主要見于雛雞和成年雞，可通過血液、臍帶或糞便傳播，其感染雞群數(shù)量多且常呈地方性流行。除血源性ALV 外，在雛雞中也發(fā)現(xiàn)組織源性ALV 病毒，其對(duì)雛雞的危害遠(yuǎn)大于血源性ALV，以產(chǎn)蛋母雞感染最為常見。對(duì)于ALV 已有大量文獻(xiàn)進(jìn)行了詳細(xì)論述，但目前針對(duì)該病的研究大多集中于病原特性、臨床癥狀等方面，而對(duì)于其流行特點(diǎn)研究較少。

3 禽白血病病毒檢測方法

禽白血病表現(xiàn)出的腫瘤癥狀與馬立克氏病等臨床癥狀存在很大的相似性，很難用肉眼來準(zhǔn)確鑒定，常常借助實(shí)驗(yàn)室的方法來進(jìn)行確診，ALV檢測的方法主要有血清學(xué)檢測、p27 抗原ELISA檢測、細(xì)胞培養(yǎng)分離鑒定病毒和核酸檢測。

3.1 血清學(xué)檢驗(yàn)

血清學(xué)檢驗(yàn)通常用雙抗夾心ELISA 方法，該方法常常用于篩選外源病毒感染，具有簡單、操作方便、可用于大批量雞群檢測的特點(diǎn)，常常用于判定SPF 雞群有無感染，該方法的缺點(diǎn)是對(duì)內(nèi)源性病毒無法進(jìn)行篩選。

3.2 病毒分離鑒定

病毒分離鑒定是檢測外源性ALV 最有效的手段。該方法特異性高，可分離和保存流行病株并鑒定其亞群，對(duì)致病性進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。但是該方法存在技術(shù)要求高、需要特定實(shí)驗(yàn)室、成本高、周期長等缺點(diǎn)。

3.3 核酸檢測方法

核酸檢測可用PCR/ 熒光定量PCR/ 核酸斑點(diǎn)分子雜交的方法。該種方法可直接檢測各種樣品中的病毒感染，具有方法簡單易學(xué)、出結(jié)果快、成本低的優(yōu)點(diǎn)。但也存在較高比例的假陽性和較高比例的假陰性，可重復(fù)性較差。

4 禽白血病病毒凈化

禽白血病病毒是一種垂直傳播性病毒，病毒從曾祖代傳播到父母代到商品代逐代放大。雖然各國研究人員都在致力于開發(fā)禽白血病的疫苗和具有針對(duì)性的藥物，但都沒有好的進(jìn)展和效果[14]。目前，預(yù)防和控制AL 的主要措施仍是對(duì)原種雞場雞群進(jìn)行凈化，將感染的雞群篩除，建立無ALV感染的核心種雞群是首選的最有效的防治方法[15-17]。目前，在國內(nèi)，通常采用崔治中[18]教授提出的禽白血病核心雞群的四大凈化原則。在生產(chǎn)中，對(duì)核心區(qū)母雞通常在4 個(gè)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)開展篩查[4]：一是檢測1d 雛雞胎糞中的p27 抗原，并對(duì)篩查出的陽性雞進(jìn)行淘汰。二是采集雞（6～10 周）的血漿對(duì)病毒進(jìn)行分離鑒定從而淘汰陽性雞。三是采集開產(chǎn)初期母雞（23～25 周）初產(chǎn)蛋的蛋清p27 蛋白抗原進(jìn)行檢測淘汰陽性雞。四是檢測留種前種蛋蛋清p27 蛋白抗原淘汰陽性雞。此外，對(duì)于核心種公雞可采取雞的精液開展病毒分離鑒定[19]。種雞場在生產(chǎn)中可以根據(jù)自身的實(shí)際情況挑選上述任意一個(gè)時(shí)期開展凈化工作[20]。種禽場在開展凈化的同時(shí)，需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好生物安全防控，避免發(fā)生因凈化不到位而引起ALV抗原和抗體突然升高的現(xiàn)象。

5 禽白血病受體遺傳的多樣性

隨著ALV 病毒的不斷變異，出現(xiàn)了越來越多的ALV 亞型，嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)的發(fā)展。各種不同的亞型病毒因?yàn)閑nv 蛋白出現(xiàn)差異從而出現(xiàn)不同的宿主蛋白。tva 是A 和K 亞型的蛋白受體，tvb 是B、D、E 亞型的蛋白受體，tvc 是C亞型的蛋白受體，chNHE1 是J 亞型的蛋白受體。不同亞群的ALV 由不同的細(xì)胞受體進(jìn)入宿主細(xì)胞，從而發(fā)生感染[21]。由于受體基因的遺傳變異從而導(dǎo)致受體蛋白的表達(dá)缺失或者表達(dá)為不適合病毒受體的缺陷型蛋白，進(jìn)而使宿主細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)某種ALV 亞型的抗性或者導(dǎo)致對(duì)ALV 不敏感[22]。tva 決定A 亞群病毒的易感性，tva 決定B、D、E亞群病毒的易感性，tvc 決定C 亞型病毒的易感性，chNHE1(tvj)決定著J 亞群的易感性。

5.1 tva 基因的遺傳多樣性

tva 是編碼ALV-A 亞群和ALV-K 亞群的病毒感染的tva 受體蛋白基因，決定對(duì)ALV-A 的易感性和抗感染性[23]，包含6 個(gè)抗性基因（tvar1、tvar2、tvar3、tvar4、tvar5和tvar6）和一個(gè)易感基因（tvas），抗性基因是tva 的復(fù)等位基因[24]。由于tva受體基因發(fā)生遺傳突變從而導(dǎo)致受體蛋白缺失或者表達(dá)一個(gè)不適合ALA-A 受體的缺陷型受體蛋白。tvar1是tva 基因的第619 位堿基（C＞G），引起對(duì)應(yīng)編碼的半胱基酸（Cys）突變成色氨酸（Trp），從而降低了A 亞型囊膜糖蛋白與受體的親和力，產(chǎn)生對(duì)A 亞型的遺傳抗性。tvar2是由于外顯子基因C305-306位點(diǎn)插入4（CTCG）個(gè)堿基，導(dǎo)致tva 蛋白缺失，產(chǎn)生對(duì)A 亞型的抗性[25]。tvar3是tva 基因（C507-516）序列缺失10 個(gè)堿基（ACCCCGCCCC）；tvar4是tva 基因（C507-511）的序列缺失5 個(gè)堿基（ACCCC），tvar3和tvar4堿基的缺失干擾了mRNA 的剪接，導(dǎo)致內(nèi)含子或終止密碼子TGA 過早出現(xiàn)，降低了tva 受體蛋白與病毒囊膜蛋白的親和力，從而使ALV-A 的易感性降低[26]?？剐曰虻某霈F(xiàn)，為ALV-A 的防治及培育新的品種提供了指導(dǎo)和方向。

5.2 tvb 基因的遺傳多樣性

tvb 基因是編碼ALV-B、ALV-D 和ALV-E亞群病毒感染的tvb 蛋白受體，是引起腫瘤壞死因子受體家族[27]。tvb 的遺傳抗性基因位點(diǎn)有5 個(gè)（tvbs1、tvbs3、tvbr1、tvbr2和tvbT）。因?yàn)閠vbs1的堿基沒有發(fā)生突變，所以對(duì)ALV-B、ALV-D、ALV-E 亞群易感；tvbs3是由于單堿基發(fā)生突變（T ＞A），產(chǎn)生抗E 亞群的特性，tvbr1堿基發(fā)生突變，導(dǎo)致氨基酸終止密碼子提前出現(xiàn)，受體蛋白的機(jī)構(gòu)發(fā)生改變，最終產(chǎn)生ALV-B、D、E 抗性[28]。tvbr2是由于單堿基突變從而使半胱氨酸（Cys）突變?yōu)榻z氨酸（Cas），tvb 的蛋白區(qū)域結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，產(chǎn)生抗E 亞群，降低對(duì)B、D 亞群的易感性[29]；tvbT存在于火雞中，對(duì)ALV-B、ALV-D 亞群具有抗性，但是對(duì)ALV-E 亞群具有易感性[30]。由于tvb 蛋白受體家族龐大，引起的AL 亞型復(fù)雜，給核心群篩選凈化帶來諸多不變。

5.3 tvc 基因的遺傳多樣性

tvc 基因是編碼ALV-C 亞型的tvc 蛋白受體，由于該蛋白基因存在于雞28 號(hào)染色體上，所以兩者存在連鎖現(xiàn)象。tvc 有兩種基因（tvcs、tvcr），tvcs是引起ALV-C 亞型感染的基因，由于C 亞型在臨床上感染率低，生產(chǎn)中很難進(jìn)行測定，只有通過定位克隆進(jìn)行鑒定[31]。tvcr是單堿基（C＞A）突變，從而提前終止密碼，產(chǎn)生抗性等位基因，最終對(duì)生ALV-C 亞型產(chǎn)生抗性。雖然C 亞型在群體中不常見，但我們也不能忽略對(duì)該亞型種群的篩查。

5.4 tvj 基因的遺傳多樣性

chNHE1 是編碼ALV-J 感染的受體蛋白，chNHE1 在低PH 值條件下，可以介導(dǎo)ALV-J 與靶細(xì)胞膜融合[32]。tvj 存在兩種等位基因，分別是tvjs和tvjr。tvjs是tvj 的易感基因體，可誘發(fā)ALV-J 亞型的易感，tvjr是外顯子W38 缺失或突變而產(chǎn)生的復(fù)等位基因，對(duì)ALV-J 具有抗性。J亞型在世界白羽肉雞中廣泛流行，在2005 年已實(shí)現(xiàn)凈化。但是，國內(nèi)ALV-J 在白羽肉雞流行后，迅速傳播到蛋雞和其他地方品種中，給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重危害。

6 禽白血病抗病育種的途徑

6.1 利用受體基因的遺傳抗性

由ALV 亞型的遺傳多樣性可知，在生產(chǎn)中可以設(shè)法選出或者利用生物標(biāo)記技術(shù)標(biāo)出AlV-A亞型的抗性等位基因tvar1和tvar2；AlV-B 亞型的抗性等位基因tvbs1、tvbr1和tvbr2；AlV-C 亞型的抗性等位基因tvcr；AlV-J 亞型的抗性等位基因tvjr。將標(biāo)記出來的抗性等位基因個(gè)體進(jìn)行純化，利用雜交的方式培育出抗性基因多的品種和品系，從而達(dá)到ALV 亞型綜合防治，提高家禽生產(chǎn)性能的目的。

6.2 利用半性遺傳（K）基因育種

由于慢羽雞比快羽雞對(duì)AL 敏感且更難凈化。起初因?yàn)镵 基因與ALV 的一個(gè)e21基因存在緊密連鎖關(guān)系[33]，人們開始研究e21是否能引起慢羽雞的生活力下降。Bacon 等[34]經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，慢羽雞體內(nèi)均攜帶ev21基因，而快羽雞體內(nèi)沒有ev21基因。Smith 和Fadly[35]的研究表明，ev21可以引起雞對(duì)ALV 產(chǎn)生免疫耐受性，提高外源AL 的易感性。白春艷等[36]研究發(fā)現(xiàn)，慢羽雞比快羽雞易感AL，譚艷等[37]研究表明，快慢羽雞抗ALV-J 的天然免疫反應(yīng)差異顯著性明顯，并且慢羽雞抗ALV-J 的天然免疫反應(yīng)比快羽雞遲鈍且強(qiáng)度較弱。上述研究為我們培育抗病性能好的快慢羽雞提供了數(shù)據(jù)支撐和理論依據(jù)，有利于培育抗AL性能的品系。

7 小結(jié)

禽白血病作為垂直傳播的傳染病之一，由于亞型較多、傳播速度快，缺乏疫苗和針對(duì)性的藥物進(jìn)行防治，給全球養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)實(shí)生產(chǎn)中可通過分子生物學(xué)手段標(biāo)記出ALV 抗性基因，培育具有抗性基因的品種來防治ALV 的感染。伴性遺傳中慢羽雞與快羽雞在抗ALV-J 中的天然免疫具有明顯差異，但是慢羽雞攜帶的e21可能還在天然免疫中還扮演著其他角色，所以，對(duì)于通過羽速來培養(yǎng)抗ALV 感染的品種（品系）雞群，還有待進(jìn)一步研究。