曹春玲，張潤(rùn)鋒，嚴(yán)詩(shī)云，潘曉芳，吳靜標(biāo)（通信作者）

廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 （廣東廣州 510663）

乙型肝炎病毒表面抗體（hepatitis b virus surface antibodies，HBsAb）濃度高于10 mIU/ml 時(shí)能對(duì)患者進(jìn)行有效保護(hù)，也可以此判斷乙型肝炎病毒感染后體內(nèi)抗體的反應(yīng)和直觀了解接種疫苗后的機(jī)體免疫狀態(tài)[1]?；瘜W(xué)發(fā)光法由于具有靈敏度高、快速、自動(dòng)化、可定量、可降低人為誤差、可用于乙肝病毒感染的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)等優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于臨床，日漸成為主流的HBsAb 檢測(cè)方法[2-4]。由于不同測(cè)試系統(tǒng)特別是當(dāng)測(cè)試系統(tǒng)量值溯源不同時(shí)，檢測(cè)結(jié)果的差異可能影響對(duì)患者免疫狀態(tài)的評(píng)估結(jié)果。因此，本研究比較2 種國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光測(cè)試系統(tǒng)間結(jié)果的一致性和統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系，并與臨床使用廣泛的測(cè)試系統(tǒng)A 的結(jié)果進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)，分析系統(tǒng)間的一致性和互換性。

1 材料和方法

1.1 測(cè)試樣本

采用乙肝五項(xiàng)全陰性血漿的HBsAb 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品1 號(hào)樣本（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：300015-201802，濃度：160 mIU/ml），按比例稀釋為100、50、30、20、12、6 mIU/ml。使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（雅培公司，型號(hào)：Alinityi）及配套HBsAb 檢測(cè)試劑盒（Anti-HBs Reagent Kit）對(duì)6 個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)試，均值分別為108.12、55.33、35.79、25.70、16.45、9.12 mIU/ml。

1.2 測(cè)試系統(tǒng)

測(cè)試系統(tǒng)1：采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司，型號(hào)：Maglumi 4000 Plus）及配套的HBsAb 測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法，批號(hào)：12422011）測(cè)定樣品濃度。

測(cè)試系統(tǒng)2：采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，型號(hào)：CL 2000i）及配套的HBsAb（Anti-HBs）測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法，批號(hào)：2022010111）和HBsAb 校準(zhǔn)品（批號(hào)：2021110100）測(cè)定樣品濃度。

測(cè)試系統(tǒng)A：采用型號(hào)為Alinityi 的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（雅培公司，型號(hào)：Alinityi）及配套HBsAb 檢測(cè)試劑盒（Anti-HBs Reagent Kit）測(cè)定樣品濃度。

1.3 樣品檢測(cè)

試驗(yàn)前調(diào)試儀器，確定儀器狀態(tài)良好，設(shè)置儀器參數(shù)信息。測(cè)試系統(tǒng)裝載試劑后進(jìn)行定標(biāo)，對(duì)樣品進(jìn)行上機(jī)測(cè)試。測(cè)試系統(tǒng)1、測(cè)試系統(tǒng)2 分別對(duì)每份樣品平行檢測(cè)2 次。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)2 個(gè)測(cè)試系統(tǒng)采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和相關(guān)性分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2 的結(jié)果分別與測(cè)試系統(tǒng)A 的結(jié)果采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行直線擬合，得到線性回歸方程，分別計(jì)算測(cè)試值均值（Y）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）、權(quán)重（W），根據(jù)權(quán)重公式計(jì)算斜率（a）和截距（b），將測(cè)試系統(tǒng)A 的結(jié)果代入回歸方程Y=aX+b計(jì)算預(yù)測(cè)值、絕對(duì)線性偏差和相對(duì)線性偏差，上述代入測(cè)試系統(tǒng)的結(jié)果與預(yù)測(cè)值計(jì)算絕對(duì)線性偏差和相對(duì)線性偏差。

2 結(jié)果

2.1 測(cè)試系統(tǒng)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和相關(guān)性分析

測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2 的結(jié)果均值和信號(hào)值均值作為變量，測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2 間HBsAb 定量檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[υ=8，ABS（t）=2.535，t0.05（8）=2.306，P<0.05]。兩直線斜率比較，差異有統(tǒng)計(jì)意義（|t|≥t0.05（8），P≤0.05），不平行，見(jiàn)表1。對(duì)測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2 的結(jié)果進(jìn)行線性二次回歸擬合，相關(guān)系數(shù)r=0.99341，擬合曲線圖見(jiàn)圖1。

圖1 兩測(cè)試系統(tǒng)結(jié)果的線性二次回歸擬合曲線

表1 測(cè)試系統(tǒng)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和相關(guān)性分析

2.2 測(cè)試系統(tǒng)的一致性和相關(guān)性分析

以測(cè)試系統(tǒng)A 的結(jié)果為自變量，以測(cè)試系統(tǒng)1和測(cè)試系統(tǒng)2 的結(jié)果為因變量進(jìn)行線性擬合，測(cè)試系統(tǒng)1 與測(cè)試系統(tǒng)A 的相關(guān)系數(shù)r=0.99814，絕對(duì)線性偏差為-8.70～9.24 mIU/ml，相對(duì)線性偏差為-7.53%～6.09%；測(cè)試系統(tǒng)2 與測(cè)試系統(tǒng)A的相關(guān)系數(shù)r=0.98821，絕對(duì)線性偏差為-3.46～1.00 mIU/ml，相對(duì)線性偏差為-18.16%～10.03%，測(cè)試系統(tǒng)1、測(cè)試系統(tǒng)2 與測(cè)試系統(tǒng)A 不同濃度點(diǎn)間的結(jié)果一致性良好，見(jiàn)表2～3。

表2 測(cè)試系統(tǒng)1 與測(cè)試系統(tǒng)A 的線性擬合計(jì)算結(jié)果

表3 測(cè)試系統(tǒng)2 與測(cè)試系統(tǒng)A 的線性擬合計(jì)算結(jié)果

3 討論

感染乙型肝炎病毒是慢性肝炎的主要病因，感染者可進(jìn)展為肝硬化、肝衰竭，甚至可引發(fā)肝癌[5-6]。HBsAg 作為乙型肝炎病毒標(biāo)志物之一，是檢測(cè)乙型肝炎病毒的常用指標(biāo)，可準(zhǔn)確反映人體的免疫狀態(tài)和乙型肝炎病毒的含量。乙型肝炎病毒感染的1～2 個(gè)月，在感染者血清中會(huì)出現(xiàn)HBsAg，當(dāng)HBeAg 結(jié)果呈陽(yáng)性時(shí)，提示受檢者患有乙型肝炎，若患者HBeAg 結(jié)果長(zhǎng)期呈陽(yáng)性，乙型肝炎轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿窝椎娘L(fēng)險(xiǎn)增加，并提示病毒復(fù)制活躍、傳染性強(qiáng)，因此感染者需定期監(jiān)測(cè)HBeAg 水平[7-8]。目前，臨床主要采用酶免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBeAg 水平。由于化學(xué)發(fā)光法是對(duì)體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，受化學(xué)反應(yīng)過(guò)程均勻性和完整性影響，結(jié)果存在一定誤差，導(dǎo)致檢測(cè)可能不準(zhǔn)確，但誤差不可避免，因此在變系數(shù)模型的基礎(chǔ)上再考慮協(xié)變量存在測(cè)量誤差的問(wèn)題，使估計(jì)結(jié)果更具有參考性[9]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2間HBsAb 定量檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2 結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r=0.99341，提示在整個(gè)線性區(qū)間內(nèi)具良好相關(guān)性。表明配對(duì)樣本t檢驗(yàn)對(duì)隨機(jī)誤差檢出不敏感，對(duì)系統(tǒng)誤差檢出敏感，對(duì)濃度集中組數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果存在假陽(yáng)性，不建議單獨(dú)使用[10]。故本研究采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)相關(guān)系數(shù)，線性回歸模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以期得到更準(zhǔn)確的結(jié)果。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析中首選模型之一即為經(jīng)典的線性回歸模型，此模型的估計(jì)和推斷體系較為系統(tǒng)。本研究選擇測(cè)試系統(tǒng)A 結(jié)果作為參比值，結(jié)果顯示，測(cè)試系統(tǒng)1 與測(cè)試系統(tǒng)A 的相關(guān)系數(shù)r=0.99814，絕對(duì)線性偏差為-8.70～9.24 mIU/ml，相對(duì)線性偏差為-7.53%～6.09%；測(cè)試系統(tǒng)2 與測(cè)試系統(tǒng)A 的相關(guān)系數(shù)r=0.98821，絕對(duì)線性偏差為-3.46～1.00 mIU/ml，相對(duì)線性偏差為-18.16%～10.03%，測(cè)試系統(tǒng)1 和測(cè)試系統(tǒng)2 的結(jié)果與測(cè)試系統(tǒng)A 結(jié)果間的相關(guān)系數(shù)r均大于0.95，說(shuō)明測(cè)試系統(tǒng)1 與測(cè)試系統(tǒng)A、測(cè)試系統(tǒng)2 與測(cè)試系統(tǒng)A 均具有良好的相關(guān)性。絕對(duì)線性誤差均在臨界值時(shí)分別為-2.11、0.11 mIU/ml，在參考區(qū)間的范圍中HBsAb 的結(jié)果100%落在正常參考范圍內(nèi)。結(jié)果陰、陽(yáng)性定性判斷均一致，結(jié)果總體一致性較為良好。因不同測(cè)試系統(tǒng)的量值溯源性不完全一致，故在線性回歸分析中存在一定偏差，在實(shí)際臨床應(yīng)用中此類偏差對(duì)臨床判斷影響不大。需要特別關(guān)注的是，臨界值樣本檢測(cè)難度較大，但本研究中定性結(jié)果均能達(dá)到一致性判定。測(cè)試系統(tǒng)A 為雅培化學(xué)發(fā)光測(cè)試系統(tǒng)，一直是歐洲肝病學(xué)會(huì)、美國(guó)肝病學(xué)會(huì)及亞太肝病學(xué)會(huì)指南明確提出并認(rèn)可的測(cè)試系統(tǒng)[11-12]，本研究所用的兩組國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法測(cè)試系統(tǒng)結(jié)果與雅培化學(xué)發(fā)光測(cè)試系統(tǒng)的線性相關(guān)性良好，定量的濃度值差值在可接受范圍內(nèi)，包括臨界值樣本在內(nèi)的系列濃度樣本結(jié)果陰、陽(yáng)性判定均達(dá)到一致，故可認(rèn)為2 種國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法測(cè)試系統(tǒng)與被歐洲肝病學(xué)會(huì)、美國(guó)肝病學(xué)會(huì)及亞太肝病學(xué)會(huì)指南明確提出并認(rèn)可的測(cè)試系統(tǒng)的結(jié)果有較好的一致性。

綜上所述，2種國(guó)產(chǎn)測(cè)試系統(tǒng)的結(jié)果具有良好的可比性，與雅培化學(xué)發(fā)光測(cè)試系統(tǒng)的結(jié)果一致性較好，均可用于HBsAb 檢測(cè)，其定性判斷結(jié)果均能達(dá)到一致，臨床可根據(jù)實(shí)際選擇合適的測(cè)試系統(tǒng)。