張春曉 張群妹 魯廣建

作者單位：453100 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

非小細(xì)胞肺癌是我國常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤,發(fā)病率占肺惡性腫瘤的80%左右,在很多地區(qū)的發(fā)病率及死亡率均居所有類型惡性腫瘤首位[1-2]。雖目前放化療以及手術(shù)等治療方案在抑制惡性腫瘤轉(zhuǎn)移以及改善預(yù)后等方面有較好療效,但死亡率仍處于較高水平[3],因此有效探究疾病進(jìn)展、預(yù)后對腫瘤臨床治療仍有重要意義。OGDHL作為多酶OGDH復(fù)合物的第一步和限速步驟,與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[4]。而4個半LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1(four and a half LIM domains protein 1,FHL1)是LIM家族中的一種新蛋白質(zhì),目前發(fā)現(xiàn)FHL1在平滑肌分化和遷移過程中起重要調(diào)節(jié)作用[5],但最近已有研究發(fā)現(xiàn),FHL1在癌癥進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[6]。但OGDHL、FHL1在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)的研究還不清楚。因此,本次研究主要是分析OGDHL、FHL1在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床預(yù)后意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

將2019年2月至2021年2月經(jīng)我院確診并進(jìn)行治療的80例非小細(xì)胞肺癌患者作為本研究對象,其中男性50例,女性30例;年齡40～80歲,平均年齡(60.56±6.58)歲。選取非小細(xì)胞肺癌癌組織標(biāo)本作為癌組織組(n=80),同時選取癌旁組織(距腫瘤邊緣4 cm處)標(biāo)本作為癌旁組織組(n=80)。納入標(biāo)準(zhǔn):①非小細(xì)胞肺癌適應(yīng)證、禁忌證均依據(jù)2015年版原發(fā)性肺癌診療規(guī)范[7]中的標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)病理學(xué)及細(xì)胞學(xué)確診;②已簽署知情同意書;③均接受肺癌根治性切除術(shù)治療,且術(shù)前未接受放、化療治療者。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有免疫系統(tǒng)疾病、血液性疾病以及其他惡性腫瘤疾病者;②伴有嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者;③術(shù)前接受新輔助治療者;④既往精神病史者;⑤臨床資料不全或無法完全配合本研究者。本研究所有患者術(shù)后通過復(fù)診或電話的方式隨訪至少5年。本次研究已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組織化學(xué)檢測OGDHL、FHL1表達(dá)水平。首先將癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行固定、石蠟、包埋并連續(xù)4 μm切片,隨后將切片依次經(jīng)脫蠟、二甲苯脫蠟水化,再進(jìn)行抗原修復(fù),3%過氧化氫室溫孵育10 min后,經(jīng)PBS漂洗3次(3 min/次)。滴加入一抗(Abcam公司生產(chǎn)的兔抗人OGDHL單克隆抗體)4 ℃孵育過夜,PBS漂洗3次(3 min/次)后,加入二抗(Abcam公司生產(chǎn)的兔抗人FHL1多克隆抗體),37 ℃孵育30 min,PBS漂洗3次(3 min/次),最后經(jīng)DAB顯色、蘇木精復(fù)染、鹽酸酒精分化、氨水返藍(lán)、脫水、封片和晾片。以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結(jié)果判定[8]免疫組化結(jié)果由兩位資深的病理科醫(yī)師進(jìn)行評價。隨機選取5個高倍鏡視野(×400)進(jìn)行計數(shù),每個視野讀取細(xì)胞計數(shù)超過400個細(xì)胞,其中顯微鏡下的細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)淺黃色、棕黃色或者棕褐色顆粒判定為陽性細(xì)胞,隨后可根據(jù)陽性細(xì)胞染色強度與陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評分。強度評分:無色為0分、淺黃色為1分、棕色為2分、深褐色為3分。百分比評分:<25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分。百分比和染色強度乘積為總分,≥3分為高表達(dá),<3分為低表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 23.0軟件進(jìn)行分析,計數(shù)資料以率和構(gòu)成比(%)表示,采用χ2檢驗分析;采用Kaplan-Meier生存曲線分析OGDHL、FHL1表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系,多因素Cox回歸模型分析非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌癌組織、癌旁組織中OGDHL、FHL1表達(dá)水平比較

非小細(xì)胞肺癌癌組織OGDHL高表達(dá)率明顯低于癌旁組織(35.00% vs 62.50%,P<0.05),FHL1高表達(dá)率明顯高于癌旁組織(67.50% vs 40.00%,P<0.05),見表1。

表1 非小細(xì)胞肺癌癌組織、癌旁組織中OGDHL、FHL1表達(dá)水平比較(例,%)

2.2 OGDHL、FHL1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌病理特征的關(guān)系

不同年齡、性別、病理類型、腫瘤直徑的非小細(xì)胞肺癌患者OGDHL、FHL1表達(dá)水平比較均無明顯差異(P>0.05),但不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度的非小細(xì)胞肺癌患者OGDHL、FHL1表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 OGDHL、FHL1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系/例

2.3 OGDHL、FHL1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)系

術(shù)后通過復(fù)診或電話的方式隨訪至少5年,5年總生存率為52.50%(42/80)。OGDHL高表達(dá)患者術(shù)后5年總生存率為82.14%(23/28),低表達(dá)患者術(shù)后5年總生存率為36.54%(19/52),兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);FHL1高表達(dá)患者術(shù)后5年總生存率為40.74%(22/54),低表達(dá)患者術(shù)后5年總生存率為76.92%(20/26),兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后單因素分析

單因素分析得出,TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、OGDHL表達(dá)、FHL1表達(dá)均與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后密切相關(guān)(P<0.05),見表3。

表3 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后單因素分析(例,%)

2.5 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后多因素Cox回歸分析

多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,TNM Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、OGDHL低表達(dá)、FHL1高表達(dá)均為影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05),見表4。

表4 非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

3 討論

非小細(xì)胞肺癌包括肺鱗癌、肺腺癌和大細(xì)胞癌,作為目前世界上發(fā)病率和致死率最高的惡性腫瘤之一,其目前死亡率已達(dá)到89%,嚴(yán)重威脅患者生存及生活質(zhì)量[9]。雖隨著近年來我國手術(shù)、化療、放療及生物治療等治療手段不斷發(fā)展,非小細(xì)胞肺癌死亡率已得到改善,但5年生存率仍不足15%[10]。因此,尋找特異性、敏感性較高的標(biāo)志物對控制病情進(jìn)展、提高患者生存率有著重要的意義。本研究主要分析OGDHL、FHL1在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床預(yù)后意義。

OGDHL是α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體中的一個亞單位,同時也是多酶OGDH復(fù)合物的第一個且限速的成分,其位于10q11.23區(qū)域10q11.23區(qū)域,目前發(fā)現(xiàn)其在降解葡萄糖和谷氨酸的過程中起關(guān)鍵作用[11]。同時OGDHL可通過參與三羧酸循環(huán)負(fù)責(zé)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,在多種腫瘤發(fā)展中發(fā)揮重要作用[12]。本研究結(jié)果顯示,非小細(xì)胞肺癌患者癌組織OGDHL高表達(dá)率明顯低于癌旁組織(P<0.05),且OGDHL表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān)(P<0.05),提示OGDHL表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌組織中呈低表達(dá),并且參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。既往有研究顯示,OGDHL在肝癌組織中表達(dá)水平低于肺癌鄰近組織,低表達(dá)與更高年齡、組織學(xué)分級、分期、T分類和生存率差相關(guān),并且可作為作為肝癌診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物[13],與本研究結(jié)果一致。本研究預(yù)后分析顯示,OGDHL高表達(dá)患者術(shù)后5年總生存率明顯高于低表達(dá)患者(P<0.05),提示OGDHL表達(dá)水平可能與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后有關(guān)。但Mao等[14]研究顯示,OGDHL低表達(dá)組甲狀腺狀癌患者的總生存率更高。本研究多因素Cox回歸分析顯示,OGDHL低表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05),證實OGDHL蛋白與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后密切相關(guān),可作為評估預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。既往研究認(rèn)為,OGDHL基因的異常表達(dá)可影響葡萄糖的降解和谷氨酸的合成,進(jìn)而通過增加或抑制檸檬酸及脂肪酸從影響腫瘤細(xì)胞的增長;同時OGDHL基因的異常表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡和能量代謝異常,從而影響腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展[15]。同時既往甲狀腺癌相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),OGDHL表達(dá)下調(diào)可影響腫瘤細(xì)胞的生長期,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡[16]。因此可能是OGDHL在非小細(xì)胞肺癌表達(dá)降低導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡、增殖,進(jìn)而影響患者預(yù)后。

FHL1是FHL蛋白家族的創(chuàng)始成員,其作為一類組織特異性的轉(zhuǎn)錄共結(jié)合子,組織特異性的表達(dá)并受發(fā)育調(diào)節(jié),目前在骨骼肌肌病和心血管疾病中發(fā)揮重要作用外,FHL1也逐漸在腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[17]。本研究結(jié)果顯示,非小細(xì)胞肺癌癌組織患者FHL1高表達(dá)率明顯高于癌旁組織(P<0.05),且表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān)(P<0.05),說明FHL1表達(dá)水平升高可能與疾病發(fā)生有關(guān),且可能參與疾病發(fā)展過程。既往有研究顯示,FHL1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)下降或缺失[18]。本研究顯示,FHL1高表達(dá)患者術(shù)后5年總生存率明顯低于低表達(dá)患者(P<0.05),說明FHL1高表達(dá)可能影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后。同時預(yù)后多因素分析顯示,FHL1為影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05),證實FHL1與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后密切相關(guān)。文獻(xiàn)中顯示,FHL1磷酸化后可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展,并且與腫瘤發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移等環(huán)節(jié)有關(guān)[19],同時有研究報道發(fā)現(xiàn),FHL1在心臟、骨骼肌、卵巢、腎臟、肺和腦中高表達(dá)[20]。因此本研究認(rèn)為FHL-1高表達(dá)誘導(dǎo)患者細(xì)胞增殖、侵襲,進(jìn)而影響病情進(jìn)展以及預(yù)后。

綜上所述,非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中OGDHL蛋白呈低表達(dá),FHL1蛋白呈高表達(dá),并且表達(dá)水平與疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān),兩者能夠作為評估患者預(yù)后的有效指標(biāo)。當(dāng)然本研究選擇樣本量來自單中心,且指標(biāo)只進(jìn)行了單次檢測,未來需進(jìn)一步擴大樣本納入范圍,進(jìn)行多時間點指標(biāo)檢測,以分析更多研究結(jié)果。