李 楠 張 焱 梁國(guó)艷 謝雙鋒 孫 武

中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院輸血科（廣東廣州 510000）

紅細(xì)胞不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteriher法則的血型抗體，也就是抗A、抗B以外的血型抗體，多次輸血、妊娠、移植等都可能導(dǎo)致不規(guī)則抗體的產(chǎn)生［1］。不規(guī)則抗體可能會(huì)影響患者血型結(jié)果判讀，導(dǎo)致交叉配血失敗，引發(fā)溶血性輸血不良反應(yīng)及胎兒或新生兒溶血病，嚴(yán)重時(shí)可危及患者生命，因此不規(guī)則抗體的篩查與鑒定具有重要的意義［2］。不規(guī)則抗體的出現(xiàn)頻率及其特異性抗體分布具有地區(qū)及種族的差異性［3］。了解本地區(qū)不規(guī)則抗體分布規(guī)律，對(duì)保證輸血安全有重要的意義。Rh血型系統(tǒng)是一種復(fù)雜的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，該系統(tǒng)中的不規(guī)則抗體在臨床上較為多見(jiàn)，具有重要的臨床價(jià)值［4］。我國(guó)2000年版《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》只要求輸血患者檢測(cè)ABO血型（正、反定型）和RhD抗原，對(duì)Rh血型系統(tǒng)另外四種主要抗原C、c、E、e無(wú)明確要求，由于我國(guó)人群中RhE、RhC、Rhe、Rhc的陰性頻率均高于RhD的陰性頻率［5］，患者輸血前如未進(jìn)行相關(guān)抗原檢測(cè)及配合性輸注，通過(guò)輸血的反復(fù)刺激，將會(huì)導(dǎo)致不規(guī)則抗體的產(chǎn)生，產(chǎn)生的抗體常會(huì)導(dǎo)致交叉配血困難及溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。本研究回顧性分析了廣州市一間三甲級(jí)綜合醫(yī)院2019年10月1日—2022年12月31日期間34 796例患者抗體篩查的結(jié)果，同時(shí)總結(jié)分析不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性患者的抗體分布及Rh抗原分布情況，總結(jié)其地域分布規(guī)律，為該地區(qū)輸血科日常工作提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

以2019年10月1日—2022年12月31日在中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院進(jìn)行抗體篩查的34 796例患者為研究對(duì)象，年齡0～99歲，其中男16 840例，女17 956例。本研究已通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并豁免患者個(gè)人知情同意書(shū) 。

1.2 試劑與儀器

主要試劑包括：微柱凝膠抗人球蛋白卡（達(dá)亞美有限責(zé)任公司），不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞試劑盒（達(dá)亞美有限責(zé)任公司），抗體鑒定譜細(xì)胞（匈牙利REAGENS公司），Rh分型卡（天津德祥生物技術(shù)有限公司），以上所需的實(shí)驗(yàn)試劑均檢驗(yàn)合格且在有效期內(nèi)。主要儀器有全自動(dòng)血型配血分析儀（伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品上海有限公司）、卡式專(zhuān)用離心機(jī)（伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品上海有限公司）、恒溫水浴箱（上海一恒科技有限公司）等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

對(duì)2019年10月1日—2022年12月31日中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院34 796例申請(qǐng)輸血患者的血樣使用全自動(dòng)血型配血分析儀進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。抗體篩查陽(yáng)性患者血樣外送至廣州市血液中心進(jìn)行抗體鑒定。不規(guī)則抗體的鑒定采用微柱凝膠卡手工法，使用譜細(xì)胞與待測(cè)血漿反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)格局判斷抗體類(lèi)型。Rh抗原的分型使用Rh抗原分型卡，將10 μL 3%待檢紅細(xì)胞懸液加入每柱中，然后使用專(zhuān)用離心機(jī)離心5 min后，判斷抗原分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析和處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分率（%）表述，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 237抗體篩查陽(yáng)性患者抗體類(lèi)型分析

34 796例患者中，不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性237例，陽(yáng)性率為0.68%。其中23例患者含有兩種抗體，故檢測(cè)到陽(yáng)性抗體數(shù)量為260例。紅細(xì)胞同種特異性抗體中，MNS血型系統(tǒng)抗體例數(shù)最高，為83例（占31.93%），其中抗-Mia檢出例數(shù)最多，有53例（占20.39%）；其次為Rh血型系統(tǒng)，抗體例數(shù)為70例（占26.93%），其中抗-E檢出例數(shù)最多，有54例；Lewis血型系統(tǒng)抗體有14例（占5.39%）；Kidd血型系統(tǒng)抗體有5例（占.92%）；P血型系統(tǒng)抗體有5例（占1.92%）。同種非特異性抗體共79例（占30.38%）。見(jiàn)表1。

表1 抗體篩查陽(yáng)性患者不規(guī)則抗體分布情況

2.2 抗體篩查陽(yáng)性患者Rh抗原分型結(jié)果

237例抗體篩查陽(yáng)性患者的Rh抗原分型結(jié)果見(jiàn)表2，其中抗原表型為CCDee的人數(shù)最多，為125例（占52.74%）；抗原表型為CcDEe有69例（占29.12%）。

表2 抗體篩查陽(yáng)性患者Rh抗原表型分布

2.3 不規(guī)則抗體產(chǎn)生的影響因素分析

對(duì)34 796例患者的一般情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較抗體篩查陽(yáng)性組與陰性組患者的性別、輸血史、妊娠史、年齡、血型構(gòu)成，結(jié)果顯示2組患者的性別、輸血史、妊娠史構(gòu)成比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2組患者的年齡、血型構(gòu)成比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性組與陰性組的一般情況比較［n（%）］

2.4 不同科室患者不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性率比較

不同科室抗體篩查陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=146.917，P＜0.01），風(fēng)濕免疫科與血液科是不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性率最高的科室。風(fēng)濕免疫科患者共檢出不規(guī)則抗體21例，其中5例為同種特異性抗體、16例為自身抗體。血液科患者共檢出不規(guī)則抗體68例，其中31例為同種特異性抗體，18例為自身抗體，抗CD38有14例，抗CD47有5例。見(jiàn)表4。

表4 不同科室間不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性率比較

3 討 論

本研究中共篩查出抗體陽(yáng)性的患者237例，陽(yáng)性率為0.68%，檢出不規(guī)則抗體共260例，其中有23例患者同時(shí)檢出2種抗體。檢出同種特異性抗體181例，其中MNS血型系統(tǒng)及Rh血型系統(tǒng)抗體占比最多，分別為31.93%及26.93%，與既往文獻(xiàn)報(bào)道一致［6-7］。檢出比例最高的抗體為抗-E，占20.77%，其次為抗-Mia，占20.39%；Lewis血型系統(tǒng)抗體占5.39%，Kidd、P、I、Kell、Duffy血型系統(tǒng)抗體均有檢出，但陽(yáng)性率較低。檢出同種非特異性抗體79例，占30.38%，其中自身抗體有59例，藥物相關(guān)性抗體有20例，主要為抗-CD38與抗-CD47。

Rh血型系統(tǒng)是繼ABO血型系統(tǒng)后最復(fù)雜，也是臨床意義最大的一種血型系統(tǒng)，Rh血型系統(tǒng)內(nèi)大概有50多種抗原，具有豐富的多態(tài)性［8］，與臨床密切相關(guān)的抗原主要有5種，其抗原性由強(qiáng)到弱依次為D＞E＞c＞C＞e［5］。行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中僅要求RhD抗原同型輸注，對(duì)E、e、C、c4種抗原并未有明確規(guī)定，輸血科日常工作中并未對(duì)受血者E、e、C、c抗原進(jìn)行分型及配合性輸注，導(dǎo)致許多受血者因上述抗原的不匹配產(chǎn)生不規(guī)則抗體，當(dāng)機(jī)體再次接觸相應(yīng)抗原時(shí)可誘發(fā)產(chǎn)生嚴(yán)重的溶血反應(yīng)。本研究中，檢測(cè)到Rh血型系統(tǒng)抗體共70例，占26.93%，其中僅1例為抗-D，抗-E有54例，占20.77%，其次為抗-cE，占3.46%，抗-Ce、抗-C均有檢出，該系統(tǒng)抗體所占比例較高，是疑難配血、免疫性溶血及新生兒溶血癥常見(jiàn)的原因，因此，實(shí)現(xiàn)RhD、C、c、E、e抗原相容性輸注，從源頭上降低因輸血產(chǎn)生不規(guī)則抗體的頻率，對(duì)臨床輸血工作有重要的意義［9］。由于實(shí)驗(yàn)室條件有限，本研究未對(duì)所有待輸血患者進(jìn)行Rh分型，僅對(duì)237例不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性的患者進(jìn)行了Rh分型及相容性輸注，分型結(jié)果顯示表型為CCDee占比最高，為52.74%；其次為CcDEe，占29.12%，CcDee表型占8.44%，與既往文獻(xiàn)報(bào)道一致［10-11］。本研究中，E抗原陰性的患者所占比例較高，有61.6%，再次說(shuō)明了抗-E容易產(chǎn)生，需要關(guān)注。孕母Rh血型不合也可引起胎兒發(fā)生嚴(yán)重的新生兒溶血病，一般從第二胎開(kāi)始發(fā)生，幾年來(lái)隨著二孩及三孩政策的開(kāi)放，Rh血型不合的新生兒溶血病占比出現(xiàn)上升趨勢(shì)，這也提示對(duì)妊娠期婦女及配偶進(jìn)行Rh血型系統(tǒng)的分析具有重要的臨床意義［12］。

MNS血型系統(tǒng)也是極具多態(tài)性的一種血型系統(tǒng)，其復(fù)雜程度僅次于Rh血型系統(tǒng)，表達(dá)至少46種抗原［13］。Miltenberger 系列是MNS 血型系統(tǒng)的1組變異型，該系列的表型及抗原在歐洲人群中分布頻率較低，但是在亞洲人群中較為常見(jiàn)，在我國(guó)呈現(xiàn)由北向南分布頻率增高的趨勢(shì)，以香港、福建和廣東地區(qū)出現(xiàn)頻率最高［14］，該血型系統(tǒng)所對(duì)應(yīng)的抗體主要為抗-Mia，該抗體常引起交叉配血不合、溶血性輸血反應(yīng)及新生兒溶血病的發(fā)生，對(duì)其進(jìn)行篩查有重要的臨床意義［15］。本研究中MNS血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體共檢出83例，占31.93%，其中抗-Mia，就有53例，數(shù)量較多，值得關(guān)注。隨著全球化的加速，國(guó)內(nèi)外各種族、地區(qū)人群的流動(dòng)、遷移，使抗-Mia的臨床意義得到了廣泛的關(guān)注［14］。然而，目前國(guó)內(nèi)市售的不規(guī)則抗體篩查細(xì)胞仍未包含Mia陽(yáng)性紅細(xì)胞，存在漏檢可能性，為保證輸血安全，抗體篩查譜細(xì)胞中增加Mia陽(yáng)性紅細(xì)胞顯得尤為重要［14］。

本研究進(jìn)一步分析表明，抗體篩查陽(yáng)性與患者性別、輸血史、妊娠史有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡和ABO血型無(wú)關(guān)（P＞0.05），女性、有輸血史、有妊娠史的患者更容易出現(xiàn)不規(guī)則抗體陽(yáng)性。異體輸血的患者接觸紅細(xì)胞異型抗原的概率高于無(wú)輸血史的患者［14］，接觸異型抗原的概率越大，產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率也就越大；女性患者在妊娠過(guò)程中，胎兒紅細(xì)胞可進(jìn)入母體循環(huán)，可能會(huì)刺激母體產(chǎn)生同種特異性不規(guī)則抗體，IgG類(lèi)型的抗體還能通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒體內(nèi)引起胎兒及新生兒溶血癥［16］。因此，對(duì)于女性、有輸血史、有妊娠史的患者，再次輸血時(shí)要嚴(yán)格執(zhí)行輸血前的抗體篩查，盡可能進(jìn)行Rh五種主要抗原相容性輸注。

不同科室之間抗體篩查陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其中風(fēng)濕免疫科與血液科患者不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性率最高。本研究顯示，風(fēng)濕免疫科患者同種非特異性抗體占比較高，自身抗體占76.19% ；同種特異性抗體占23.81%，風(fēng)濕免疫科患者多存在自身免疫功能紊亂，其產(chǎn)生自身抗體概率較高，自身抗體的存在可能會(huì)干擾血型鑒定結(jié)果、掩蓋同種特異性抗體的檢出、影響交叉配血試驗(yàn)的順利進(jìn)行，需認(rèn)真鑒別。血液科患者多伴有紅細(xì)胞計(jì)數(shù)下降、血紅蛋白含量降低，其輸注異體血的概率較高，產(chǎn)生同種特異性抗體的概率較大；近年來(lái)隨著分子靶向藥物的出現(xiàn)，抗-CD38與抗-CD47也開(kāi)始廣泛地應(yīng)用于惡性血液腫瘤，但這兩種藥物會(huì)對(duì)抗人球蛋白試驗(yàn)造成干擾，影響患者抗體篩查試驗(yàn)的結(jié)果，在臨床工作中需要謹(jǐn)慎進(jìn)行鑒別；自身免疫性溶血性貧血的患者體內(nèi)含有自身抗體，這些因素造成了血液科患者抗體篩查陽(yáng)性率較高。

綜上所述，輸血前進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)不規(guī)則抗體情況，尤其是對(duì)多次輸血或有妊娠史的患者，能降低患者輸血不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，提高輸血治療效果。國(guó)內(nèi)輸血僅要求檢測(cè)ABO血型和RhD血型，對(duì)Rh系統(tǒng)其他抗原無(wú)檢出要求，這使多次輸血患者及孕婦容易發(fā)生不規(guī)則抗體引起的溶血性輸血反應(yīng)。因此，輸血前不規(guī)則抗體篩查及Rh血型系統(tǒng)相容性輸注，對(duì)保障臨床輸血安全具有重要意義。