陳俊杰 許雪梅 李巖 傅金英

摘要：目的 探討八珍湯合白術(shù)附子湯對(duì)多囊卵巢綜合征大鼠糖代謝及雌激素水平的調(diào)節(jié)作用。方法 采用皮下注射人絨毛膜促性腺激素（HCG）聯(lián)合胰島素方法建立多囊卵巢綜合征大鼠模型，隨機(jī)分為多囊卵巢綜合征組、白術(shù)附子湯組（6.4 g/kg）、八珍湯組（9.2 g/kg）、八珍湯合白術(shù)附子湯組（11.55 g/kg）及己烯雌酚組（0.5 mg/kg），另設(shè)空白對(duì)照組（未造模大鼠），每組10只。測(cè)定并計(jì)算子宮指數(shù)，采用血糖儀測(cè)定空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 h PBG），測(cè)定空腹胰島素（FINS）并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（ISI）和胰島素抵抗指數(shù)（IR），采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清雌二醇（E2）、睪酮（T）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、泌乳素（PRL）、抗苗勒氏管激素（AMH）、胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1），卵巢組織C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α、總過(guò)氧化物酶活性（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）水平，蘇木精-伊紅（HE）染色法檢查卵巢組織病理學(xué)變化，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）測(cè)定子宮內(nèi)膜雄激素受體相關(guān)蛋白（ARA）70、肉瘤基因羧基末端激酶結(jié)合蛋白（CBP）、可溶性補(bǔ)體受體1型（SCR1）、同源框異型基因A10（HOXA10） mRNA水平及卵巢組織腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（GLUT4）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ） mRNA表達(dá)，Western blot測(cè)定卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ蛋白表達(dá)。結(jié)果 與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組和八珍湯合白術(shù)附子湯組大鼠子宮指數(shù)，F(xiàn)INS、FBG、2 h PBG、IR水平，血清T、LH、FSH、PRL、AMH、IGF-1水平，卵巢組織CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC和MDA水平，子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1 mRNA水平均降低（P＜0.05）；ISI，血清E2，卵巢組織SOD，子宮內(nèi)膜HOXA10 mRNA表達(dá)，卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；八珍湯合白術(shù)附子湯組以上指標(biāo)變化均較白術(shù)附子湯組和八珍湯組顯著（P＜0.05）。結(jié)論 八珍湯合白術(shù)附子湯可通過(guò)改善多囊卵巢綜合征大鼠糖代謝、卵巢組織氧化及炎癥損傷、子宮內(nèi)膜容受性、雌激素水平，抑制多囊卵巢綜合征疾病進(jìn)展，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)AMPK/GLUT4/PPARγ通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞：術(shù)附湯；八珍湯；多囊卵巢綜合征；雌激素類；糖代謝；八珍湯合白術(shù)附子湯

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20230549

Effects of Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction on glucose metabolism and estrogen levels in rats with polycystic ovary syndrome

Abstract： Objective To study the regulation effects of Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction on glucose metabolism and estrogen level in rats with polycystic ovary syndrome. Methods? The rat model of polycystic ovary syndrome was established by subcutaneous injection of human chorionic gonadotropin （HCG） combined with insulin. Rats were randomly divided into the polycystic ovary syndrome group， the Baizhu Fuzi Tang group （6.4 g/kg）， the Bazhen Tang group （9.2 g/kg）， the Bazhen Tang combined with Baizhu Fuzi Tang group （11.55 g/kg） and the diethylstilbestrol group （0.5 mg/kg）. A blank control group （unmodulated rats） was set up with 10 rats in each group. The uterine index of rats was determined and calculated. Fasting blood glucose （FBG）， 2 h postprandish blood glucose （2 h PBG） and fasting insulin （FINS） were determined and insulin sensitivity index （ISI） and insulin resistance index （IR） were calculated. Serum estradiol （E2）， testosterone （T）， luteinizing hormone （LH）， follicle stimulating hormone （FSH）， prolactin （PRL）， anti-Mullerian tube hormone （AMH） and insulin-like growth factor 1 （IGF-1）， C-reactive protein （CRP）， interleukin （IL）-6， tumor necrosis factor （TNF）-α， total peroxidase activity （T-AOC）， superoxide dismutase （SOD） and malondialdehyde （MDA） levels in ovarian tissue were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The pathological changes of ovarian tissue were detected by hematoxylin-eosin （HE） staining. Real-time quantitative polymerase chain reaction （qPCR） was used to determine mRNA levels of ARA70， CBP， SCR1 and HOXA10 in endometrium and mRNA expressions of AMPK， GLUT4 and PPARγ in ovarian tissue. Western blot assay was used to determine expression levels of AMPK， GLUT4 and PPARγ in ovarian tissue. Results Compared with the polycystic ovary syndrome group， uterine index， FINS， FBG， 2 h PBG， IR levels， serum T， LH， FSH， PRL， AMH， IGF-1 levels， ovarian tissue CRP， IL-6， TNF-α， T-AOC and MDA level， endometrial ARA70， CBP， SCR1 mRNA level of rats decreased significantly in the Baizhu Fuzi decoction group， the Bazhen decoction group and the Bazhen decoction combined with Baizhu Fuzi decoction group （P＜0.05）. ISI level， serum E2 level， ovarian tissue SOD level， endometrial HOXA10 mRNA level， ovarian tissue AMPK， GLUT4 and PPARγ mRNA and protein levels were significantly increased （P＜0.05）. The above indexes were significantly changed in the Bazhen decoction and Bazhu Fuzi decoction group? than those of the Bazhu Fuzi decoction group and the Bazhen decoction group （P＜0.05）. Conclusion Bazhen Decoction combined with Baizhu Fuzi Decoction can regulate glucose metabolism， inhibit ovarian tissue oxidation and inflammatory damage， improve endometrium tolerance， regulate estrogen level， and improve the progression of polycystic ovary syndrome in rats. The mechanism may be related to the regulation of AMPK/GLUT4/PPARγ pathway.

Key words： Zhu Fu Tang; Ba Zhen Tang; polycystic ovary syndrome; estrogens; glucose metabolism; Bazhen Decoction combined with Baizhu Aconite Decoction

多囊卵巢綜合征是臨床常見(jiàn)的婦科內(nèi)分泌性疾病，以多毛、閉經(jīng)、不孕等多種臨床癥狀為主要表現(xiàn)，嚴(yán)重影響患者身心健康及生活質(zhì)量［1-2］。然而，目前臨床用于治療多囊卵巢綜合征的藥物有限，且存在有效率低、患者依從性差等缺點(diǎn)［3］。研究表明，糖代謝紊亂及胰島素抵抗與多囊卵巢綜合征的發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)，多囊卵巢綜合征患者糖代謝異常會(huì)影響體內(nèi)雄激素水平，促進(jìn)患者卵巢組織病理進(jìn)展［4］。八珍湯及白術(shù)附子湯是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，由中藥飲片組成的中藥方劑。近年來(lái)研究表明，八珍湯及白術(shù)附子湯對(duì)多囊卵巢綜合征具有一定的治療效果［5-6］。然而目前關(guān)于八珍湯及白術(shù)附子湯對(duì)多囊卵巢綜合征的藥理作用及機(jī)制尚鮮見(jiàn)研究報(bào)道。本研究通過(guò)研究八珍湯合白術(shù)附子湯對(duì)多囊卵巢綜合征大鼠糖代謝及雌激素水平的調(diào)節(jié)作用，為八珍湯合白術(shù)附子湯的藥理作用研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品與試劑 八珍湯由人參3 g、白術(shù)10 g、白茯苓8 g、當(dāng)歸10 g、川芎5 g、白芍藥8 g、熟地黃15 g、炙甘草5 g、大棗10 g及生姜5 g組成；白術(shù)附子湯由白術(shù)15 g、附子15 g、生姜9 g、炙甘草12 g、大棗10 g組成；八珍湯合白術(shù)附子湯由人參3 g、白術(shù)15 g、白茯苓8 g、當(dāng)歸10 g、川芎5 g、白芍藥8 g、熟地黃15 g、炙甘草12 g、大棗10 g、生姜9 g及附子15 g組成。各方劑均按照以下方法制備：分別將藥材飲片置于1 000 mL蒸餾水中浸泡1 h，煎煮45 min，過(guò)濾，留取濾液，將藥材殘?jiān)糜?00 mL蒸餾水中再次煎煮45 min，過(guò)濾，合并2次濾液，蒸發(fā)濃縮，八珍湯和白術(shù)附子湯制成生藥含量為1 g/mL的制劑，八珍湯合白術(shù)附子湯制成生藥含量為2 g/mL的制劑；所有藥材飲片購(gòu)自北京同仁堂藥業(yè)有限公司。

己烯雌酚購(gòu)自上海信誼天平藥業(yè)有限公司；二喹啉甲酸（BCA）試劑盒、磷酸鹽緩沖液（PBS）、增強(qiáng)型發(fā)光液（ECL）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；空腹胰島素（FINS）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)自天津本生健康科技有限公司；雌二醇（E2）、睪酮（T）ELISA試劑盒購(gòu)自武漢華美生物工程有限公司；黃體生成素（LH）、泌乳素（PRL）ELISA試劑盒購(gòu)自上海酶研生物科技有限公司；抗苗勒氏管激素（AMH）、C反應(yīng)蛋白（CRP）ELISA試劑盒購(gòu)自上海恒斐生物科技有限公司；卵泡刺激素（FSH）、胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1） ELISA試劑盒購(gòu)自武漢菲恩生物科技有限公司；白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α、總過(guò)氧化物酶活性（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）ELISA試劑盒，山羊抗兔二抗PCR試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；兔抗鼠腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（GLUT4）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）一抗購(gòu)自艾博抗（上海）貿(mào)易有限公司；PCR引物設(shè)計(jì)及合成由賽默飛世爾科技有限公司完成。

1.1.2 設(shè)備及儀器 E-Gel Imager凝膠成像儀購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司；EnVision多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自珀金埃爾默企業(yè)管理有限公司；IX83熒光倒置顯微鏡購(gòu)自日本奧林巴斯公司；Accu-Chek Performa血糖儀購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；Mastercycler nexus梯度PCR儀購(gòu)自Eppendorf艾本德中國(guó)有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 63只SD大鼠，雌性，清潔級(jí)，6～8周齡，體質(zhì)量200～220 g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫）2022－0001，飼養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，溫度20～25 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，光照陰暗12 h交替。本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)河南省中醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：ky20211027016）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 多囊卵巢綜合征大鼠模型的建立 按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白對(duì)照組（10只）及造模組（53只）。造模組參照文獻(xiàn)［7］采用皮下注射人絨毛膜促性腺激素（HCG）聯(lián)合胰島素方法建立多囊卵巢綜合征大鼠模型，同時(shí)檢測(cè)大鼠陰道涂片，并隨機(jī)抽取3只大鼠進(jìn)行卵巢組織病理檢查，以大鼠完全失去動(dòng)情周期變化及卵巢組織出現(xiàn)病理性改變視為造模成功。53只大鼠均造模成功。

1.2.2 分組及給藥 造模后，按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為多囊卵巢綜合征組、白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組，每組10只。白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組分別灌胃白術(shù)附子湯6.4 g/kg［6］、八珍湯9.2 g/kg［8］、八珍湯合白術(shù)附子湯11.55 g/kg（以生藥含量計(jì)），己烯雌酚組灌胃己烯雌酚0.5 mg/kg［9］，空白對(duì)照組及多囊卵巢綜合征組灌胃生理鹽水，1次/d，連續(xù)30 d。

1.2.3 大鼠子宮指數(shù)的測(cè)定 末次給藥12 h后測(cè)定大鼠體質(zhì)量（記為W），大鼠頸椎脫臼法處死后迅速分離子宮并稱質(zhì)量（記為H），計(jì)算大鼠子宮指數(shù)=H（mg）/W（g）。

1.2.4 大鼠FINS、空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 h PBG）、胰島素敏感指數(shù)（ISI）和胰島素抵抗指數(shù)（IR）的測(cè)定 大鼠末次給藥后禁食12 h，眼眶取血，使用羅氏Accu-Chek Performa血糖儀測(cè)定FBG水平，使用ELISA試劑盒測(cè)定FINS水平。按照2 g/kg灌胃20%葡萄糖溶液，2 h后尾靜脈取血，使用血糖儀測(cè)定2 h PBG，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，計(jì)算IR及ISI。IR=FBG×FINS/22.5，ISI=-ln（FBG×FINS）。

1.2.5 大鼠血清E2、T、LH、FSH、PRL、AMH、IGF-1的測(cè)定 大鼠腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，使用ELISA試劑盒分別測(cè)定E2、T、LH、FSH、PRL、AMH、IGF-1水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.2.6 大鼠卵巢組織CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC、SOD及MDA的測(cè)定 大鼠頸椎脫臼法處死并分離卵巢組織，置于蒸餾水中并用組織勻漿器充分裂解勻漿，4 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清液，使用ELISA法測(cè)定CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC、SOD及MDA水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.2.7 大鼠卵巢組織病理學(xué)檢查 大鼠頸椎脫臼法處死后，迅速分離大鼠卵巢組織，中性甲醛固定24 h后石蠟包埋并制成5 μm切片，行常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色，置于顯微鏡下觀察拍照。

1.2.8 qPCR檢測(cè)大鼠子宮內(nèi)膜和卵巢組織子宮內(nèi)膜雄激素受體相關(guān)蛋白（ARA）70、肉瘤基因羧基末端激酶結(jié)合蛋白（CBP）、可溶性補(bǔ)體受體1型（SCR1）、同源框異型基因A10（HOXA10）、AMPK、GLUT4、PPARγ基因表達(dá) 大鼠頸椎脫臼法處死，分離子宮內(nèi)膜和卵巢組織，分別提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，使用PCR試劑盒測(cè)定子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1、HOXA10和卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA水平。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共計(jì)30個(gè)循環(huán)，72 ℃最終延伸10 min。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法測(cè)定各基因相對(duì)水平。引物序列見(jiàn)表1。

1.2.9 Western blot檢測(cè)大鼠卵巢組織AMPK、GLUT4及PPARγ蛋白表達(dá) 以頸椎脫臼法處死大鼠，分離卵巢組織，置于組織裂解液中在冰盒上裂解，組織勻漿器充分勻漿，4 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清液，使用BCA試劑盒測(cè)定總蛋白水平，樣本經(jīng)10%葡聚糖-聚丙烯酰胺凝膠電泳（110 V恒壓）分離，然后按照200 mA恒流電轉(zhuǎn)移2 h后，加入1∶500稀釋的兔抗大鼠GAPDH、AMPK、GLUT4及PPARγ抗體，4 ℃孵育過(guò)夜，TBST漂洗后用1∶2 000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育1 h，漂洗后用ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒增強(qiáng)發(fā)光，利用E-Gel Imager凝膠成像儀成像，以GAPDH為內(nèi)參，使用Image J 12.0軟件測(cè)定蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料均符合正態(tài)分布且方差齊，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[[x] ±s

]）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠子宮指數(shù)比較 空白對(duì)照組、多囊卵巢綜合征組、白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組子宮指數(shù)（mg/g）分別為1.06±0.45、2.94±0.12、2.14±0.34、1.75±0.42、1.27±0.06和1.13±0.08，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=10，F(xiàn)=75.781，P＜0.05）。與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組子宮指數(shù)升高（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組大鼠子宮指數(shù)降低（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組子宮指數(shù)降低（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組子宮指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠FINS、FBG、2 h PBG、ISI以及IR比較 與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組FINS、FBG、2 h PBG和IR水平升高，ISI水平降低（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組和八珍湯合白術(shù)附子湯組大鼠FINS、FBG、2 h PBG和IR水平降低，ISI水平升高（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組FINS、FBG、2 h PBG和IR水平降低，ISI水平升高（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組FINS、FBG、2 h PBG和IR水平降低，ISI水平升高（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 各組大鼠血清E2、T、LH、FSH、PRL、AMH和IGF-1比較 與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組血清T、LH、FSH、PRL、AMH和IGF-1水平升高，E2水平降低（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組血清T、LH、FSH、PRL、AMH和IGF-1水平降低，E2水平升高（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組血清T、LH、FSH、PRL、AMH和IGF-1水平降低，E2水平升高（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組T、LH、PRL、AMH和IGF-1水平升高，E2水平降低（P＜0.05），見(jiàn)表3。

2.4 各組大鼠卵巢組織CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC、SOD和MDA水平比較 與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組卵巢組織CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC和MDA水平升高，SOD水平降低（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組卵巢組織CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC和MDA水平降低，SOD水平升高（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組卵巢組織CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC和MDA水平降低，SOD水平升高（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC和MDA水平降低，SOD水平升高（P＜0.05），見(jiàn)表4。

2.5 各組大鼠卵巢組織病理學(xué)改變 空白對(duì)照組卵巢組織細(xì)胞排列整齊，無(wú)明顯病理性改變；與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組卵巢組織細(xì)胞排列雜亂，卵巢組織多囊樣改變；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組卵巢組織病理明顯改善，見(jiàn)圖1。

2.6 各組大鼠子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1、HOXA10 mRNA水平比較 與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1 mRNA水平升高，HOXA10 mRNA水平降低（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1 mRNA水平降低，HOXA10 mRNA水平升高（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1 mRNA水平降低，HOXA10 mRNA水平升高（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組ARA70、CBP、HOXA10 mRNA水平降低，SCR1 mRNA水平升高（P＜0.05），見(jiàn)表5。

2.7 各組大鼠卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA表達(dá)水平比較 與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA水平降低（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA水平升高（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組卵巢組織AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA水平升高（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組AMPK、GLUT4、PPARγ mRNA水平升高（P＜0.05），見(jiàn)表6。

2.8 各組大鼠卵巢組織AMPK、GLUT4和PPARγ蛋白表達(dá)水平比較 與空白對(duì)照組比較，多囊卵巢綜合征組卵巢組織AMPK、GLUT4和PPARγ蛋白水平降低（P＜0.05）；與多囊卵巢綜合征組比較，白術(shù)附子湯組、八珍湯組、八珍湯合白術(shù)附子湯組及己烯雌酚組卵巢組織AMPK、GLUT4和PPARγ蛋白水平升高（P＜0.05）；與白術(shù)附子湯組和八珍湯組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組卵巢組織AMPK、GLUT4和PPARγ蛋白水平升高（P＜0.05）；與己烯雌酚組比較，八珍湯合白術(shù)附子湯組AMPK、GLUT4和PPARγ蛋白水平升高（P＜0.05），見(jiàn)圖2、表7。

3 討論

目前，臨床主要采用藥物和手術(shù)治療多囊卵巢綜合征，其中，藥物治療以降低高雄激素藥物、促排卵藥物及胰島素增敏劑等為主，但存在有效率低、復(fù)發(fā)率高等缺點(diǎn)，對(duì)于多囊卵巢綜合征治療藥物的研發(fā)仍是當(dāng)前主要工作重點(diǎn)之一。

八珍湯記載于中醫(yī)學(xué)著作《正體類要》，由人參、白術(shù)、白茯苓、當(dāng)歸、川芎、白芍藥、熟地黃、甘草、大棗及生姜組成，方中人參、熟地黃共為君藥，起到補(bǔ)脾益肺，益氣補(bǔ)血之功效，白術(shù)、茯苓、當(dāng)歸、芍藥共為臣藥，發(fā)揮健脾益氣，燥濕利水，活血化瘀，消腫止痛之功效，川芎、大棗及生姜共為佐藥，起活血行氣，祛風(fēng)止痛，益氣生津之功效，甘草為使藥，調(diào)和諸藥。白術(shù)附子湯出自中醫(yī)學(xué)著作《金匱要略》，由白術(shù)、附子、炙甘草、生姜、大棗組成，方中附子散寒止痛、回陽(yáng)救逆，為君藥，生姜解表散寒，為臣藥，白術(shù)、炙甘草、大棗共為佐藥，起到化濕祛風(fēng)，健脾益氣之功效，全方共奏，溫陽(yáng)通經(jīng)，祛風(fēng)除濕。張玉紅等［5］研究表明，八珍湯能夠顯著改善青春期多囊卵巢綜合征患者性激素水平，恢復(fù)月經(jīng)周期；馬要敏［6］研究證實(shí)，白術(shù)附子湯較傳統(tǒng)西藥治療，能夠顯著改善多囊卵巢綜合征患者卵巢竇卵泡數(shù)目及卵巢平均體積，調(diào)節(jié)患者體內(nèi)睪酮及黃體生成素水平，顯著改善患者月經(jīng)周期。由此可見(jiàn)，八珍湯及白術(shù)附子湯在多囊卵巢綜合征的治療中具有較大潛力。

糖代謝異常與多囊卵巢綜合征的發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)。董敏等［10］研究表明，降低血糖水平及IR能夠顯著改善多囊卵巢綜合征大鼠卵巢組織損傷及病理進(jìn)展；王琛等［11］研究證實(shí)調(diào)節(jié)多囊卵巢綜合征患者血糖及IR水平能夠顯著改善患者性激素水平。本研究結(jié)果提示，八珍湯合白術(shù)附子湯能夠顯著調(diào)節(jié)多囊卵巢綜合征大鼠血糖水平及IR，進(jìn)而改善大鼠卵巢組織病理進(jìn)展；且作用效果優(yōu)于單獨(dú)使用白術(shù)附子湯組及八珍湯；八珍湯合白術(shù)附子湯組對(duì)于多囊卵巢綜合征的改善作用可能與其糖代謝調(diào)節(jié)作用密切相關(guān)。

ARA70、CBP、SCR1、HOXA10作為子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)基因，其水平體現(xiàn)了多囊卵巢綜合征的發(fā)生及發(fā)展?fàn)顟B(tài)。張維怡等［12］研究表明升高多囊卵巢綜合征大鼠子宮內(nèi)膜組織HOXA10水平能夠顯著改善子宮內(nèi)膜形態(tài)及組織病理學(xué)變化，改善子宮內(nèi)膜容受性；鄭冬雪等［13］研究證實(shí)，抑制多囊卵巢綜合征大鼠子宮內(nèi)膜ARA70、CBP、SCR1水平能夠調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)激素水平，促進(jìn)卵泡發(fā)育，提高子宮內(nèi)膜容受性。本研究結(jié)果提示，八珍湯合白術(shù)附子湯可通過(guò)調(diào)節(jié)ARA70、CBP、SCR1、HOXA10等基因表達(dá)改善多囊卵巢綜合征大鼠子宮內(nèi)膜容受性，且作用效果優(yōu)于單獨(dú)使用白術(shù)附子湯組及八珍湯。

E2、T、LH、FSH、PRL、AMH、IGF-1作為性激素的常用檢驗(yàn)指標(biāo)，其水平與多囊卵巢綜合征的發(fā)生相關(guān)。張萍等［14］研究證實(shí)，抑制多囊卵巢綜合征大鼠血清T、LH水平，升高E2、FSH水平能夠顯著改善多囊卵巢綜合征大鼠卵巢組織疾病進(jìn)展。本研究結(jié)果提示，八珍湯合白術(shù)附子湯能夠通過(guò)調(diào)節(jié)多囊卵巢綜合征大鼠性激素水平，促進(jìn)卵巢組織及功能的恢復(fù)，且作用效果優(yōu)于單獨(dú)使用白術(shù)附子湯組及八珍湯。

CRP、IL-6、TNF-α、T-AOC、SOD和MDA作為組織細(xì)胞炎癥損傷的標(biāo)志性物質(zhì)，其水平異常影響著卵巢組織病理狀態(tài)及功能。周春玉［15］研究表明，抑制多囊卵巢綜合征患者體內(nèi)CRP、TNF-α水平可改善患者卵巢組織病理變化及子宮內(nèi)膜厚度；虎娜等［7］研究證實(shí)，多囊卵巢綜合征大鼠卵巢組織T-AOC、SOD水平升高，MDA水平降低，可提高大鼠卵巢組織抗氧化能力，促進(jìn)卵巢組織病理恢復(fù)。本研究結(jié)果提示，八珍湯合白術(shù)附子湯可抑制多囊卵巢綜合征大鼠卵巢組織氧化應(yīng)激反應(yīng)及炎癥損傷，修復(fù)卵巢組織病理改變。

本研究結(jié)果顯示，八珍湯合白術(shù)附子湯可激活A(yù)MPK/GLUT4/PPARγ通路及相關(guān)蛋白表達(dá)，進(jìn)而改善多囊卵巢綜合征大鼠胰島素抵抗，調(diào)節(jié)雌激素水平，抑制卵巢組織病理性改變。胡紅梅等［16］研究表明提高PPARγ、GLUT4水平可促進(jìn)小鼠糖代謝；萬(wàn)春平等［17］研究證實(shí)AMPK表達(dá)上調(diào)可改善胰島素抵抗，調(diào)節(jié)糖代謝；羅新新等［18］研究表明，激活GLUT4、PPARγ表達(dá)可促進(jìn)葡萄糖利用，調(diào)節(jié)糖代謝，改善胰島素抵抗。唐陽(yáng)琳等［19］研究表明，多囊卵巢綜合征大鼠GLUT4水平升高可抑制胰島素抵抗、卵巢組織及子宮內(nèi)膜病變的發(fā)生。

綜上所述，八珍湯合白術(shù)附子湯可調(diào)節(jié)多囊卵巢綜合征大鼠糖代謝水平，抑制卵巢組織氧化及炎癥損傷，改善大鼠子宮內(nèi)膜容受性，調(diào)節(jié)雌激素水平，抑制多囊卵巢綜合征疾病進(jìn)展，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)AMPK/GLUT4/PPARγ通路有關(guān)。

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