韓生義,李淑萍,胡國元,李生慶

(青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院,青海 西寧 810016)

近年來,隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展,各種病害問題也日趨嚴(yán)重,細(xì)菌性疾病就是嚴(yán)重制約我國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素,其中牛羊常見病原菌主要包括:大腸桿菌、沙門氏菌、多殺性巴氏桿菌、梭菌以及支原體等[1]。病原檢測(cè)可以為牛羊疾病的診斷和治療提供有力支持,然而傳統(tǒng)的檢測(cè)方法難以實(shí)現(xiàn)快速高效的診斷,開發(fā)快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法是獸醫(yī)臨床診斷中亟待解決的問題。近年來,隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的不斷發(fā)展,各種新型的病原微生物檢測(cè)技術(shù)不斷出現(xiàn),不僅可進(jìn)行準(zhǔn)確的病原診斷,還能進(jìn)行病原菌分型,極大地提高了檢測(cè)的效率和準(zhǔn)確性[2]。本文就近年來牛羊常見細(xì)菌病的快速診斷方法做以下綜述。

1 大腸桿菌病

大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的幼畜以腹瀉和敗血癥為主要癥狀的一種疾病,傳染性強(qiáng),發(fā)病迅速,死亡率高,對(duì)養(yǎng)殖行業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大,該病還可通過食物鏈感染人,對(duì)公共衛(wèi)生有重要影響[3]。該病可根據(jù)流行病學(xué)特征和臨床癥狀做初步診斷,確診則需進(jìn)行病原菌分離和鑒定。

檢測(cè)方法包括PCR方法和ELISA方法。如Chen等[4]建立了用于檢測(cè)O157致病性大腸桿菌的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法;李夫宏等[5]建立了一種特異性強(qiáng)、靈敏性高、重復(fù)性好的多重?zé)晒舛縋CR方法,可應(yīng)用于致病性大腸桿菌的快速檢測(cè)[5];張雪佳[6]建立了雙重PCR方法,可快速檢測(cè)大腸桿菌和沙門氏菌,且特異性和可重復(fù)性好;王淑娟等[7]開發(fā)了一種基于金屬有機(jī)骨架免疫磁珠富集結(jié)合多酶恒溫核酸快速擴(kuò)增的檢測(cè)方法,該法操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)迅速,適用于大腸桿菌O157∶H7的快速檢測(cè);田鑫鑫等[8]建立一種快速檢測(cè)產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的基于側(cè)流層析的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)方法,該方法靈敏度和特異性好,且耗時(shí)短、檢測(cè)結(jié)果直觀可見;程家園等[9]建立一種檢測(cè)致病性大腸桿菌的間接ELISA方法,該方法特異性、敏感性和重復(fù)性及可靠性良好;蘇志鵬[10]構(gòu)建了基于脫氧核酶生物傳感器的大腸桿菌檢測(cè)方法,具有簡(jiǎn)易快速、低成本、高靈敏度和高特異性等優(yōu)勢(shì)。

2 巴氏桿菌病

該病是由A、B和E型多殺性巴氏桿菌引起的一種重要傳染病,能夠引起多種動(dòng)物及人類感染[11],主要引發(fā)牛羊急性出血性敗血癥和呼吸系統(tǒng)疾病。該病發(fā)病急,死亡率接近100%。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球30%的牛死亡都是由該病造成的,僅在北美,每年就造成10億美元損失[12]。

檢測(cè)方法包括PCR方法和免疫學(xué)方法。如劉艷艷等[13]建立了一種多重?zé)晒舛縋CR方法,該方法簡(jiǎn)便高效,能特異性地檢測(cè)鏈球菌和多殺性巴氏桿菌;吳昊天等[14]構(gòu)建了雙重套式PCR方法,具有良好的敏感性和特異性,可用于多殺性巴氏桿菌與布氏桿菌的快速檢測(cè);高瑞等[15]建立了用于牛源多殺性巴氏桿菌和溶血性曼氏桿菌的雙重PCR方法,具有高特異性和敏感性;王錦祥等[16]建立了檢測(cè)F型多殺性巴氏桿菌的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法,該方法重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高、敏感性高;鄭冰潔等[17]建立了一種基于磁珠的"雙抗夾心"免疫顯色方法,具有良好的特異性和重現(xiàn)性。佟佳音[18]建立了一種基于產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌抗體檢測(cè)的阻斷ELISA方法,不僅敏感性高且特異性強(qiáng);蔣守川[19]建立了一種敏感性高且特異性好的檢測(cè)多殺性巴氏桿菌PMT抗原的夾心ELISA方法。除此之外,還有PCR-ELISA法,如許淑玉[20]建立了同時(shí)檢測(cè)BRD牛支原體、多殺性巴氏桿菌和溶血曼氏桿菌的多重PCR-ELISA,具有快速高效、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。

3 沙門氏菌病

沙門氏菌病又稱為副傷寒,可引起畜禽胃腸炎、敗血癥及流產(chǎn)等[21]。各年齡段的畜禽均可感染,但對(duì)幼畜危害最大,感染后病死率達(dá)50%以上[22]。因此,該病的診斷和防治對(duì)提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益有重要意義。

檢測(cè)方法包括PCR方法、免疫學(xué)方法和生物傳感器技術(shù)等。鄢雷娜等[23]建立了一種特異性強(qiáng)且靈敏度高的雙重?zé)晒舛縋CR方法,可用于沙門氏菌和大腸桿菌的快速檢測(cè);劉東海等[24]建立了多重PCR,可快速鑒別腸炎、鼠傷寒、雞白痢和雞傷寒等血清型;李夫宏等[5]建立了可檢測(cè)大腸桿菌、沙門氏菌、空腸彎曲桿菌和奇異變形桿菌的多重定量PCR,該方法特異性強(qiáng)、靈敏性高、重復(fù)性好;程深偉等建立了一種快速穩(wěn)定的多重微滴式數(shù)字PCR方法,可實(shí)現(xiàn)對(duì)金黃色葡萄球菌、O157∶H7大腸桿菌和腸炎沙門氏菌高效精確的檢測(cè)[25];楊松鑫等[26]建立了一種基于Tris輔助法制備的檢測(cè)沙門菌的膠體金,該方法敏感性高、特異性好、重復(fù)性好;董永貞等[27]構(gòu)建了一種基于鉑殼金核納米酶介導(dǎo)順磁離子價(jià)態(tài)轉(zhuǎn)變的磁弛豫免疫傳感器,該方法靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)單、成本低,可快速檢測(cè)沙門氏菌;劉婷等[28]基于分子印跡聚合物的電化學(xué)傳感,采用電化學(xué)聚合表面印跡策略,實(shí)現(xiàn)了對(duì)沙門氏菌的快速檢測(cè);白夢(mèng)凡等[29]將免疫磁分離技術(shù)和ELISA結(jié)合,建立了一種快速簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度高的檢測(cè)腸炎沙門氏菌IMS-ELISA方法。

4 梭菌病

梭菌性疾病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌、腐敗梭菌、諾維氏梭菌和肉毒梭菌等所引起的一類急性傳染病,該病發(fā)病急、病程短且死亡率高[30]。當(dāng)天氣驟變、養(yǎng)殖環(huán)境潮濕和飼草缺乏導(dǎo)致牛羊的免疫力下降時(shí),梭菌在體內(nèi)的增殖和毒素分泌加速,導(dǎo)致突然發(fā)病和死亡。該病常為幾種梭菌混合感染,導(dǎo)致病原確診困難[31]。

檢測(cè)方法主要包括PCR方法和免疫學(xué)方法。李一鳴等[32]建立了羊源產(chǎn)氣莢膜梭菌A、B、C、D型的多重?zé)晒舛縋CR方法,具有良好的敏感性、特異性和重復(fù)性;蘇燕[33]建立了一種具有良好的敏感性和特異性的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的間接ELISA方法;王舒萍[34]建立了一種特異性強(qiáng)、靈敏度高的雙重環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增結(jié)合橫向測(cè)流生物傳感技術(shù)的方法,可鑒定B型和D型的產(chǎn)氣莢膜梭菌,并同時(shí)檢測(cè)CPB和ETX毒素;吳霜等[35]建立了產(chǎn)氣莢膜梭菌β2毒素抗體間接ELISA檢測(cè)方法,該方法靈敏度高且特異性好;翁鴻宇[36]建立了一種腐敗梭菌膠體金檢測(cè)方法,可用于羊快疫的快速診斷。

5 傳染性胸膜肺炎

傳染性胸膜肺炎是一種由支原體引起的牛羊傳染性呼吸道疾病,該病為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為須呈報(bào)的疫病[37],感染后主要侵害牛羊的肺和胸膜,引起纖維素性肺炎和胸膜炎。該病經(jīng)呼吸道和消化道傳播,感染后出現(xiàn)高燒、食欲下降、反芻減緩、咳嗽和呼吸困難等癥狀,并造成牛羊生長發(fā)育遲緩、生產(chǎn)性能下降,嚴(yán)重阻礙養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[38, 39]。

檢測(cè)方法包括PCR方法和免疫學(xué)方法。李媛等[40]建立了牛支原體的套式PCR,該方法特異性強(qiáng)、敏感性高;辛九慶等[41]建立了一種快速高效的牛支原體的間接ELISA檢測(cè)方法,目前已應(yīng)用到國內(nèi)多地;辛九慶等[42]建立了一種檢測(cè)絲狀支原體絲狀亞種SC生物型(MmmSC)的高敏感性的PCR檢測(cè)方法。

6 結(jié)語

近年來,病原微生物的快速診斷技術(shù)發(fā)展迅速。各種快速檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)化了過去繁瑣的微生物學(xué)的檢測(cè)方法,并提高了檢測(cè)的特異性和敏感性,已被普遍應(yīng)用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,很多新型的快速檢測(cè)技術(shù)不斷出現(xiàn),提高了獸醫(yī)臨床診斷的準(zhǔn)確性和效率,為牛羊細(xì)菌病防控提供了強(qiáng)有力的技術(shù)保障。