◎ 呂道俊，郭秋平，歐慧瑜，余增才，陳錦枝

（廣州醫(yī)藥研究總院有限公司藥物非臨床評價研究中心，廣東 廣州 510240）

根據(jù)《中國成人血脂異常防治指南（2016 年修訂版）》的論述[1]，在治療血脂異常的過程中，飲食管理和積極改善生活方式是最基本、最重要的舉措。臨床上主要通過抑制肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇的合成、加速低密度脂蛋白分解代謝、減少腸道對膽固醇的吸收等途徑來降低血脂水平。代表藥物主要包括HMG-CoA 還原酶抑制劑（如他汀類）、膽固醇吸收抑制劑（依折麥布）、膽酸螯合劑（如考來烯胺）及其他調(diào)脂藥（如普羅布考、脂必泰、多廿烷醇）等。尤其以他汀類的使用最為廣泛，但長期化學(xué)藥物治療會產(chǎn)生一定的副作用，因此開發(fā)安全、有效的降血脂產(chǎn)品至關(guān)重要。

水溶性番茄濃縮物物（Fruitflow?）[2]，是歐洲第一個根據(jù)“關(guān)于食品營養(yǎng)和健康聲明的法規(guī)”獲得健康聲明批準(zhǔn)的產(chǎn)品，它能顯著抑制血小板聚集。Fruitflow?除了能降低血小板的反應(yīng)性，還含有抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶及抗炎的因子，是一種有效的、天然的心臟保護功能性食品。汪玉芳等[3]的研究顯示，水溶性番茄濃縮物對高脂血癥的大鼠模型有輔助降低血清膽固醇的功效。莫納可林K 作為紅曲的主要活性成分，以內(nèi)酯或羥基酸的形式存在，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與HMG-CoA 相似，通過與HMG-CoA 還原酶競爭性結(jié)合，從而降低該酶的活性。這種作用有助于抑制內(nèi)源性膽固醇的合成，并增加載脂蛋白受體的活性，進而有效降低血漿中低密度脂蛋白（Low-Density Lipoprotein，LDL）、中密度脂蛋白（Intermediate Density Lipoprotein，IDL）和極低密度脂蛋白（Very Low Density Lipoprotein，VLDL）的濃度。莫納可林K 在降低血漿中膽固醇濃度方面還具備另一個重要的作用，即通過代償性地增加LDL 受體的活性，促進血漿中LDL 的清除過程。因此，除了抑制內(nèi)源性膽固醇合成外，莫納可林K 還能通過提高LDL 受體活性來進一步降低血漿中膽固醇的濃度[4]。

為了進一步闡明水溶性番茄濃縮物及其與紅曲粉復(fù)配后對心血管系統(tǒng)的保護作用，以及對血脂水平的調(diào)節(jié)作用，本研究遵循《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9 個保健功能評價方法的通知》（國食藥監(jiān)?；?012〕107 號）文件中的《輔助降血脂功能評價方法》進行實驗，特意考察該復(fù)合物的降血脂效果，并評估其對凝血4 項指標(biāo)的影響，以全面了解其功效和安全性。通過本研究，期望能夠提供更多關(guān)于水溶性番茄濃縮物與紅曲粉復(fù)配的心血管保護能力及調(diào)節(jié)血脂作用機制的科學(xué)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

血脂4 項，即低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯、總膽固醇的試劑由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號分別為201731、211101、211481、211581；血凝4 項，即凝血酶原時間、活化部分凝血酶原時間、凝血酶時間、纖維蛋白原的試劑由德國美創(chuàng)TECO 公司生產(chǎn)，批號分別為30002873、200951、10002936、40002923。

BECKMANAU480 生化分析儀，美國貝克曼庫爾特公司；Coatron1800 全自動血凝儀，德國美創(chuàng)公司；離心機，德國sigma 公司；BSA224S 電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；BSA2202S 電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實驗樣品

樣品1 為水溶性番茄濃縮物，為紅棕色粉末，批號為Y210602-A，有效期至2023 年6 月，人體推薦劑量為150 mg·d-1，由湯臣倍健股份有限公司生產(chǎn)提供。

樣品2 為新絡(luò)素紅曲片（水溶性番茄物復(fù)配紅曲，其中水溶性番茄濃縮物推薦量150 mg，紅曲推薦量500 mg），片劑，內(nèi)容物為淺棕色固體，規(guī)格為480 mg/片、60 片/瓶，生產(chǎn)批號為202104R，生產(chǎn)日期為2021-05-23，有效期24 個月，人體推薦劑量為1.92 g·d-1。

陽性對照物為阿托伐他汀鈣片（立普妥），規(guī)格為20 mg/片、7 片/盒，生產(chǎn)批號為E01458，生產(chǎn)日期為2020-09-18，有效期至2023 年8 月，說明書推薦服用劑量為10 mg·d-1。

樣品1 和樣品2 用無菌水配制成不同劑量的受試物，供實驗用，以下簡稱“樣品”；陽性對照物用無菌水配制。

1.3 實驗動物與飼料

選用140～160 g健康SPF級雄性SD大鼠共108只。本研究所使用的實驗動物由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，實驗動物使用許可證號為SYXK（京）2017-0038。動物實驗過程嚴(yán)格遵守了相關(guān)法規(guī)和倫理要求，確保動物的福利與權(quán)益得到充分尊重和保護。

本實驗采用的高脂飼料配方為1.2%膽固醇、15%豬油、20%糖和0.2%膽酸鈉。飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn)，許可證號為SCXK（京）2019-00081。通過高脂飼料可模擬高脂飲食對動物體內(nèi)脂質(zhì)代謝和膽固醇水平的影響，以便更好地研究相關(guān)的生理效應(yīng)和機制。

1.4 方法

1.4.1 輔助降血脂實驗方法

選取健康合格的雄性SD 大鼠108 只，分為空白對照組與模型組，其中空白對照組12 只大鼠給予維持飼料，模型組96 只大鼠給予高脂飼料。兩周后對空白對照組和模型組大鼠通過不禁食的方式進行采血，采血后制備血清和血漿進行甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（High Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（Low-Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C）[5]與凝血4 項即凝血酶原時間（Prothrombin Time，PT）、活化部分凝血酶原時間（Activated Partial Thromboplastin Time，APTT）、凝血酶時間（Thrombin Time，TT）、纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)IB）的檢測。將模型組按總膽固醇水平進行隨機分組，分別為模型對照組、陽性對照組、樣品1 低劑量組、樣品1 中劑量組、樣品1 高劑量組、樣品2 低劑量組、樣品2 中劑量組和樣品2高劑量組。給予陽性對照組，樣品1 和樣品2 低、中、高7 個劑量組高脂飼料并通過灌胃給藥的方式給予不同劑量的受試物；模型對照組給予高脂飼料、空白對照組給予維持飼料，兩組也以灌胃的方式給予相應(yīng)體積的無菌水。給予受試物45 d 后在不禁食的情況下取血，對各組大鼠的血脂4 項指標(biāo)（TG、HDL-C、TC、LDL-C）和血凝4 項指標(biāo)（PT、APTT、TT、FIB）進行測定。

1.4.2 血脂4 項的測定方法

取靜脈血，按3 333 r·min-1離心10 min 的要求制備血清，通過全自動生化分析儀進行測定。

1.4.3 血凝4 項的測定方法

取靜脈血制備血漿，用全自動血凝儀進行測定。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件進行分析處理，采用方差分析進行統(tǒng)計學(xué)檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值＜F0.05，各組均數(shù)間無顯著性差異；F值≥F0.05，P≤0.05，各實驗組和對照組組間比較采用兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)變量轉(zhuǎn)換，若滿足正態(tài)或方差齊要求，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊，用秩和檢驗對原數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計。

2 結(jié)果與分析

2.1 一般觀察

在開展實驗過程中，各組大鼠的外觀體征、分泌物、排泄物、行為活動、呼吸和精神狀態(tài)等未發(fā)現(xiàn)異常情況。

2.2 受試物對SD 大鼠體重的影響

由表1 可見，大鼠給受試物前各組初始體重組間比較均無顯著性差異（P＞0.05），大鼠給受試物后各組體重組間比較也均無顯著性差異（P＞0.05），即給予大鼠樣品1 和樣品2 并未觀察到對其體重產(chǎn)生不良影響的情況。這表明在實驗條件下，這兩個樣品對大鼠的體重?zé)o明顯的負(fù)面影響。

表1 受試物對高脂血癥大鼠體重的影響表（±s）

表1 受試物對高脂血癥大鼠體重的影響表（±s）

2.3 樣品對SD 大鼠血脂4 項指標(biāo)的影響

如表2 所示，與空白對照組比較，模型對照組動物的總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇上升，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01 或0.05），判定模型成立。與模型對照組比較，樣品1 高劑量組可使高血脂模型大鼠的TC 降低（P＜0.05），各劑量組的TG、LDL-C、HDL-C 均無顯著變化；樣品2 高劑量組能使高血脂模型組大鼠的TC 含量（P＜0.05）和TG 含量（P＜0.05）降低，各劑量組的LDL-C、HDL-C 均無顯著變化。因此，高劑量組的樣品1 和樣品2 均有降低高血脂模型大鼠的TC、輔助降低血脂的作用。

表2 給藥后樣品1 和樣品2 對高脂血癥大鼠血清各項指標(biāo)的影響表（±s）

表2 給藥后樣品1 和樣品2 對高脂血癥大鼠血清各項指標(biāo)的影響表（±s）

注：與空白對照組比較，“#”表示P ＜0.05，“##”表示P ＜0.01；與模型對照組比較，“*”表示P ＜0.05，“**”表示P ＜0.01。下同。

2.4 樣品對SD 大鼠凝血4 項指標(biāo)的影響

如表3 所示，經(jīng)口給予大鼠不同劑量的樣品1 與樣品2 在45 d 后與空白對照組比較，各劑量組血凝4 項指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05），即樣品1 和樣品2 對高血脂模型大鼠血凝4 項指標(biāo)無影響。

表3 給藥后樣品1 和樣品2 對高脂血癥大鼠凝血4 項指標(biāo)的影響表（±s）

表3 給藥后樣品1 和樣品2 對高脂血癥大鼠凝血4 項指標(biāo)的影響表（±s）

3 結(jié)論與討論

隨著社會的不斷發(fā)展，人們的生活方式與生活水平發(fā)生了明顯變化。當(dāng)前，人口老齡化越來越嚴(yán)重導(dǎo)致居民生活方式不健康問題日益突出，心血管疾病（Cardiovascular Disease，CVD）危險因素對居民健康的影響變得更加明顯，CVD 患病率和發(fā)病率不斷增長。根據(jù)2019 年的數(shù)據(jù)[6]，城市地區(qū)和農(nóng)村地區(qū)CVD 導(dǎo)致的死亡人數(shù)分別占總死亡人數(shù)的44.26%和46.74%。根據(jù)歐洲食品安全局在2018 年發(fā)布的科學(xué)意見[7]，心血管健康功能聲明涵蓋了多個方面，包括降低血脂、降低血壓、改善內(nèi)皮功能以及減少血小板聚集效應(yīng)等。其中，降血脂和減少血小板聚集都是維護心血管健康的有效手段。

人體內(nèi)大約1/3 的總膽固醇來自食物，剩下的2/3則分別由肝臟和小腸合成。膽固醇的合成過程有25 種酶的參與，其中羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶催化生成甲羥戊酸（MVA）被認(rèn)為是最為關(guān)鍵的一步。該步驟在膽固醇生物合成途徑中發(fā)揮著重要的作用，并且對維持膽固醇的正常水平具有重要意義。經(jīng)一系列步驟，甲羥戊酸可進一步轉(zhuǎn)化為膽固醇以及其他相關(guān)產(chǎn)物，此過程中的酶催化反應(yīng)起著至關(guān)重要的作用。莫納可林可通過競爭性抑制體內(nèi)膽固醇合成途徑中的限速酶HMG-CoA 還原酶，達到降低膽固醇含量的效果。紅曲中所含的天然莫納可林K 無須依賴體內(nèi)的羥基酸酯酶進行水解，可以直接發(fā)揮降脂作用。這種特點使得莫納可林具有良好的降脂效果，并且不會增加肝臟和腎臟的負(fù)擔(dān)，副作用較小。多項臨床研究證明[8-10]，攝入水溶性番茄濃縮物后，可以減少血小板的聚集，從而使血液保持流動且不易凝結(jié)。這有助于預(yù)防血液中微小凝塊的形成，并防止血小板黏附在血管壁或脂肪斑上。此外，番茄濃縮物中含有綠原酸和黃酮等物質(zhì)，可以抑制低密度脂蛋白的氧化過程，進而降低膽固醇水平。紅曲和番茄濃縮物復(fù)配既能輔助降低血脂水平，又能抑制血小板聚集，因此可降低心血管風(fēng)險。不影響正常的血小板凝血功能是血小板聚集功能的重要安全性指標(biāo)，本實驗中觀察了水溶性番茄濃縮物及其與紅曲復(fù)配對凝血功能的影響，結(jié)果表明，水溶性番茄濃縮物及其與紅曲復(fù)配均對凝血功能沒有影響，進一步驗證了其具有輔助降血脂的功效且對凝血功能無影響。