管悅，泮燕媚

（仙居縣食品藥品檢驗檢測中心，浙江臺州 317300）

水果配制酒是以白酒為酒基，加入水果浸泡、配制而成的具有獨特水果風味的酒，其使用的水果原料有楊梅、桃子、桑葚等。在果樹種植過程中，會使用農(nóng)藥來防治病蟲害，殘留在水果中的農(nóng)藥便會在浸泡過程中遷移至酒里，從而產(chǎn)生飲用風險。發(fā)酵酒的釀造過程中有發(fā)酵、澄清的步驟，可通過微生物的表面吸附[1]、酶促作用[2-3]以及澄清劑的吸附作用[4-5]，將大部分的殘留農(nóng)藥去除或降解；而水果配制酒沒有發(fā)酵、澄清等步驟，農(nóng)藥殘留風險則更大，繼而對人體健康的潛在威脅更大。

農(nóng)藥種類繁多，其不合理的使用可能導致癌癥、呼吸系統(tǒng)疾病及腎臟疾病等[6-7]。目前，國內(nèi)關(guān)于酒中農(nóng)藥殘留檢測的研究報道較少，主要使用的檢測方法是液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[8]或氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9]，檢測對象多為低度水果發(fā)酵酒及白酒[10-11]。GB 23200.14—2016《果蔬汁和果酒中512 種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜法》[12]規(guī)定了果酒中農(nóng)藥殘留檢測的液相色譜-質(zhì)譜方法，樣品處理方法為固相萃取，操作復雜，耗時長。王春利等[13]采用氣相色譜-質(zhì)譜法檢測白酒中的10種農(nóng)藥殘留，何開蓉等[14]采用液相色譜-質(zhì)譜法對白酒中氨基甲酸酯類農(nóng)藥進行檢測，兩者的方法均無凈化步驟，只適用于基質(zhì)較為干凈的白酒，并不適用于水果配制酒。筆者采用氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜(GCMS/MS)法，并結(jié)合分散固相萃取法對樣品進行處理，同時測定水果配制酒中30 種農(nóng)藥殘留量，為掌握水果配制酒中的農(nóng)藥殘留情況及風險評估提供技術(shù)支持。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：Agilent7890B+7000C型，美國Agilent公司。

多管渦旋混勻器：Multi Reax 型，德國Heidolph公司。

高速冷凍離心機：Multifuge XⅠR 型，賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

電子天平：ML3002T型，感量為0.01 g，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

氯化鈉、無水硫酸鎂：均為分析純，國藥集團化學試劑有限公司。

乙腈、乙酸乙酯、正己烷：均為色譜純，美國TEDⅠA公司。

石墨化炭黑（GCB）、乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）：上海安譜實驗科技有限公司。

GCB-NH2柱： 500 mg/(6 mL)，納譜分析技術(shù)（蘇州）有限公司。

30種農(nóng)藥標準溶液：含有敵敵畏、治螟磷、甲拌磷、特丁硫磷、抗蚜威、莠滅凈、殺螟硫磷、馬拉硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、嘧菌環(huán)胺、戊菌唑、腐霉利、殺撲磷、腈菌唑、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、異菌脲、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯苯嘧啶醇、氯氟氰菊酯、氯菊酯、噠螨靈、腈苯唑、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、苯醚甲環(huán)唑，質(zhì)量濃度均為100 μg/mL，溶劑為乙酸乙酯，天津阿爾塔公司。

環(huán)氧七氯標準溶液：100 μg/mL，溶劑為乙酸乙酯，天津阿爾塔公司。

楊梅配制酒、桃子配制酒、桑葚配制酒樣品：市售。

1.2 標準溶液的配制

30種農(nóng)藥系列混合標準工作溶液：精確吸取30種農(nóng)藥標準品適量于同一只容量瓶中，用乙酸乙酯逐級稀釋成各組分質(zhì)量濃度均分別為5、10、50、100、200 ng/mL 的系列混合標準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

內(nèi)標儲備溶液：10 μg/mL，精確吸取環(huán)氧七氯標準溶液100 μL 于1 mL 容量瓶中，用乙酸乙酯定容至標線，于0～4 ℃保存。

1.3 樣品的制備及處理

取混勻后的酒樣品10 g，加入氯化鈉約2.5 g，分別以乙腈-乙酸乙酯（體積比為1∶1，下同）混合溶液10、5 mL 振蕩提取2 次，每次5 min，以5 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心3 min，合并兩次上清液于25 mL 容量瓶中，并用乙腈-乙酸乙酯（1∶1）溶液定容至標線，作為樣品提取液；取樣品提取液7 mL，置于盛有1 200 mg 無水硫酸鎂、150 mg PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）和15 mg GCB（石墨化炭黑）的15 mL 離心管中，渦旋振蕩1 min，以5 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心3 min，取上清液5 mL，于45 ℃水浴中氮吹至近干，加入內(nèi)標儲備溶液10 μL、乙酸乙酯0.5 mL 復溶，作為樣品溶液，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過到進樣小瓶中測定。

1.4 儀器工作條件

1.4.1 色譜儀

色譜柱：HP-5 毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫公司）；升溫程序：起始溫度為70 ℃，保持2 min，以25 ℃/min 升溫至150 ℃，再以3 ℃/min 升 溫 至200 ℃，再 以8 ℃/min 升 溫 至280 ℃，保持5 min；載氣：氦氣，純度不低于99.999%，流量為1 mL/min；進樣口溫度：270 ℃；進樣體積：1 μL；進樣模式：不分流進樣。

1.4.2 質(zhì)譜儀

電子轟擊離子源（EⅠ）；電子能量：70 eV；離子源溫度：280 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；四級桿溫度：150 ℃；溶劑延遲：4.5 min；多反應監(jiān)測采集模式（MRM）。30 種農(nóng)藥色譜保留時間及質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 環(huán)氧七氯與30種農(nóng)藥色譜保留時間及質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

不同的提取溶劑，對酒樣品中農(nóng)藥的提取效果有顯著影響?？疾炝? 種常用的提取溶劑正己烷、乙腈、乙酸乙酯、乙腈-乙酸乙酯（1∶1，體積比，下同）對酒樣品中農(nóng)藥的提取率。取空白酒樣品加標，加標質(zhì)量分數(shù)為10 μg/kg，除提取溶劑不同外，其余處理步驟同1.3。試驗結(jié)果表明，分別采用正己烷、乙腈、乙酸乙酯、乙腈-乙酸乙酯（1∶1）提取時，30種農(nóng)藥的回收率分別為23.5%～75.6%、80.2%～109.7%、74.8%～117.3%、85.5%～108.9%。其中以乙腈-乙酸乙酯（1∶1）提取效果最佳；乙腈提取效果次之，但乙腈氮吹所需時間較長；乙酸乙酯對部分農(nóng)藥如抑霉唑、殺撲磷等，提取效果不及乙腈-乙酸乙酯（1∶1）和乙腈；正己烷提取效果不佳，尤其是極性較強的農(nóng)藥如敵敵畏、殺撲磷等有機磷農(nóng)藥，回收率不理想。綜合考慮，選擇乙腈-乙酸乙酯（1∶1）作為提取溶劑。

2.2 凈化方式的選擇

水果配制酒中可能含有有機酸、糖類、色素等成分，對分析結(jié)果會產(chǎn)生干擾。分別選擇3 種不同的樣品處理方式進行空白樣品加標回收試驗，加標質(zhì)量分數(shù)為10 μg/kg，以此考察基質(zhì)成分對檢測結(jié)果的干擾程度及凈化效果。3 種樣品處理方式分別為：不凈化、分散固相萃取凈化和固相萃取凈化。不凈化：省略凈化步驟，其余提取、濃縮等操作同1.3；分散固相萃取凈化同1.3；固相萃取凈化：參照GB 23200.113—2018[15]中固相萃取處理步驟操作。

試驗結(jié)果表明，不凈化、分散固相萃取凈化、固相萃取凈化三種樣品處理方式對應的30 種農(nóng)藥殘留的回收率分別為43.7%～123.5%、86.0%～109.1%、85.3%～108.4%。不凈化方式下30 種農(nóng)藥殘留的回收率明顯偏低，受基質(zhì)影響較為嚴重；分散固相萃取凈化與固相萃取凈化相比較，兩者的回收率無明顯差異，但前者比后者減少了過柱、旋蒸等耗時長的步驟，操作更為簡單，綜合考慮，最終選擇分散固相萃取凈化。

2.3 基質(zhì)效應的考察

基質(zhì)效應在農(nóng)藥殘留檢測中普遍存在。以基質(zhì)混合校準曲線斜率與乙酸乙酯配制的標準曲線斜率比值為參數(shù)，對農(nóng)藥的基質(zhì)效應進行考察[16]。比值越接近1，說明校準溶液與標準溶液的響應越相近，基質(zhì)效應越弱，反之越強。

試驗結(jié)果表明，30 種農(nóng)藥的基質(zhì)效應比值為1.08～1.82，除異菌脲等少數(shù)農(nóng)藥外，其余如有機磷類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥等均呈現(xiàn)較強的基質(zhì)增強效應。為消除基質(zhì)對目標物檢測的干擾，確保分析結(jié)果的準確性，實驗采用基質(zhì)混合系列標準工作溶液制作校準曲線。

2.4 環(huán)氧七氯及30種農(nóng)藥總離子流圖

取空白樣品按1.3 步驟提取、凈化并氮吹至近干，加入環(huán)氧七氯及30 種混合農(nóng)藥標準溶液復溶，即基質(zhì)混合標準溶液，各成分的質(zhì)量濃度均為200 μg/L，按1.4儀器工作條件上機分析，總離子流色譜圖如圖1。

圖1 環(huán)氧七氯及30種農(nóng)藥基質(zhì)混合標準溶液總離子流色譜圖

30 種農(nóng)藥中，菊酯類化合物同分異構(gòu)體較多，腈苯唑、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯色譜保留時間接近，總離子流圖中有部分峰重疊，但依據(jù)不同的質(zhì)譜碎片離子可以分別進行定性、定量，4種化合物提取定量離子色譜圖如圖2。

圖2 腈苯唑、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯提取離子色譜圖

由圖1、圖2 可知，30 種農(nóng)藥出峰完整且峰形基本對稱，無明顯拖尾，儀器色譜、質(zhì)譜條件可以滿足定量分析需求。

2.5 線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

取空白樣品按1.3 方法進行處理，氮吹至近干后，加入環(huán)氧七氯內(nèi)標儲備液10 μL、再分別加入1.2 中所述系列標準工作溶液0.5 mL 復溶，即基質(zhì)混合系列標準工作溶液，在1.4的儀器工作條件下上機分析。以農(nóng)藥定量離子峰面積和內(nèi)標物定量離子峰面積的比值為縱坐標、農(nóng)藥標準溶液質(zhì)量濃度和內(nèi)標物質(zhì)量濃度的比值為橫坐標，以最小二乘法繪制標準工作曲線，計算線性方程和相關(guān)系數(shù)，30 種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度線性范圍均為5～200 μg/L。以定量離子對離子豐度信噪比為3∶1時對應的質(zhì)量濃度為檢出限，10∶1時對應的質(zhì)量濃度為定量限。30種農(nóng)藥的線性關(guān)系、線性相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見表2。

表2 30種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限

由表2可知，30種化合物在5～200 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.998，滿足定量分析要求。

2.6 樣品加標回收試驗

取空白楊梅配制酒、桃子配制酒、桑葚配制酒樣品10 g，分別添加1.25、5、25 μg/kg 的3 個不同濃度水平的農(nóng)藥標準溶液，每個濃度水平均配制6 個平行樣品，按1.3方法進行處理，分別測定并計算回收率，結(jié)果見表3。由表3可知，30種農(nóng)藥平均回收率為84.2%～110.7%，測定結(jié)果的相對標準偏差為0.8%～6.3%，表明該方法準確度、精密度均可滿足水果配制酒中30種農(nóng)藥殘留量的定量分析要求。

表3 30種農(nóng)藥的樣品加標回收試驗結(jié)果(n=6)

2.7 實際樣品檢測結(jié)果

以上述建立的方法，對20批次市售水果配制酒中的30 種農(nóng)藥殘留進行檢測。其中，戊唑醇檢出3批，含量分別為2.35、5.64、102.75 μg/kg，苯醚甲環(huán)唑2 批，含量分別為3.20、4.53 μg/kg，肟菌酯檢出1批，含量為4.21 μg/kg，其余農(nóng)藥均未檢出。國標GB 2763—2021[17]中并未制定酒中農(nóng)藥的最大殘留限量值，無法對檢出的3種農(nóng)藥做出判定，其膳食攝入風險還需進一步研究。

3 結(jié)語

將GC-MS/MS法與分散固相萃取相結(jié)合，并通過優(yōu)化樣品處理方法及驗證性實驗，建立了水果配制酒中30 種農(nóng)藥殘留的檢驗方法，線性關(guān)系、回收率及精密度等均能滿足農(nóng)藥殘留定量分析要求。與GB 23200.14-2016[12]的液相色譜-質(zhì)譜法相較，去除了固相萃取、旋蒸等繁瑣操作，節(jié)約了時間與人力成本；與王春利等[13]建立的氣相色譜-質(zhì)譜法相較，增加了凈化步驟，可以適用于基質(zhì)相對復雜的樣品，有利于保持儀器性能穩(wěn)定。該研究建立的方法操作簡單、數(shù)據(jù)準確，可作為水果配制酒中30 種農(nóng)藥殘留的定量檢測方法。