陳文露 ，彭新宇，康樺華，潘育方，唐興剛，蔣順進(jìn)，黃煒乾，丁煥中，黃 婷 ，徐志宏

1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所，廣東 廣州 510640

2.惠東縣人民醫(yī)院，廣東 惠州 516399

3.廣東藥科大學(xué)，廣東 廣州 510006

4.廣東容大生物股份有限公司，廣東 清遠(yuǎn) 511517

5.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣東 廣州 510642

6.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院 動物科技學(xué)院，廣東 廣州 510225

腹瀉是指大便頻次增多，糞便呈半流質(zhì)或水樣，伴有腹部脹滿、腹痛等癥狀的一種消化系統(tǒng)疾病[1]。急性腹瀉在發(fā)展中國家仍與發(fā)病率和死亡率增加有關(guān)，而用于治療腹瀉的抗生素常導(dǎo)致耐藥性和菌群失調(diào)，因此，由于中藥止瀉具有較低的不良反應(yīng)和良好的功效，越來越受到研究者的關(guān)注。

目前，腹瀉模型有細(xì)菌[2]、降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）[3]、脂多糖[4]和蓖麻油[4]誘導(dǎo)的腹瀉模型。研究表明，水通道蛋白（aquaporins，AQPs）、Na/H 離子交換器（Na/H exchangers，NHEs）和急性期蛋白（acute phase proteins，APPs）的水平與蓖麻油致腹瀉相關(guān)，腸道的關(guān)鍵功能是吸收水分[5]，APPs 控制腸道內(nèi)的跨上皮液運(yùn)輸[6]。AQP3 和AQP4 在小鼠腸道內(nèi)定位，在腹瀉時(shí)下調(diào)[7-9]，可能影響水分吸收。目前已知10 種哺乳動物NHEs 亞型，其中NHE1、NHE2、NHE3和NHE8 在腸上皮[10]中已被鑒定，均在細(xì)胞膜刷緣區(qū)高表達(dá)[11]，NHE3 為主要亞型[12]。NHE3 缺陷小鼠Na+吸收缺陷，酸堿失衡[13]，導(dǎo)致自發(fā)性輕度腹瀉和酸中毒[14]。NHE8 對Na+吸收也至關(guān)重要[15]，可以維持腸內(nèi)的黏膜穩(wěn)態(tài)[16]。NHE2 的破壞改變了黏液層的酸性分泌，減少腸壁和原酶細(xì)胞的數(shù)量，影響腸道屏障恢復(fù)[17]。包括α-1-酸性糖蛋白（α-1-acid glycoprotein，AGP）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，TRF）、白蛋白（albumin，ALB）和、C 反應(yīng)蛋白（Creactive protein，CRP）在內(nèi)的APPs 主要由肝細(xì)胞合成，是創(chuàng)傷、感染、應(yīng)激、腫瘤和炎癥所觸發(fā)的先天急性期反應(yīng)的一部分[18-19]。

腸道菌群是一個(gè)密集多樣的生態(tài)系統(tǒng)，涉及生理和病理過程。一方面，正常的腸道菌群通過幫助新陳代謝、排除毒素和維持腸道屏障功能來影響宿主的健康。另一方面，腸道菌群失調(diào)涉及多種疾病和炎癥反應(yīng)[20-28]。黃芩湯由黃芩、芍藥、甘草和紅棗組成[29]，最早出現(xiàn)在中醫(yī)論著《傷寒論》中，主要用于治療胃腸道疾病如腹瀉、腹部痙攣、發(fā)熱、頭痛、嘔吐、惡心、極度口渴、心臟下脹等。多年的臨床治療經(jīng)驗(yàn)表明，黃芩湯治療胃腸道疾病安全有效。研究發(fā)現(xiàn)，黃芩湯可減少癌癥治療相關(guān)的毒性的影響[30-31]，可以通過激活Wnt 通路來修復(fù)損傷腸道上皮細(xì)胞，并通過下調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）和核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）緩解炎癥[27]。然而，黃芩湯的止瀉機(jī)制尚不明確。因此，本研究從腸道菌群、APPs、AQPs、NHEs 的腸道表達(dá)等方面評價(jià)了黃芩湯對蓖麻油致腹瀉的影響。

1 材料

1.1 動物

SPF 級昆明小鼠60 只，雌雄各半，3～4 周齡，體質(zhì)量18～20 g，購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動物繁育有限公司提供，許可證號SCXK（魯）20140007。動物在溫度（23.0±1.5）℃、相對濕度（50±15）%環(huán)境下飼養(yǎng)。動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所動物倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號20180107003）。

1.2 藥材

黃芩、芍藥、甘草和紅棗（批號分別為20170911、20180506、20180620、20180523）購自廣東省廣州市大參林藥店，經(jīng)廣東藥科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院程軒軒教授分別鑒定為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi 的干燥根、毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根、豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根和根莖、鼠李科植物棗ZiziphusjujubaMill.的干燥成熟果實(shí)。

1.3 藥品與試劑

對照品黃芩苷（批號P16S8F44143）、黃芩素（批號CO2A6Y1）、漢黃芩苷（批號P09J8F28374）購自上海源葉生物技術(shù)有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；對照品芍藥苷（批號17031901，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.3%）、甘草酸銨（批號17060510，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.45%）購自北京恒元啟天化工技術(shù)研究院；鹽酸洛哌丁胺膠囊（批號20170820）購自西安楊森制藥有限公司；蓖麻油（批號151111）購自湖北科田藥業(yè)有限公司；中性通用型組織固定液（批號YP184305）、Trizol 溶液（批號182805）、HRP 標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗（批號GB23303）購自武漢塞維爾生物科技有限公司；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒（批號10247）購自日本TaKaRa 公司；RNase-Free Water（批號EC05BA0039）購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司；NHE8 兔抗（批號24K4519）購自Affinity 公司；APQ3 兔抗（批號CPA4133）購自Cohesion Biosciences 公司；GAPDH小鼠單抗（批號KC-5G4）購自上?？党缮锕こ逃邢薰荆籋RP 標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 二抗（批號BA1050）購自武漢博士德生物工程有限公司；DNA抽提試劑盒（批號CLS-D6382-01）購自美國Bio Tek公司。

1.4 儀器

Agilent 1260 型超高液相色譜儀（美國Agilent公司）；XS 型十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；DS-FI2 型顯微鏡（日本Nikon 公司）；Epoch 2 型超微量分光光度計(jì)、EL800 型酶標(biāo)儀（美國Bio Tek 公司）；TBS380 型微型熒光計(jì)（美國Turner Biosystems 公司）；Light Cycle 480 型高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（瑞士羅氏公司）；5418 型高速離心機(jī)（德國Eppendorf 公司）；DW-86W420 型低溫冰箱（青島海爾特種電器有限公司）；HISEQ 型測序儀（美國Illumina 公司）。

2 方法

2.1 黃芩湯制備和質(zhì)量控制

2.1.1 黃芩湯的制備 經(jīng)UPLC 檢測本研究所用藥材黃芩中黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13.19%，白芍中芍藥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.1%，甘草中甘草酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.29%，符合《中國藥典》2020 年版規(guī)定。稱取黃芩90 g、芍藥60 g、甘草60 g、紅棗60 g，加入15倍量的水煮沸2 h，濾過；殘?jiān)偌尤?0 倍量的水煮沸提取1 h，濾過。合并2 次提取液，濃縮至1 g/mL，冷卻至4 ℃。

2.1.2 黃芩湯的質(zhì)量控制

（1）對照品溶液的制備：分別稱定芍藥苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和甘草酸銨0.020 5、0.020 5、0.010 0、0.010 1、0.010 3 g 于10 mL 量瓶中，用甲醇溶解即得對照品儲備液。取對照品儲備液，稀釋制備系列梯度質(zhì)量濃度的對照品溶液，芍藥苷質(zhì)量濃度為40、60、80、100、120 mg/mL，黃芩苷質(zhì)量濃度為120、140、160、200、220 mg/mL；黃芩素質(zhì)量濃度為10、30、50、70、90 mg/mL，漢黃芩苷質(zhì)量濃度為8、10、20、40、80 mg/mL，甘草酸銨質(zhì)量濃度為20、40、60、80、100 mg/mL。

（2）色譜條件：Poroshell 120 EC-C18色譜柱（100 mm×3 mm，2.7 μm），流動相為0.2%磷酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～4 min，90% A；4～5 min，90%～80% A；5～15 min，80%～50% A；15～16 min，50%～0 A；16～17 min，0～90% A。體積流量0.6 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長230 nm。

（3）樣品檢測：黃芩湯提取物用蒸餾水稀釋至0.02 g/mL，經(jīng)0.22 μm 膜濾過，按照色譜條件進(jìn)樣檢測。

2.2 分組、造模及給藥

小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)分為對照組、模型組、洛哌丁胺（5 mg/kg）組和黃芩湯高、中、低劑量（20、10、5 g/kg）組，每組10 只。給藥組ig相應(yīng)藥物，對照組和模型組ig 等體積的生理鹽水，1 次/d，連續(xù)3 d。第2 天晚上給藥后小鼠禁食不禁水，第3 天給藥30 min 后，除對照組外其余小鼠ig 0.5 mL 蓖麻油制備腹瀉模型。

2.3 腹瀉評分和腹瀉指數(shù)的測定

造模后，將小鼠放在不同的籠子里（每籠1 只），在濾紙上收集糞便，計(jì)算腹瀉評分和腹瀉指數(shù)。腹瀉評分：正常便0 分，半固體便2 分，水樣便3 分。稀便等級：稀便直徑小于1 cm 為1 級，直徑為1.0～1.9 cm 為2 級，直徑為2.0～3.0 cm 為3 級，直徑＞3.0 cm 為4 級。

稀便率＝小鼠稀便次數(shù)/小鼠總排便次數(shù)

稀便級數(shù)＝稀便等級數(shù)之和/稀便次數(shù)

腹瀉指數(shù)＝稀便率×稀便級數(shù)

2.4 qRT-PCR 檢測肝臟AGP、ALB、TRF、CRP和小腸NHE2、NHE3、NHE8、AQP3、AQP4 基因表達(dá)

造模4 h 后小鼠安樂死，取小鼠肝臟和小腸。按照試劑盒說明書提取總RNA 并合成cDNA，進(jìn)行qRT-PCR 分析。引物序列見表1。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences

2.5 免疫組化檢測小腸NHE8 和AQP3 蛋白表達(dá)

取各組小腸組織，于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋，切成4 μm 切片。3%牛血清白蛋白封閉后，滴加AQP3（1∶800）、NHE8（1∶100）抗體孵育，PBS 洗滌后，滴加二抗室溫孵育5 min，DAB 顯色、示蘇木素染色后，脫水、透明、封片，于顯微鏡下觀察并拍照。

2.6 Western blotting 檢測小腸NHE8 和AQP3 蛋白表達(dá)

取各組小腸組織，剪碎后加入RIPA 裂解液提取蛋白。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF 膜，于5%脫脂牛奶中封閉，分別加入NHE8、AQP3 抗體孵育，洗滌后加入二抗孵育，用全自動凝膠成像分析系統(tǒng)采集條帶。

2.7 16S rRNA 基因測序

2.7.1 16S rRNA 的提取和擴(kuò)增 取各組小腸組織，根據(jù)E.Z.N.A.?soil 試劑盒說明書進(jìn)行總DNA 抽提，用引物338F（5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）對V3～V4 可變區(qū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性3 min，95 ℃變性30 s、55 ℃退火30 s、72 ℃延伸30 s（27 個(gè)循環(huán)），72 ℃延伸10 min。

2.7.2 Illumina Miseq 測序 采用2%瓊脂糖凝膠電泳回收PCR 產(chǎn)物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction試劑盒對產(chǎn)物進(jìn)行純化，Tris-HCl 洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測。利用微量熒光計(jì)進(jìn)行定量分析。根據(jù)Illumina MiSeq 平臺標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段構(gòu)建PE 2*300 的文庫。構(gòu)建文庫步驟：（1）連接“Y”字形接頭；（2）使用磁珠篩選去除接頭自連片段；（3）利用PCR 擴(kuò)增進(jìn)行文庫模板的富集；（4）氫氧化鈉變性，產(chǎn)生單鏈DNA 片段。送至上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行測序分析。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Spass 23 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較用單因素方差（One-way ANOVE）分析，采用GraphPad Prism 7 軟件作圖。

3 結(jié)果

3.1 黃芩湯的成分分析

以芍藥苷、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、甘草酸銨為對照品，采用UPLC 對黃芩湯的成分進(jìn)行分析。對照品和黃芩湯樣品的色譜圖見圖1，峰面積（Y）與質(zhì)量濃度（X）呈線性關(guān)系（表2），表明芍藥苷、黃芩苷、黃芩素、黃芩苷、甘草酸銨在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。作為黃芩湯的主要成分，芍藥苷來源于芍藥，而黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷來源于黃芩，甘草酸銨來源于甘草。1 kg黃芩湯藥材可提取干燥成93 g 提取物粉末，芍藥苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和甘草酸銨質(zhì)量濃度分別為100.32、186.51、69.89、25.05、61.26 μg/mL。

圖1 對照品 (A) 和黃芩湯 (B) 的UPLC 色譜圖Fig.1 UPLC chromatograms of reference substance (A)and Huangqin Decoction (B)

表2 各成分的回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Table 2 Regression equations, linear ranges and correlation coefficients for each component

3.2 黃芩湯對腹瀉小鼠腹瀉指數(shù)和腹瀉評分的影響

如圖2 所示，與對照組比較，模型組小鼠腹瀉指數(shù)和腹瀉評分明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組小鼠腹瀉指數(shù)和腹瀉評分均顯著降低（P＜0.05）。

圖2 黃芩湯對腹瀉小鼠腹瀉指數(shù)和腹瀉評分的影響 (±s , n = 5)Fig.2 Effect of Huangqin Decoction on diarrhea index and diarrhea score in diarrhea mice (±s , n = 5)

3.3 黃芩湯對腹瀉小鼠肝臟AGP、ALB、TRF、CRP和小腸NHE2、NHE3、NHE8、AQP3、AQP4 基因表達(dá)的影響

如圖3 所示，與對照組比較，模型組小鼠肝臟中CRP和AGPmRNA 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05），TRFmRNA 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，黃芩湯低劑量組CRPmRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），洛哌丁胺組和黃芩湯中、高劑量組AGPmRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）。

圖3 黃芩湯對腹瀉小鼠肝臟CRP、AGP、ALB 和TRF 基因表達(dá)的影響 (±s, n = 5)Fig.3 Effect of Huangqin Decoction on CRP, AGP, ALB and TRF gene expressions in liver of diarrhea mice (±s , n = 5)

如圖4 所示，與對照組比較，模型組小鼠小腸中AQP3、NHE3和NHE8mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05），AQP4mRNA 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，洛哌丁胺組和黃芩湯中、高劑量組AQP3mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）。黃芩湯各劑量組NHE8mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）。

3.4 黃芩湯對腹瀉小鼠小腸AQP 和NHE83 蛋白表達(dá)的影響

如圖5 所示，免疫組化驗(yàn)證了AQP3 和NHE8在腸道的特異性定位表達(dá)。如圖6 所示，與對照組比較，模型組AQP3 和NHE8 蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組AQP3 和NHE8 蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05），與“2.3”項(xiàng)下結(jié)果一致。

圖5 免疫組化檢測AQP3 和NHE8 在小腸上皮細(xì)胞絨毛中的定位Fig.5 Localization of AQP3 (A) and NHE8 (B) in villi of small intestinal epithelial cells by immunohistochemistry

圖6 Western blotting 檢測小腸AQP3 和NHE8 蛋白表達(dá) (±s, n = 5)Fig.6 AQP3 and NHE8 protein expressions in small intestine by Western blotting (±s , n = 5)

3.5 黃芩湯對腹瀉小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

采用Shannon 指數(shù)和ACE 指數(shù)測定腸道菌群α 多樣性（均勻度和豐富度）。如圖7 所示，黃芩湯低、高劑量組Shannon 指數(shù)顯著低于對照組（P＜0.05）。各組ACE 指數(shù)無顯著差異。主坐標(biāo)分析結(jié)果（圖8）顯示，黃芩湯各劑量組與模型組、對照組差異顯著，而洛哌丁胺組與模型組相似。

圖7 各組腸道菌群的α 多樣性 (±s, n = 5)Fig.7 Alpha diversity of gut microbiota in each group (±s, n = 5)

圖8 各組小鼠腸道菌群的主坐標(biāo)分析Fig.8 Principal co-ordinates analysis of gut microbiota in each group of mice

如圖9-A 所示，各組小鼠腸道菌群優(yōu)勢菌門為變形桿菌門（ Proteobacteria ）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）和厚壁菌門（Firmicutes）。與模型組比較，黃芩湯各劑量組和洛哌丁胺組厚壁菌門豐度降低，黃芩湯高劑量組和洛哌丁胺組放線菌門豐度降低，黃芩湯中、低劑量組放線菌門豐度升高，黃芩湯低、高劑量組和洛哌丁胺組厚壁菌門與擬桿菌門比值（F/B）降低。

圖9 各組小鼠門 (A) 和屬 (B) 水平腸道菌群豐度 (±s, n = 5)Fig.9 Abundance of gut microbiota at phylum (A) and genus (B) levels in each group of mice (±s , n = 5)

如圖9-B 所示，各組小鼠腸道菌群優(yōu)勢菌屬為Candidatus_Arthromitus、乳桿菌屬Lactobacillus、糞桿 菌 屬Faecalibaculum、棒 狀 桿 菌 屬Corynebacterium_1、雙歧桿菌屬Bifidobacterium、螺桿菌屬Helicobacter和氣球菌屬Aerococcus。與模型組比較，各給藥組雙歧桿菌屬、糞桿菌屬和Ruminococcaceae_UCG-014 豐度降低；黃芩湯低劑量組Facklamia、Jeotgalicoccus和Corynebacterium_1 豐度升高，乳桿菌屬和unclassified_p_Firmicutes豐度降低；黃芩湯高劑量組 unclassified_p_Firmicutes 和Candidatus_Arthromitus豐度升高；黃芩湯中劑量組 unclassified_p_Firmicutes 和Psychrobacter豐度升高。

4 討論

蓖麻油及其活性成分蓖麻油酸能夠降低小腸和結(jié)腸對Na+和K+的吸收，降低Na+、K+ATP 酶活性，改變腸道通透性，從而引起小鼠腹瀉[32]，同時(shí)會伴隨腸絨毛大量壞死、脫落，杯狀細(xì)胞生成量減少，隨著內(nèi)層黏液消耗殆盡抗菌屏障被破壞，小鼠腸道菌群穩(wěn)態(tài)被破壞[33]。蓖麻油腹瀉模型模擬了小鼠在經(jīng)過腸炎腹瀉中的生理變化，有利于研究黃芩湯在炎癥腹瀉過程中藥理作用研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，黃芩湯可通過調(diào)節(jié)小鼠小腸內(nèi)Na+/H+交換劑和水通道蛋白來緩解小鼠腹瀉。黃芩湯下調(diào)上皮細(xì)胞AQP3和NHE8的mRNA 和蛋白表達(dá)，下調(diào)急性期蛋白AGPs、CRP的mRNA 表達(dá)。與對照組比較，模型組AQP4和TRFmRNA 表達(dá)水平明顯降低，NHE3mRNA 表達(dá)水平明顯升高，但黃芩湯對AQP4、TRF、NHE3mRNA 表達(dá)均無明顯調(diào)節(jié)作用，這可能由于腹瀉誘導(dǎo)和組織剝離之間的時(shí)間窗太短。

通過16S rRNA 基因測序發(fā)現(xiàn)，蓖麻油誘導(dǎo)的腹瀉小鼠腸道菌群顯著改變，這可能作為腸道健康的潛在生物標(biāo)志物。而黃芩湯部分逆轉(zhuǎn)了這一改變。厚壁菌門和擬桿菌門是主要的腸道菌群門，可以調(diào)節(jié)宿主炎癥和免疫狀態(tài)[34]。厚壁菌門是宿主代謝的關(guān)鍵因素[35]，但其在腸道內(nèi)的過度生長會導(dǎo)致脂多糖等代謝內(nèi)毒素的產(chǎn)生，這些內(nèi)毒素會進(jìn)入血流，引發(fā)炎癥[36]。而擬桿菌門則減少了腸道和全身的炎癥反應(yīng)[37-38]。因此，F(xiàn)/B 值升高提示自身免疫性疾病具有促炎環(huán)境和免疫失衡的特征。蓖麻油升高F/B 值，洛哌丁胺和黃芩湯有降低F/B 值的作用。

黃芩湯顯著降低糞桿菌屬的相對豐度[39-41]。本研究結(jié)果顯示，黃芩湯降低雙歧桿菌屬、糞桿菌屬、Ruminococcaceae_UCG-014 和 unclassified_p_Firmicutes 的相對豐度，影響了小腸微生物群的組成。雙歧桿菌是人類胃腸道的主要有益共生體[42]，Ruminococcaceae_UCG-014 通過分泌大量的復(fù)合酶幫助機(jī)體消化吸收纖維素的能量[43]。在黃芩湯高劑量組中，具有調(diào)節(jié)宿主免疫系統(tǒng)的Candidatus_Arthromitus的相對豐度增加[44]，而在黃芩湯中、低劑量組中未發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象。黃芩湯低劑量組Facklamia、Jeotgalicoccus和Corynebacterium_1 的相對豐度增加，黃芩湯中劑量組Psychrobacter的相對豐度增加。Jeotgalicoccus對人體健康有著至關(guān)重要的作用，可能是腸道菌群的核心功能群之一[45]。Facklamia、Corynebacterium_1 和Psychrobacter在以往研究[46-49]中均有提及，但未對其在腹瀉模型中的作用進(jìn)行解釋。因此，這些菌群的改變與黃芩湯抗腹瀉作用的關(guān)系尚不清楚。基于以上結(jié)果，推測黃芩湯可能通過降低雙歧桿菌屬和Ruminococcaceae_UCG-014 的相對豐度，并增加Candidatus_Arthromitus和Jeotgalicoccus的相對豐度，從而平衡小鼠的腸道健康。本研究結(jié)果為腹瀉的分子機(jī)制和腸道菌群的研究提供了新的思路，為黃芩湯的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。然而，臨床腹瀉的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，黃芩湯的作用機(jī)制需要在不同病因的腹瀉模型中進(jìn)行驗(yàn)證分析。

綜上，在蓖麻油致腹瀉模型中，黃芩湯具有明顯的止瀉作用。可以通過降低AQP3和NHE8的mRNA 和蛋白表達(dá)，降低腸道菌群F/B 值，來緩解腹瀉癥狀。本研究揭示了黃芩湯在微生態(tài)系統(tǒng)中的其他變化，如高劑量黃芩湯增加了Candidatus_Arthromitus的相對豐度，這與腸上皮的免疫活性有關(guān)。低劑量黃芩湯增加了Jeotgalicoccus的相對豐度，對腸道健康起著重要的作用。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突