陳星，倪海星※，趙慧敏，申子平，原慧斌

（1.長(zhǎng)治職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 長(zhǎng)治 046000；2.四川恒通動(dòng)物制藥有限公司，四川 內(nèi)江 641000）

因管理不善，2023年5月2日，山西省陵川縣某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)的保育室仔豬死亡7 頭，除發(fā)生死亡外，其他仔豬的癥狀有呼吸急迫，食欲下降，體溫升高，精神沉郁，皮膚有紫斑，糞軟帶血等；剖檢死豬發(fā)現(xiàn)肝脾腫大，脾質(zhì)堅(jiān)硬，切面為藍(lán)紫色；肝臟上有壞死灶或壞死點(diǎn)，并且多呈腫大狀；腸黏膜上有灰黃色膜，剝離后顯露紅色潰瘍面；淋巴結(jié)腫大，有的淋巴結(jié)干酪樣壞死；肺發(fā)生卡他性炎癥等。初步懷疑為沙門氏菌感染，為進(jìn)一步確診和確保療效，進(jìn)行了沙門氏菌血清型的鑒定和藥敏試驗(yàn)。

1 材料

1.1 試劑

SS 瓊脂平皿由凱恒生物有限責(zé)任公司生產(chǎn)；普通瓊脂平皿、血瓊脂平板由科瑪嘉生物有限責(zé)任公司生產(chǎn)；LB 液體培養(yǎng)基由環(huán)凱微生物有限公司生產(chǎn)；革蘭氏染液由杭州百思生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；生化反應(yīng)試劑由上海博湖有限公司生產(chǎn)；藥敏試紙片由杭州生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；沙門氏菌抗原鑒定血清購(gòu)自天潤(rùn)（寧波）生物有限公司。

1.2 儀器

微量移液槍（規(guī)格：5～50μL）購(gòu)于北京大龍實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；電子天平（型號(hào)：HZY-1203）購(gòu)于華志科學(xué)儀器有限公司；恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)：DNP-9162-1A）購(gòu)于常州潤(rùn)華電器有限公司；蒸汽滅菌鍋（型號(hào)：LSH-18B）購(gòu)于上海尚普儀器設(shè)備有限公司。

1.3 病料

2023年5月3日，無(wú)菌采集山西省陵川縣某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)病死仔豬的肝臟、脾臟為病料。

2 方法

2.1 病菌的鏡檢

將無(wú)菌采集的病料肝臟或脾臟直接壓片，用酒精燈加熱，使之干燥、固定，革蘭氏染色，顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

2.2 病菌的分離與培養(yǎng)

無(wú)菌條件下，將采集的病料肝臟或脾臟，劃線接種到血瓊脂平皿上，37 ℃下培養(yǎng)18～24 h；把培養(yǎng)后的單菌落接種于無(wú)菌的載玻片，均勻涂片、革蘭氏染色、鏡檢。挑取單個(gè)菌落劃線接種到沙門氏菌-志賀氏菌培養(yǎng)基，純化培養(yǎng)后，接種于馬丁肉湯，37 ℃下培養(yǎng)24 h。

2.3 生化鑒定檢測(cè)

用純化培養(yǎng)后的菌株進(jìn)行生化鑒定。試驗(yàn)項(xiàng)目有：V-P 試驗(yàn)、麥芽糖、衛(wèi)矛醇、靛基質(zhì)試驗(yàn)、山梨醇、菊糖、水楊苷、果糖、葡萄糖、肌醇、木糖、MR 試驗(yàn)、鼠李糖、H2S、半乳糖、乳糖、甘露醇和蔗糖等。

2.4 致病性測(cè)定

用生化鑒定后的菌株作致病性測(cè)定試驗(yàn)[1]。隨機(jī)將試驗(yàn)小白鼠（18～20 g/只）分成試驗(yàn)組和對(duì)照組兩組。兩組小鼠數(shù)量相等。每組接種5 只，采用腹腔注射的接種方法。試驗(yàn)組：每只接種0.2 mL（細(xì)菌含量5×108CFU/mL）馬丁肉湯培養(yǎng)后的菌液；對(duì)照組：每只注射0.2 mL 無(wú)菌馬丁肉湯培養(yǎng)基。兩組小鼠分開飼養(yǎng)，并觀察記錄小鼠狀況。對(duì)死亡的小鼠及時(shí)剖檢，7 d 后剖檢所有小鼠。采脾臟或肝臟作為病料，再次進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)。培養(yǎng)后鏡檢。

2.5 病菌血清型鑒定

對(duì)在生化鑒定試驗(yàn)中符合沙門氏菌特點(diǎn)的菌株進(jìn)行血清型鑒定。

用微量移液槍抽取20 μL 沙門氏菌多價(jià)診斷血清，置于一無(wú)菌載玻片上，再抽取20 μL 方法2.2 制備好的沙門氏菌培養(yǎng)液于多價(jià)血清中，用槍頭混勻后靜置2 min，觀察結(jié)果。如液滴中出現(xiàn)凝集，則鑒定為陽(yáng)性。為防止有自凝現(xiàn)象的發(fā)生，另用無(wú)菌生理鹽水替代多價(jià)血清和培養(yǎng)菌液反應(yīng)設(shè)為對(duì)照[2]。

若發(fā)生凝集，再用單因子鑒定血清代替多價(jià)血清重復(fù)這一步的操作，以確定菌株血清型。

2.6 菌株的藥敏試驗(yàn)

對(duì)血清型鑒定后的菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，試驗(yàn)方法為紙片法[3]。藥物有：環(huán)丙沙星、氨芐西林、慶大霉素、萘啶酸、阿米卡星、替卡西林、氧氟沙星、鏈霉素、阿莫西林/棒酸、頭孢噻呋、復(fù)方新諾明、頭孢曲松、諾氟沙星和卡那霉素等。

3 結(jié)果

3.1 分離與鑒定結(jié)果

結(jié)果見表1。經(jīng)鏡檢、分離、培養(yǎng)和生化鑒定后判斷該株病菌為沙門氏菌。

表1 病菌分離與鑒定結(jié)果

3.2 致病性測(cè)定結(jié)果

經(jīng)試驗(yàn)，在接種后39 h 有小鼠出現(xiàn)死亡，72h內(nèi)試驗(yàn)組小鼠全部死亡。對(duì)照組沒有發(fā)病、死亡情況。說(shuō)明該株沙門氏菌毒力高、致病性強(qiáng)。

剖檢病死小白鼠，發(fā)現(xiàn)肝、脾腫大，肝有壞死點(diǎn)，脾臟較硬。無(wú)菌采集肝臟后涂片、鏡檢；再次分離培養(yǎng)，然后鑒定。符合沙門氏菌特征。

3.3 測(cè)試菌血清型鑒定結(jié)果

經(jīng)玻片凝集反應(yīng)鑒定，確定該株沙門氏菌為鼠傷寒沙門氏菌。

3.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表2 可見，該株沙門氏菌對(duì)氧氟沙星、頭孢噻呋、頭孢曲松敏感；對(duì)阿米卡星、諾氟沙星和環(huán)丙沙星中敏；而對(duì)萘啶酸、氨芐西林、卡那霉素和復(fù)方新諾明等藥物耐藥。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

經(jīng)過試驗(yàn)，得知該豬場(chǎng)發(fā)生的豬副傷寒病的病原為鼠傷寒沙門氏菌。針對(duì)該株沙門氏菌做了致病力的測(cè)定，得出菌株毒力高、致病力強(qiáng)，這和本豬場(chǎng)仔豬高死亡率（高達(dá)23%）相符合。建議其豬場(chǎng)在仔豬副傷寒的預(yù)防上，采用自制疫苗的方法進(jìn)行免疫。

藥敏試驗(yàn)得知該株沙門氏菌對(duì)氧氟沙星、頭孢噻呋和頭孢曲松敏感。建議本豬場(chǎng)在治療仔豬副傷寒時(shí)優(yōu)先選用這三種藥物；少用或不用環(huán)丙沙星等作用一般的藥物；禁用氨芐西林、慶大霉素和復(fù)方新諾明等藥效差的藥物。試驗(yàn)后，該豬場(chǎng)采納了建議，預(yù)防和治療效果都很明顯。

總之，沙門氏菌血清型較多，致病性較強(qiáng)，所以在防治上就比較困難[4、5]。為避免盲目地預(yù)防與治療，建議養(yǎng)豬場(chǎng)先明確本場(chǎng)存在的沙門氏菌血清型，然后采用自制疫苗來(lái)預(yù)防仔豬副傷寒的發(fā)生。一旦發(fā)生本病，就要找出高效的藥物，并且嚴(yán)格、合理用藥來(lái)治療該病。同時(shí)，強(qiáng)化飼養(yǎng)管理，減少感染機(jī)會(huì)，這樣才能最大程度地控制豬沙門氏菌病在本場(chǎng)的流行，保證仔豬的成活率[6]?！?/p>