晏一平，陳云志，李 倩，陳波洋，范志梁，陳 帥，柴藝匯，秦 忠

（貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC） 是一種以反復(fù)腹痛、腹瀉、膿血便及體質(zhì)量減輕為主要臨床表現(xiàn)的自身免疫性炎癥疾病，主要病理表現(xiàn)為結(jié)腸炎癥和黏膜損傷［1］。我國UC 的患病率急劇上升［2］。UC 發(fā)病機(jī)制至今尚不明確，可能與遺傳易感性、腸黏膜屏障受損、黏膜免疫應(yīng)答失調(diào)和環(huán)境因素有關(guān)［3］。臨床治療UC 常用藥物有氨基水楊酸類、類固醇、免疫抑制劑、生物制劑等，雖能緩解臨床癥狀，但增加了感染和患癌的風(fēng)險(xiǎn)［4］。因此，研究UC 的發(fā)病機(jī)制和藥物開發(fā)具有重要意義。

細(xì)胞焦亡是近年來發(fā)現(xiàn)的一種由炎癥小體引發(fā)的裂解性程序性細(xì)胞死亡形式，在組織穩(wěn)態(tài)及免疫調(diào)節(jié)中充當(dāng)重要角色。適度的細(xì)胞焦亡可保護(hù)機(jī)體免受病原體及微生物感染，但其過度激活可引起組織損傷促進(jìn)炎癥反應(yīng)，在UC 發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用［5-6］。中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng) （neutrophil extracellular traps，NETs） 是中性粒細(xì)胞釋放其細(xì)胞外染色質(zhì)、核蛋白和絲氨酸蛋白酶形成一種以DNA 為框架的網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)，其作為一種免疫監(jiān)管行為，可通過誘捕作用防御病原體感染，但過量的NETs 可導(dǎo)致UC 病理性炎癥［7］。研究顯示，細(xì)胞焦亡可引發(fā)NETs 放大炎癥反應(yīng)，NETs 亦可誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡［8］?？梢姡?xì)胞焦亡與NETs 相互影響并在UC 的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。

刺梨為薔薇科薔薇屬植物繅絲花Rosa roxburghiiTratt，是貴州資源豐富的民族藥材，其性味甘、酸，歸脾、胃、腎經(jīng)，民間多用于治療食積腹脹、泄瀉、痢疾、腸炎等疾病［9］。刺梨根是刺梨的干燥根莖，現(xiàn)代研究表明刺梨根可有效改善UC 炎癥［10］。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，刺梨根可通過改善UC 大鼠腸道病理結(jié)構(gòu)起到干預(yù)UC 的作用［11］，但其對UC 的作用機(jī)制是否與調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡及NETs 相關(guān)，至今未見明確報(bào)道。因此，本研究基于細(xì)胞焦亡及NETs 探討刺梨根干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制，以期為刺梨根治療UC 的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 SPF 級SD 大鼠48 只（雌雄各半），體質(zhì)量（200±20） g，購自貴州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心 ［實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號SCXK （黔）2021-0003］，飼養(yǎng)于本校實(shí)驗(yàn)動物中心SPF 級動物房，溫度22～24 ℃，相對濕度40% ～60%。動物實(shí)驗(yàn)獲得貴州中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理號20210101）。

1.2 藥物 刺梨根（批號20190501） 購自貴州德昌祥健康管理有限公司，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)方藥教研室蔣志濱副教授鑒定為薔薇科植物繅絲花Rosa roxburghiiTratt 的干燥根。刺梨根用蒸餾水浸泡0.5 h，武火煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮1 h，過濾，藥渣加蒸餾水同法再次煎煮，合并2 次煎煮液，濃縮至生藥量0.8 g/mL，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑 柳氮磺吡啶（批號s129986-25g，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）； 三硝基苯磺酸（批號P2297，美國Sigma 公司）； 糞便隱血定性檢測試劑盒（批號206A21，北京雷根生物技術(shù)有限公司）； 山羊抗兔二抗、消皮素D （gasdermin D，GSDMD） 抗體、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO） 抗體 （ 批號 SA00001-2、20770-1-AP、22225-1-AP，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）； 活化半胱天冬氨酸酶-1 （cysteinyl aspartate specific proteinase 1，caspase-1）、NOD 樣受體蛋白 3（NOD-like receptor protein3，NLRP3）、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（neutrophil elastase，NE）、GAPDH 抗體（批號AF5418、DF7438、AF0010、AF7021，美國Affinity 公司）； 白細(xì)胞介素-1β （interleukin-1β，IL-1β）、IL-18、MPO ELISA 試劑盒 （批號JM-01454R2、JM-01601R2、JM-01744R2，江蘇晶美生物科技有限公司）。

1.4 儀器 BMJ-A 型組織包埋機(jī)（常州郊區(qū)中威電子儀器廠）； 轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)（德國徠卡公司）；JT-12S 自動脫水機(jī) （武漢俊杰電子有限公司）；PHY-Ⅲ病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）； LISKANMK3 酶標(biāo)儀 （美國 Thermo Fisher Scientific 公司）； HI650 型離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）； DYCZ-24DN 垂直電泳槽（北京六一生物科技有限公司）。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥 將48 只SD 大鼠（雌雄各半） 適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為正常組（8只） 和造模組（40 只）。造模前大鼠禁食24 h，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30 mg/kg） 麻醉后，將三硝基苯磺酸（TNBS） 與0.25 mL 50%乙醇混合溶液（100 mg/kg） 經(jīng)灌腸軟管緩慢注入距大鼠肛門約8 cm 處深的結(jié)腸部位，隨即倒置5 min，謹(jǐn)防藥液流出［12］； 正常組大鼠同法灌注生理鹽水。將造模成功的40 只大鼠隨機(jī)分為模型組、柳氮磺吡啶組（0.3 g/kg） 和刺梨根低、中、高劑量組（2、4、8 g/kg），每組8 只。正常組和模型組均灌胃生理鹽水，各給藥組灌胃相應(yīng)劑量藥物，每天1 次，連續(xù)給藥21 d。

2.2 樣本采集 末次給藥后禁食24 h，大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30 mg/kg） 麻醉后，腹主動脈取血，靜置0.5 h 后3 000 r/min 離心10 min，分離采集血清，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?處死大鼠后，取距離肛門（8±2） cm 結(jié)腸組織，一部分置于4%多聚甲醛中固定，另一部分置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 大鼠一般情況觀察及疾病活動指數(shù)（DAI）評分 每天觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)光澤、活動體態(tài)、大便性狀等變化，記錄大鼠體質(zhì)量、大便性狀，通過鄰聯(lián)甲苯胺法檢測大鼠大便隱血情況（2 min 內(nèi)顯藍(lán)色則提示隱血陽性，根據(jù)其顏色深淺判斷陽性的強(qiáng)弱，在2 min 內(nèi)不顯色為陰性），根據(jù)Okayasu 等［13］報(bào)道的評分標(biāo)準(zhǔn)記錄各組大鼠疾病活動指數(shù)（disease aetivity index，DAI） 得分，DAI 評分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 DAI 評分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 DAI scoring standards

2.4 HE 染色觀察大鼠結(jié)腸組織病理變化 取于4%多聚甲醛中固定的結(jié)腸，常規(guī)包埋，連續(xù)切片，蘇木素染色，伊紅復(fù)染，脫水，透明，封片后于顯微鏡下觀察。

2.5 ELISA 法檢測大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO水平 取各組大鼠血清，按照ELISA 試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測各組大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO 水平。

2.6 免疫組化法檢測大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá) 取結(jié)腸組織切片，脫臘至水，抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，正常血清封閉，一抗4 ℃孵育過夜，次日PBS 洗滌3 次，滴加二抗，37 ℃孵育30 min，PBS洗滌3 次后，復(fù)染細(xì)胞核，脫水、封片，采集染色切片圖像，使用Halo 數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)計(jì)算NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 陽性染色面積占比。

2.7 Western blot 法檢測大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá) 取少量結(jié)腸組織，剪碎后勻漿，于冰上裂解30 min，離心取上清，BCA 法測定樣品蛋白濃度。將提取的蛋白上清與5×蛋白上樣緩沖液混勻，于沸水中加熱10 min 進(jìn)行變性。蛋白樣品上樣后電泳、轉(zhuǎn)膜，加封閉液室溫?fù)u床封閉2 h，加入一抗GAPDH （1 ∶1 000）、NE （1 ∶1 000）、caspase-1 （1 ∶1 000）、NLRP3 （1 ∶1 000）、MPO （1 ∶2 000）、GSDMD（1 ∶3 000） 4 ℃孵育過夜，洗膜后加入二抗IgG（1 ∶600） 室溫?fù)u床孵育2 h，洗膜3 次，曝光、顯影，使用BandScan 軟件分析條帶灰度值，以GAPDH 為內(nèi)參計(jì)算目的蛋白相對表達(dá)。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過SPSS 26.0 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)及Dunnett’s T3 檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 刺梨根對UC 大鼠一般情況的影響 正常組大鼠精神狀態(tài)正常，活動靈敏，毛發(fā)光亮順滑，大便正常； 模型組大鼠體質(zhì)量下降，精神萎靡，弓背，活動遲緩，毛發(fā)枯燥無光澤，伴有稀便、血便； 與模型組比較，刺梨根中、高劑量組及柳氮磺吡啶組大鼠癥狀日漸好轉(zhuǎn)，體質(zhì)量回升，精神狀態(tài)漸佳、活動增多、毛發(fā)色澤漸好、大便成形且未見明顯血便。

3.2 刺梨根對UC 大鼠體質(zhì)量及DAI 評分的影響 給藥前，與正常組比較，各造模組大鼠體質(zhì)量均降低（P＜0.01），DAI 評分均升高（P＜0.01）。給藥21 d 后，與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量降低（P＜0.01），DAI 評分升高（P＜0.01）； 與模型組比較，柳氮磺吡啶組和刺梨根中、高劑量組大鼠體質(zhì)量升高 （P＜0.01），DAI 評分降低 （P＜0.05，P＜0.01），刺梨根低劑量組大鼠體質(zhì)量升高（P＜0.05），DAI 評分無明顯變化（P＞0.05），見表2～3。

表2 刺梨根對UC 大鼠體質(zhì)量的影響（g，±s，n＝8）Tab.2 Effects of R.roxburghii Radix on body weight of UC rats （g，x ±s，n＝8）

表2 刺梨根對UC 大鼠體質(zhì)量的影響（g，±s，n＝8）Tab.2 Effects of R.roxburghii Radix on body weight of UC rats （g，x ±s，n＝8）

注： 與正常組比較，**P ＜0.01； 與模型組比較，＃P ＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別給藥前體質(zhì)量給藥21 d 后體質(zhì)量正常組210.5±8.38251.13±9.23模型組191.5±10.62**213.88±11.32**柳氮磺吡啶組191.13±13.70**237.25±8.84＃＃刺梨根低劑量組193.13±8.36**224.88±11.31＃刺梨根中劑量組193.38±10.34**230.25±6.04＃＃刺梨根高劑量組191.88±17.53**234.38±8.26＃＃

表3 刺梨根對UC 大鼠DAI 評分的影響（分，±s，n＝8）Tab.3 Effects of R.roxburghii Radix on DAI score of UC rats （score，±s，n＝8）

注： 與正常組比較，**P ＜0.01； 與模型組比較，＃P ＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別給藥前DAI 評分給藥21 d 后DAI 評分正常組00模型組2.29±0.79**1.88±0.25**柳氮磺吡啶組2.42±0.53**0.54±0.18＃＃刺梨根低劑量組2.63±0.74**1.29±0.45刺梨根中劑量組2.62±0.38**0.96±0.49＃刺梨根高劑量組2.33±0.53**0.58±0.35＃＃

3.3 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)的影響正常組大鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層、肌層及漿膜層形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，未見明顯病理改變； 模型組大鼠結(jié)腸組織黏膜層大面積變性壞死、腸腺結(jié)構(gòu)消失并見大量的纖維組織增生，同時伴有大量炎性細(xì)胞浸潤并累及黏膜下層、肌層和漿膜層； 柳氮磺吡啶組和刺梨根高劑量組大鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層、肌層及漿膜層結(jié)構(gòu)較完整，炎性細(xì)胞浸潤較模型組明顯減少； 刺梨根中劑量組黏膜層局部區(qū)域變性壞死，較模型組稍改善，見圖1。

圖1 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化的影響（HE，×100）Fig.1 Effects of R.roxburghii Radix on histopathological changes of colon in UC rats （HE，×100）

3.4 刺梨根對UC 大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO水平的影響 與正常組比較，模型組大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO 水平升高（P＜0.01）； 與模型組比較，柳氮磺吡啶組和刺梨根中、高劑量組大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO 水平降低（P＜0.01），刺梨根低劑量組大鼠血清IL-1β 水平降低（P＜0.01），IL-18、MPO 水平無明顯變化（P＞0.05），見表4。

表4 刺梨根對UC 大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO 水平的影響（pg/mL，±s，n＝6）Tab.4 Effects of R.roxburghii Radix on serum IL-1β，IL-18 and MPO levels of UC rats （pg/mL，±s，n＝6）

表4 刺梨根對UC 大鼠血清IL-1β、IL-18、MPO 水平的影響（pg/mL，±s，n＝6）Tab.4 Effects of R.roxburghii Radix on serum IL-1β，IL-18 and MPO levels of UC rats （pg/mL，±s，n＝6）

注： 與正常組比較，**P＜0.01； 與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別IL-1βIL-18MPO正常組15.38±4.7388.93±5.3172.27±18.80模型組30.00±3.35**141.42±3.47**146.57±22.49**柳氮磺吡啶組16.00±2.42＃＃96.45±10.45＃＃81.82±21.01＃＃刺梨根低劑量組21.07±4.30＃＃111.61±17.69130.29±14.40刺梨根中劑量組20.37±1.76＃＃104.64±13.01＃＃100.58±9.79＃＃刺梨根高劑量組15.18±2.50＃＃91.72±6.08＃＃86.17±15.67＃＃

3.5 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)的影響 免疫組化結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、NLRP3、caspase-1、GSDMD 蛋白表達(dá)升高（P＜0.01）； 與模型組比較，柳氮磺吡啶組和刺梨根中、高劑量組大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、NLRP3、caspase-1、GSDMD 蛋白表達(dá)降低（P＜0.01），低劑量組大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05，P＜0.01），NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），見圖2～6、表5。

圖2 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NE 蛋白表達(dá)的影響（免疫組化，×400）Fig.2 Effects of R.roxburghii Radix on NE protein expression in colon tissue of UC rats （IHC，×400）

圖3 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織MPO 蛋白表達(dá)的影響（免疫組化，×400）Fig.3 Effects of R.roxburghii Radix on MPO protein expression in colon tissue of UC rats （IHC，×400）

圖5 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NLRP3 蛋白表達(dá)的影響（免疫組化，×400）Fig.5 Effects of R.roxburghii Radix on NLRP3 protein expression in colon tissue of UC rats （IHC，×400）

圖6 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織GSDMD 蛋白表達(dá)的影響（免疫組化，×400）Fig.6 Effects of R.roxburghii Radix on GSDMD protein expression in colon tissue of UC rats （IHC，×400）

表5 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白陽性染色面積的影響（%，±s，n＝3）Tab.5 Effects of R.roxburghii Radix on the positive staining area of NE，MPO，caspase-1，NLRP3 and GSDMD proteins in colon tissue of UC rats （%，±s，n＝3）

表5 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白陽性染色面積的影響（%，±s，n＝3）Tab.5 Effects of R.roxburghii Radix on the positive staining area of NE，MPO，caspase-1，NLRP3 and GSDMD proteins in colon tissue of UC rats （%，±s，n＝3）

注： 與正常組比較，**P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別NEMPOcaspase-1NLRP3GSDMD正常組2.66±0.5813.78±4.883.53±1.185.75±2.6110.34±1.94模型組18.60±3.09**29.74±11.05**31.73±3.69**21.23±2.43**24.65±0.78**柳氮磺吡啶組6.19±2.86＃＃11.86±4.23＃＃11.09±3.54＃＃5.50±2.47＃＃17.50±2.19＃＃刺梨根低劑量組14.14±1.47＃16.06±5.62＃＃23.57±3.61＃＃18.66±2.8822.78±1.19刺梨根中劑量組10.07±1.98＃＃11.44±2.69＃＃15.24±2.09＃＃12.59±2.85＃＃20.19±0.35＃＃刺梨根高劑量組6.35±2.18＃＃12.01±8.70＃＃9.18±3.43＃＃7.31±3.10＃＃14.19±1.15＃＃

Western blot 結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)均升高（P＜0.01）； 與模型組比較，柳氮磺吡啶組及刺梨根中、高劑量組大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05，P＜0.01），刺梨根低劑量組大鼠結(jié)腸組織MPO、NLRP3 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05，P＜0.01），NE、caspase-1、GSDMD 蛋白表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），見圖7、表6。

圖7 各組大鼠結(jié)腸組織 NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白條帶圖Fig.7 Protein bands of NE，MPO，caspase-1，NLRP3 and GSDMD in colon tissues of rats in each group

表6 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)的影響（±s，n＝3）Tab.6 Effects of R.roxburghii Radix on the protein expressions of NE，MPO，caspase-1，NLRP3 and GSDMD in colon tissue of UC rats （±s，n＝3）

表6 刺梨根對UC 大鼠結(jié)腸組織NE、MPO、caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)的影響（±s，n＝3）Tab.6 Effects of R.roxburghii Radix on the protein expressions of NE，MPO，caspase-1，NLRP3 and GSDMD in colon tissue of UC rats （±s，n＝3）

注： 與正常組比較，**P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別NEMPOcaspase-1NLRP3GSDMD正常組0.31±0.100.25±0.030.29±0.060.26±0.040.28±0.04模型組0.75±0.04**0.72±0.05**0.69±0.04**0.77±0.02**0.70±0.07**柳氮磺吡啶組0.51±0.08＃＃0.45±0.03＃＃0.42±0.10＃＃0.51±0.09＃＃0.47±0.05＃＃刺梨根低劑量組0.66±0.080.59±0.03＃＃0.62±0.060.64±0.07＃0.62±0.07刺梨根中劑量組0.50±0.04＃＃0.47±0.02＃＃0.50±0.02＃＃0.58±0.07＃＃0.53±0.10＃刺梨根高劑量組0.42±0.04＃＃0.33±0.05＃＃0.37±0.05＃＃0.42±0.06＃＃0.39±0.09＃＃

4 討論

UC 病程長、致癌風(fēng)險(xiǎn)高、治愈難度大，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，故尋找高療效、低不良反應(yīng)率的藥物治療UC 是關(guān)鍵［14］。本實(shí)驗(yàn)基于祖國醫(yī)學(xué)及目前相關(guān)研究對刺梨根的認(rèn)識，發(fā)現(xiàn)刺梨根能有效改善UC 大鼠炎癥、一般情況、DAI 評分、結(jié)腸組織病理情況。

NETs 是中性粒細(xì)胞經(jīng)刺激活化后釋放一種以DNA 為骨架，其間鑲嵌有NE、MPO 等顆粒蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)［15］。研究發(fā)現(xiàn)，UC 中MPO、NE 高表達(dá)并與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［16］。MPO 是一種主要在中性粒細(xì)胞中表達(dá)的過氧化物酶，可通過介導(dǎo)腸道炎性反應(yīng)引發(fā)UC 的腸道菌群紊亂，可作為UC疾病活動度的評估指標(biāo)［17］，一定程度上反映UC的炎性反應(yīng)狀態(tài)［18］。NE 是中性粒細(xì)胞釋放的主要炎癥蛋白酶，可破壞緊密連接蛋白，損害UC 腸道通透性及腸道屏障功能［19］。本研究顯示，UC 大鼠血清MPO 水平及結(jié)腸組織MPO、NE 蛋白表達(dá)升高，經(jīng)刺梨根水煎液干預(yù)后以上指標(biāo)降低，說明刺梨根可通過抑制NETs 過表達(dá)改善UC 大鼠炎癥反應(yīng)。

細(xì)胞焦亡是當(dāng)機(jī)體受到內(nèi)、外源性物質(zhì)刺激后誘導(dǎo)形成NLRP3 炎癥小體，caspase-1 繼而促進(jìn)IL-1β、IL-18 成熟并切割GSDMD 釋放其N 端結(jié)構(gòu)域的一種細(xì)胞死亡形式［20］。NLRP3 廣泛分布于腸黏膜上皮細(xì)胞及巨噬細(xì)胞中，是腸道穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)因子［21］。臨床研究表明，抑制UC 患者結(jié)腸組織中NLRP3 活化可有效改善UC 臨床表現(xiàn)［22］。GSDMD、caspase-1 可激活并加速IL-1β 與IL-18 的釋放［23-24］，引發(fā)腸道上皮內(nèi)膜死亡［6］。抑制NLRP3、GSDMD 或caspase-1 除可阻礙NE、MPO釋放、減少NETs 形成外［25-26］，還能降低炎癥結(jié)腸組織中MPO、IL-18 水平，減少中性粒細(xì)胞浸潤，從而緩解腸道炎癥改善UC 炎癥反應(yīng)及病理損傷［27-28］。而NE 亦可切割GSDMD 導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂并釋放NETs［29］，NETs 激活caspase-1、NLRP3，釋放IL-1β 及IL-18 產(chǎn)生自我延續(xù)循環(huán)，導(dǎo)致NETs與炎癥介質(zhì)加重UC 炎癥反應(yīng)［30］。由此可知，細(xì)胞焦亡除與UC 的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)外，還能與NETs 相互協(xié)同作用參與UC 的發(fā)病機(jī)制。本研究顯示，UC 大鼠結(jié)腸組織 NLRP3、caspase-1、GSDMD 蛋白表達(dá)及血清IL-1β、IL-18 水平升高，經(jīng)刺梨根水煎液干預(yù)后以上指標(biāo)均降低，提示刺梨根可能通過抑制細(xì)胞焦亡與NETs 進(jìn)而減輕UC 炎癥反應(yīng)。

綜上所述，刺梨根可通過降低caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白表達(dá)，減少IL-1β、IL-18 炎癥因子釋放，進(jìn)而抑制細(xì)胞焦亡進(jìn)展，并減少NETs 中NE、MPO 的生成以改善UC 大鼠炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果表明刺梨根在UC 的治療上具有潛在臨床價值，但現(xiàn)階段對刺梨根干預(yù)UC 具體機(jī)制的研究方法較為單一，今后將在此基礎(chǔ)上對刺梨根治療UC 的具體分子機(jī)制進(jìn)行深入研究，為刺梨根治療UC 與進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。