盧甲林, 袁 萍, 孫 軍*

(1)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院第一臨床學(xué)院, 武漢 430000;2)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系, 武漢 430000)

肺癌是目前中國最高發(fā)、最高死亡率的惡性腫瘤[1]。其中,非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)發(fā)病率約占全部肺癌的85%[2]。一項(xiàng)基于美國癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)庫和SEER-18數(shù)據(jù)庫的統(tǒng)計(jì)分析顯示,NSCLC患者IIIA期、IIIB期和IV期的5年生存率分別僅為26.2%、17.3%和5.5%[3],這表明,現(xiàn)有的治療方案并不完全令人滿意:手術(shù)方案受腫瘤分期和其他因素限制[4];放化療針對某些類型的肺癌細(xì)胞選擇性差,敏感度低,且患者易產(chǎn)生較強(qiáng)不良反應(yīng);分子靶向治療僅針對特定基因突變的患者,且極易產(chǎn)生耐藥性,需頻繁更換藥物[5];免疫療法不僅非普適、有效率不高、產(chǎn)生過度免疫反應(yīng)[6],且免疫學(xué)本身也存在許多未解決的問題。因此,開發(fā)治療晚期腫瘤的新療法至關(guān)重要。

康提尼·巴黎塔的伊莎拉酒莊建立于2012年，由印度尼西亞人和意大利人合伙經(jīng)營。除了瓦利爾慕斯卡特和阿方斯萊弗寧，酒莊還種植了黑瑪爾維薩和西拉。目前，酒莊僅釀造3款酒：伊莎拉莫斯卡托白葡萄酒、伊莎拉桃紅葡萄酒和伊莎拉紅葡萄酒。

自1904年《The Lancet》報(bào)道一位患有慢性白血病的婦女在一次流感病毒感染后,出現(xiàn)病變的白細(xì)胞數(shù)減少、病情意外好轉(zhuǎn)的現(xiàn)象,溶瘤病毒(oncolytic virus, OV)逐漸進(jìn)入學(xué)界視野。20世紀(jì)50年代,開始利用變異后的西尼羅河病毒和腺病毒的天然弱毒株對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行治療研究,標(biāo)志著溶瘤病毒療法正式登上歷史舞臺(tái)。研究發(fā)現(xiàn),OV是一類可以特異性針對和摧毀腫瘤細(xì)胞,但基本不損害正常細(xì)胞的高效腫瘤殺傷性病毒,將其應(yīng)用于腫瘤治療領(lǐng)域具有極其廣闊的前景。OV通過利用腫瘤細(xì)胞內(nèi)部基因突變或代謝重編程等途徑實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的選擇性感染,進(jìn)而在腫瘤細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制以裂解靶細(xì)胞,或激發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)間接實(shí)現(xiàn)殺傷腫瘤的目的。OV所含基因可被人工改造,例如加入細(xì)胞毒素或者免疫調(diào)節(jié)分子,從而給其帶來新的特性以滿足學(xué)界更高的需要。然而,OV的單一治療方式仍僅限于少數(shù)患者,其局限性包括阻礙病毒感染、復(fù)制和在腫瘤組織內(nèi)擴(kuò)散的物理和免疫屏障[7]。因此,將OV聯(lián)合放化療、靶向療法、免疫療法治療NSCLC可實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢互補(bǔ),在改善NSCLC患者病情和提高生存率方面具有較高的可行性。綜上,本文介紹了關(guān)于OV的相關(guān)內(nèi)容及其治療NSCLC的研究進(jìn)展及其應(yīng)用前景。

根據(jù)榆林市礦區(qū)的第四系含水層水質(zhì)全分析結(jié)果，利用單因子污染評價(jià)法將各評價(jià)指標(biāo)的實(shí)測濃度與標(biāo)準(zhǔn)值(GB/T 14848—1993)進(jìn)行逐項(xiàng)對比，從中選取樣品中超標(biāo)較多的項(xiàng)目作為評價(jià)指標(biāo)，最終選取硫酸鹽(SO2-4)、亞硝酸鹽(NO-2)、硝酸鹽(NO-3)、總硬度和溶解性總固體(TDS)共5項(xiàng)超標(biāo)較嚴(yán)重的指標(biāo)作為評價(jià)指標(biāo)。

1 溶瘤病毒的分類及其溶瘤的機(jī)制

學(xué)界進(jìn)行研究的溶瘤病毒不僅種類繁多,而且其作用機(jī)制、位點(diǎn)各不盡相同。但總體而言,可將其分類與溶瘤機(jī)制總結(jié)歸納如下。

1.1 溶瘤病毒的分類

OV主要分為2種:天然病毒和轉(zhuǎn)基因病毒。對NSCLC存在特異性作用的天然OV包括呼腸孤病毒(reoviruses)[8]、新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)[9]和腸病毒[10]等。除此之外,現(xiàn)有研究的大多數(shù)OV都經(jīng)過基因修飾,以提高病毒的選擇性復(fù)制和溶細(xì)胞能力、增加病毒對腫瘤細(xì)胞的靶向性、增強(qiáng)人體的抗腫瘤免疫反應(yīng)等。在有關(guān)NSCLC的研究中,常見的基因修飾病毒包括腺病毒(adenovirus, AdV)[11]、柯薩奇病毒(coxsackievirus, CV)[10]、水皰性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)[12]、痘苗病毒(vaccinia virus, VV)[13]等?；趯W(xué)界對AdV基因組結(jié)構(gòu)和感染特性的相對了解,以及AdV具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性,因此,現(xiàn)有研究和臨床研究均以重組溶瘤AdV為材料居多。OV常見改造策略見Table 1。

1.2 溶瘤病毒溶瘤的機(jī)制

現(xiàn)有OV治療NSCLC的研究主要使用異種移植人NSCLC的小鼠模型或離體細(xì)胞系。主要研究方向分為單獨(dú)使用野生OV或重組OV殺滅腫瘤、聯(lián)合用藥以及OV活體內(nèi)的靶向運(yùn)輸問題。

Table 1 Common recombination strategies for OV

2 溶瘤病毒治療非小細(xì)胞肺癌的熱點(diǎn)研究方向及其進(jìn)展

OV實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的靶向性殺傷功能簡言之主要通過以下數(shù)種途徑:(1)溶瘤病毒針對腫瘤細(xì)胞表面受體的靶向作用: OV受體蛋白質(zhì)為某些腫瘤細(xì)胞表面所特異性表達(dá)或高表達(dá),這為OV特異性侵入腫瘤細(xì)胞提供了條件。例如,肺癌和膀胱癌等惡性腫瘤,均高表達(dá)細(xì)胞內(nèi)黏附分子-1 (intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)[14 15],柯薩奇病毒A21(CVA21)能夠以此為特異性受體[16 17],進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對惡性腫瘤細(xì)胞的天然趨向性。(2)溶瘤病毒針對腫瘤細(xì)胞特定信號通路:細(xì)胞癌變后胞內(nèi)信號通路多發(fā)生改變,經(jīng)過基因修飾后的OV能對這些信號通路特異性作用,而對正常組織細(xì)胞中的正常通路無作用,從而實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞生長增殖的抑制作用。例如,大多數(shù)腫瘤細(xì)胞缺乏促進(jìn)細(xì)胞凋亡的雙鏈RNA依賴的蛋白質(zhì)激酶(double stranded RNA-dependent protein kinase, PKR)通路,而該通路亦會(huì)促進(jìn)宿主細(xì)胞的抗病毒反應(yīng);1型單純皰疹病毒(herpes simplex virus-1, HSV-1)的IPC34.5基因,在阻斷宿主細(xì)胞抗病毒先天免疫蛋白激酶R-干擾素(PKR-IFN)途徑中發(fā)揮重要作用;因此,使得ICP34.5缺失的HSV(T-VEC)對癌細(xì)胞更具選擇性[18]。(3)溶瘤病毒增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng):病毒的直接溶瘤效果使得腫瘤細(xì)胞內(nèi)各種免疫源性物質(zhì)釋放,激活或者增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng);基因工程編輯后的OV亦使腫瘤細(xì)胞表達(dá)某些增強(qiáng)免疫反應(yīng)的產(chǎn)物,間接實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。例如:經(jīng)過基因工程改造以表達(dá)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM—CSF),或白細(xì)胞介素的NDV可以增加先天效應(yīng)細(xì)胞例如抗原呈遞細(xì)胞的募集[19 20]。(4)溶瘤病毒可通過旁觀者效應(yīng)間接殺傷未被感染的腫瘤細(xì)胞:研究發(fā)現(xiàn),某些腫瘤細(xì)胞并未被OV感染,但卻同樣可以受到抑制作用。例如:在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,人肺癌A549細(xì)胞系被一種CD3和腫瘤細(xì)胞表面抗原EphA2重組而成的VV感染后,不僅被病毒感染的細(xì)胞出現(xiàn)壞死,還可誘導(dǎo)對未感染的腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用,即旁觀者效應(yīng)[21]。

2.1 溶瘤病毒單獨(dú)發(fā)揮溶瘤作用

溶瘤痘苗病毒(oncolytic vaccinia virus, OVV)除直接殺傷肺癌細(xì)胞外,其抗原部位還誘導(dǎo)T細(xì)胞向肺方向的募集和腫瘤浸潤,但其誘導(dǎo)T細(xì)胞上的PD-1和TIM-3以及腫瘤細(xì)胞PD-1和TIM-3配體的過表達(dá)阻礙了T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用,因此,OVV聯(lián)合免疫藥物PD-1抑制劑和TIM-3抑制劑能完全發(fā)揮T細(xì)胞活性,達(dá)到殺傷肺癌細(xì)胞的目的[43]。低致病性流感病毒IAV感染不僅產(chǎn)生顯著的原發(fā)性病毒誘導(dǎo)的溶瘤作用,而且還使得腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 (tumor-associated macrophage, TAM) 發(fā)生功能性逆轉(zhuǎn),甚至產(chǎn)生額外的抗癌活性;NSCLC以及TAM和T細(xì)胞過表達(dá)PD-L2/PD-1和B7-H3信號軸中的免疫檢查點(diǎn)分子(immune checkpoint, IC),以此逃避細(xì)胞免疫反應(yīng),部分NSCLC可能對免疫檢查點(diǎn)抑制劑(immune checkpoint inhibitor, ICI)類藥物產(chǎn)生耐藥性,有研究表明,IAV和B7-H3 抑制劑對ICI耐藥的NSCLC具有協(xié)同抗腫瘤功效[44]。綜合前述PD-1抑制劑、TIM-3抑制劑和B7-H3 抑制劑等各種ICI與OV的聯(lián)合應(yīng)用思路,推測OV聯(lián)合各種ICI治療NSCLC具有廣闊的研究與應(yīng)用前景。

另外,聯(lián)合化療藥物克服病毒治療耐藥的研究也廣泛開展。有些腫瘤Ⅰ型干擾素通路存在激活或部分激活現(xiàn)象,這導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞對病毒治療的耐藥性,聯(lián)合化學(xué)藥物則能克服,將JAK/STAT抑制劑ruxolitinib與重組水皰性口炎病毒(VSV-IFNβ)聯(lián)合使用,可以增強(qiáng)VSV-IFNβ對NSCLC的治療[37]。又如,溶瘤性副流感病毒感染引起的干擾素-β合成是溶瘤過程中的不利因素,組蛋白去乙?；敢种苿├鐂criptaid,通過阻斷干擾素調(diào)節(jié)因子3的磷酸化和核易位來抑制干擾素-β的產(chǎn)生,同時(shí)增強(qiáng)細(xì)胞質(zhì)復(fù)制型副流感病毒突變體P/V-CPI的NSCLC細(xì)胞殺傷作用;研究表明,Scriptaid還增強(qiáng)了另外兩種負(fù)鏈 RNA 病毒: 拉克羅斯病毒和VSV對NSCLC細(xì)胞的殺傷作用[38]。

其他方面的聯(lián)合用藥研究,例如三甲基腺嘌呤聯(lián)合VSV[39]、NF-κB信號通路抑制劑PS1145聯(lián)合溶瘤麻疹病毒疫苗株[40]、MEK抑制劑Trametinib聯(lián)合溶瘤單純皰疹病毒[41]等,均在以A549和H1299細(xì)胞系為主的肺腺癌溶瘤研究中表現(xiàn)出高效的溶瘤效果。與化療藥物或靶向藥物聯(lián)合應(yīng)用顯著拓展了OV的范疇與作用效果,使得學(xué)界對OV療法的認(rèn)知與研究進(jìn)入新的階段。

對于某些溶瘤效果尚不理想或有待改進(jìn)的病毒,則通過基因重組技術(shù)對其進(jìn)行修飾。(1)重組后的OV影響腫瘤細(xì)胞表型使之轉(zhuǎn)為免疫敏感型:例如Ixovex-1,一種在 E1B-93R 3'剪接受體位點(diǎn)攜帶單點(diǎn)突變的新型溶瘤 E1B 蛋白突變腺病毒,通過提高E1B-156R蛋白表達(dá)來取代496 R的表達(dá),而后者可與Ⅰ型干擾素途徑和p53 途徑相互作用,從而抑制腫瘤免疫反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[30]。(2)重組后的OV可以表現(xiàn)出更高水平的溶瘤作用。例如,離體細(xì)胞和小鼠體內(nèi)研究均表明,表達(dá)p14融合相關(guān)小跨膜(fusion-associated small transmembrane, FAST)蛋白質(zhì)的條件復(fù)制人腺病毒 (conditionally replicating human adenovirus, CRHAdV)可增強(qiáng)對A549的殺傷與抑制增殖效應(yīng),因?yàn)閜14 FAST蛋白介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞融合,會(huì)增強(qiáng)病毒殺傷效應(yīng)的傳播[31]。這也有效克服了CRHAdV不能有效擴(kuò)散到整個(gè)腫瘤團(tuán)塊中這一問題?；蛑亟M技術(shù)的進(jìn)步使得研究針對癌細(xì)胞突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)靶向治療成為可能。(3)重組后的OV能獲得更強(qiáng)的靶向性:腫瘤細(xì)胞發(fā)生代謝重編程,糖酵解加劇并以此供能實(shí)現(xiàn)增殖。據(jù)此,有研究者設(shè)計(jì)出表達(dá)Ad-凋亡素的重組溶瘤腺病毒(oncolytic adenovirus, OAdV),以此靶向作用于AMPK,并通過AMPK/mTOR信號通路抑制NSCLC細(xì)胞的糖酵解、遷移和侵襲[32]。(4)重組的OV具有更為可靠的安全性:AdV在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制會(huì)激活TP53介導(dǎo)的凋亡通路。野生型AdV基因組的E1B區(qū)域編碼一個(gè)結(jié)合并滅活TP53的蛋白質(zhì)E1B-55K,因此,缺失E1B-55K的AdV不能在TP53功能正常的細(xì)胞內(nèi)有效復(fù)制,而在TP53基因突變、缺失或功能失活的腫瘤細(xì)胞內(nèi)卻能大量復(fù)制并裂解殺傷細(xì)胞。

2.2 溶瘤病毒聯(lián)合化學(xué)藥物發(fā)揮溶瘤作用

將OV與化學(xué)藥物聯(lián)合使用,存在協(xié)同作用或克服化療耐藥。順鉑通過增強(qiáng)嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)表達(dá),增加某種條件復(fù)制腺病毒(conditionally replicating adenovirus, CRAdV)轉(zhuǎn)導(dǎo)和增加肺癌細(xì)胞系H23、H2126的p53依賴性或非依賴性凋亡來協(xié)同增加CRAdV的腫瘤殺傷力;除此之外,由于順鉑使CAR水平上調(diào),CRAdV對于順鉑產(chǎn)生耐藥的肺癌細(xì)胞H23/CPR、H2126/CPR也具有抗腫瘤作用[33]。同樣對于紫杉醇而言,與包裹在細(xì)胞外囊泡制劑中的OAdV聯(lián)合用藥與單獨(dú)的病毒和紫杉醇相比,在體外和體內(nèi)顯著增加了轉(zhuǎn)導(dǎo)率和感染力[34],這可能與EV的靶向遞送和病毒促進(jìn)腫瘤局部炎癥反應(yīng)相關(guān)[35]。另有新型重組OAdV Ad-hTERTp-E1a-Apoptin,可以增強(qiáng)化療耐藥的肺腺癌細(xì)胞對吉西他濱和紫杉醇的敏感性[36]。這些研究無疑為大量的化療藥物不敏感型患者帶來了福音。

隨著病毒基因重組技術(shù)的發(fā)展,OV研究已經(jīng)從早期廣譜篩查野生型病毒發(fā)展到人工重組病毒來滿足學(xué)界對OV的各種期待。

Research on Big Data Analysis Laboratory Construction_________________________________YANG Liqun 78

作為中華五千年優(yōu)秀文化的重要組成部分，源遠(yuǎn)流長的酒文化不僅是我們的驕傲，也是吸引海外消費(fèi)者主動(dòng)嘗試、接納中國白酒的關(guān)鍵所在。中國白酒的原料選取、釀造工藝、種類劃分、品評品鑒，乃至由酒衍生出來的文學(xué)作品和典故，無一不具有深厚的歷史淵源、典型的民族文化特征。對此，應(yīng)當(dāng)從國家層面出發(fā)，由省級、國家級政府部門以及行業(yè)協(xié)會(huì)等牽頭，做好白酒文化推廣的頂層設(shè)計(jì)，通過外交、紀(jì)錄片、文化交流、藝術(shù)表演等多樣化的渠道和形式，講好中國白酒的歷史傳承與動(dòng)人故事。

2.3 溶瘤病毒聯(lián)合免疫療法發(fā)揮溶瘤作用

NSCLC建立了支持癌細(xì)胞生長的高度免疫抑制性腫瘤微環(huán)境,從而使得人體原有的免疫系統(tǒng)無從下手。激活機(jī)體自身免疫系統(tǒng)殺滅腫瘤為當(dāng)今不斷探索的免疫療法方向之一。

為了增強(qiáng)OV向腫瘤組織的遞送效率,數(shù)年前已經(jīng)存在的研究包括:(1)通過添加聚乙二醇(PEG)聚合物修飾病毒衣殼,以降低免疫原性并增加血液循環(huán)時(shí)間;但這種方法也導(dǎo)致病毒傳染性顯著降低[49];(2)使用藥物載體系統(tǒng)例如脂質(zhì)體,以增加OV的腫瘤特異性轉(zhuǎn)導(dǎo)[50];(3)OV可以通過腫瘤微粒選擇性地遞送到腫瘤細(xì)胞中進(jìn)行病毒治療[51]。

部分未經(jīng)改造的野生型病毒可以在不破壞正常細(xì)胞的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)很好的溶瘤效果,主要通過癌細(xì)胞特異性的代謝通路實(shí)現(xiàn)。有研究表明,野生型NDV對體外肺腺癌A549細(xì)胞系和皮下異種移植NSCLC的重度聯(lián)合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency disease, SCID)小鼠的腫瘤細(xì)胞,均發(fā)揮特異性殺傷和抑制增殖的作用,NDV包膜內(nèi)表面的M蛋白能促進(jìn)NSCLC胞內(nèi)p38-MAPKs的激活,進(jìn)而誘發(fā)A549細(xì)胞的凋亡,同時(shí)通過研究證明,該種NDV對健康的外周血單個(gè)核細(xì)胞未見影響[22]。自發(fā)發(fā)展為 NSCLC 的Raf-BxB轉(zhuǎn)基因小鼠Raf通路的激活,使甲型流感病毒(influenza A virus, IAV)復(fù)制能力顯著增強(qiáng)[23],進(jìn)而消除大部分的初始腫瘤;在免疫系統(tǒng)方面,Raf-BxB小鼠的IAV感染會(huì)造成免疫抑制的腫瘤相關(guān)肺巨噬細(xì)胞逆轉(zhuǎn)為M1樣促炎活性表型巨噬細(xì)胞這一功能性轉(zhuǎn)變,這同樣促進(jìn)了病毒誘導(dǎo)的免疫細(xì)胞溶瘤作用[24]。雖然IAV在人體正常細(xì)胞內(nèi)因無Raf等通路的激活不會(huì)大量復(fù)制,但其低毒性同樣是之后臨床研究需要克服的難題。又如柯薩奇病毒B3型(coxsackievirus B3, CVB3)優(yōu)先感染和裂解活躍分裂的細(xì)胞而非靜止細(xì)胞[25],肺癌細(xì)胞內(nèi)激活的致癌信號通路創(chuàng)造了一個(gè)適宜病毒復(fù)制微環(huán)境;CVB3的感染還受到I型干擾素(interferon α, IFNα)的顯著抑制,干擾素信號完整的正常細(xì)胞比干擾素信號受損的肺癌細(xì)胞更能抵抗CVB3的感染[26]。據(jù)此,有研究證明,KRAS突變肺腺癌細(xì)胞中細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2的異常激活和I型干擾素免疫反應(yīng)受損,是CVB3針對肺腺癌細(xì)胞毒性敏感性的關(guān)鍵;并在異種移植的SCID小鼠體內(nèi)證明了CVB3的溶瘤效果[27]。CVB3已被鑒定為針對包括NSCLC在內(nèi)的一組不同人類癌細(xì)胞的最有效的OV之一[28]。由此可見,CVB3是一種極佳的候選藥物,可以進(jìn)一步開發(fā)為 KRAS突變肺腺癌的靶向治療藥物。最近又有研究發(fā)現(xiàn),OV領(lǐng)域少有人關(guān)注的CVA11對腫瘤細(xì)胞高表達(dá)的ICAM-1同樣具有高度特異性,其在多種NSCLC細(xì)胞系的異種移植模型體內(nèi)均表現(xiàn)出相當(dāng)出色的療效[29]。

CAR-T細(xì)胞療法為當(dāng)今免疫療法的熱點(diǎn)。研究表明,編碼 IFNα、巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein 1α, MIP1α)和CD80的腫瘤特異性免疫基因(T-SIGn)病毒NG-347與抗表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)的CAR-T細(xì)胞,以及抗人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)的CAR-T細(xì)胞能協(xié)同清除A549人腫瘤異種移植物和它們的轉(zhuǎn)移瘤。其原理為NG-347將腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment, TME)變?yōu)榇傺篆h(huán)境,使得CAR-T細(xì)胞和小鼠先天免疫細(xì)胞在肺腫瘤部位產(chǎn)生募集和激活效應(yīng),同時(shí)病毒編碼的轉(zhuǎn)基因使其與CAR-T細(xì)胞產(chǎn)生更好的協(xié)同作用[45]。另有間充質(zhì)干細(xì)胞遞送含ICI的重組溶瘤AdV聯(lián)合CAR-T細(xì)胞療法[46],其原理與前述聯(lián)合ICI的抑制作用和破壞TME相似。最近又有構(gòu)建出表達(dá)CAR或TCR的粘液瘤病毒(myxoma virus, MYXV)感染的腫瘤特異性T細(xì)胞——TMYXV,T細(xì)胞產(chǎn)生的IFNγ-蛋白激酶B信號與MYXV誘導(dǎo)的M-T5-SKP-1-VPS34信號協(xié)同作用,以觸發(fā)強(qiáng)大的腫瘤細(xì)胞自亡效應(yīng)與旁殺傷效應(yīng),以此克服腫瘤細(xì)胞的原發(fā)耐藥性[47]。上述研究證明,OV療法聯(lián)合免疫療法應(yīng)對NSCLC的巨大治療潛力。

2.4 溶瘤病毒向肺部腫瘤的運(yùn)輸

細(xì)胞或分子層面的靶向呈遞溶瘤效果相比于物理意義上的瘤內(nèi)注射更具針對性。并非所有NSCLC都適合局部給藥,例如多原發(fā)性NSCLC,或者轉(zhuǎn)移灶位于無法直接進(jìn)入的解剖位置(例如腦)。事實(shí)上,全身給藥更有可能達(dá)到全身轉(zhuǎn)移灶以及原發(fā)灶。此外,當(dāng)全身給藥時(shí),一些OV誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)的能力可能會(huì)增強(qiáng)[48]。但同時(shí)又考慮到體內(nèi)存在的中和抗體對OV造成的不利影響,因此,對于包括但不限于NSCLC的實(shí)體瘤和轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤,非常有必要研發(fā)新的系統(tǒng)性和靶向遞送OV的方式。

使用重組OV在病毒自身溶瘤的基礎(chǔ)上,還能激活機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng),從而實(shí)現(xiàn)間接殺傷腫瘤,例如溶瘤副流感病毒可以促進(jìn)靶細(xì)胞產(chǎn)生Ⅰ型、Ⅲ型干擾素以抑制肺腫瘤細(xì)胞生長,同時(shí)刺激PM21-NK細(xì)胞對非病毒感染的肺腫瘤細(xì)胞也產(chǎn)生了殺傷作用[42],這樣的思路也成為當(dāng)今OV研究的熱點(diǎn)方向。

A：我愛人是英國人，我們是在英國上學(xué)時(shí)認(rèn)識(shí)的?，F(xiàn)在定居北京，夏天和圣誕節(jié)，或者孩子放假的時(shí)候我們就會(huì)回英國看家人。其實(shí)，我從小在國外上學(xué)，我不覺得有很大的風(fēng)俗習(xí)慣差別，要說最讓我受不了的可能就是我有一顆中國胃。另外，中英兩國在教育方面確實(shí)有很大的不同，外國的教育觀念是無論什么事多大年齡都會(huì)告訴你道理，不會(huì)過分保護(hù)小朋友，很多東西從很小都讓孩子自己去嘗試。例如，從小我就告訴孩子桌子上有些東西不可以碰，但不會(huì)刻意去收起來不讓孩子知道這個(gè)東西不好。

校友在感恩學(xué)?；貓?bào)學(xué)校的同時(shí)，學(xué)校也理應(yīng)心存感激適時(shí)回饋校友，雙方互敬互惠，攜手前行，這樣便能營造一個(gè)長期友好合作的良性循環(huán)的氛圍。校友其實(shí)也需要職業(yè)發(fā)展方向的信息和人脈，最好也能被納入高校圖書館會(huì)員制服務(wù)中。圖書館作為服務(wù)平臺(tái)，應(yīng)該提倡終身服務(wù)，以及優(yōu)勝劣汰的區(qū)別服務(wù)。服務(wù)在校學(xué)生的同時(shí)對于畢業(yè)學(xué)生也應(yīng)該有一定的跟蹤服務(wù)。高校的會(huì)員制服務(wù)應(yīng)該將過去的所有畢業(yè)生作一番細(xì)致梳理，將愿意服務(wù)母校的校友信息保存完整并不斷更新，針對校友貢獻(xiàn)的高低給予相應(yīng)的服務(wù)和幫助，以便達(dá)到一個(gè)長久互利的循環(huán)模式，最終實(shí)現(xiàn)共同成長、終身教育的會(huì)員制服務(wù)。

最近,又有新的有關(guān)細(xì)胞外囊泡給藥的研究。細(xì)胞外囊泡是納米到微米大小的脂質(zhì)膜結(jié)合囊泡,能夠在體內(nèi)將生物分子從一個(gè)細(xì)胞長距離轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞[52]。細(xì)胞外囊泡本身可以被純化并作為DNA、RNA、蛋白質(zhì)等多種大分子和多柔比星、姜黃素或紫杉醇等小分子等各種藥物的輸送載體[53];另外,細(xì)胞外囊泡具有較高的穩(wěn)定性,即使用其封裝大型生物藥物OV也不會(huì)顯著改變它的電荷和大小,同時(shí)保證了OV不受體內(nèi)中和抗體的攻擊。不同組織產(chǎn)生的細(xì)胞外囊泡表現(xiàn)出特定的歸巢特性,特別是腫瘤衍生的細(xì)胞外囊泡對囊泡起源的腫瘤組織表現(xiàn)出選擇性趨向性。研究表明,細(xì)胞外囊泡作為有效、靶向和非免疫原性藥物載體,能將OV封裝在內(nèi)通過靜脈給藥方式實(shí)現(xiàn)對肺腫瘤趨向性[54],同時(shí)與單獨(dú)的病毒或細(xì)胞外囊泡相比增加了它們的抗腫瘤活性[55]。此研究還表明,即使將源自肺癌的細(xì)胞外囊泡應(yīng)用于結(jié)腸癌細(xì)胞系,也觀察到這種活性,反之亦然;在人、鼠腫瘤衍生細(xì)胞外囊泡甚至可以互相作用于腫瘤細(xì)胞[54]。此后,如有大量研究證明細(xì)胞外囊泡具有普遍的異源、跨物種的腫瘤趨向性,將為靶向性地把包括但不限于OV的藥物遞送至實(shí)體瘤開辟新的途徑。

其他方面的相關(guān)研究,包括使用細(xì)胞載體如血液生長內(nèi)皮細(xì)胞用于在NSCLC的臨床前模型中遞送VSV-IFNβ[56],化學(xué)材料如pH可降解微凝膠輔助OV定位腫瘤[57]、自靶向肺腫瘤細(xì)胞A549的OAdV載體納米球[58]、基于明膠的水凝膠遞送共表達(dá)白細(xì)胞介素-12和GM-CSF的OAdV[59]、將OAdV包裹在腫瘤歸巢大腸桿菌內(nèi)以增強(qiáng)其在NSCLC中的富集[60]等,均在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的靶向與促溶瘤效果。

2.5 溶瘤病毒治療非小細(xì)胞肺癌的臨床研究進(jìn)展

關(guān)于OV治療NSCLC的臨床研究也在蓬勃開展。本文在ClinicalTrials.gov上統(tǒng)計(jì)了近年完成的研究(Table 2)和正在進(jìn)行的研究(Table 3)。編號為NCT02179515的研究表明,在應(yīng)用OV后,包括NSCLC在內(nèi)的腫瘤患者的血清CD27顯著增加。這表明患者體內(nèi)T細(xì)胞和腫瘤免疫的激活[61 62]。sCD27: sCD40 L比值升高也提示預(yù)后良好[63]。編號為NCT01766739的臨床研究證明了重組OVV的安全性,同時(shí)病理學(xué)證實(shí)了局灶內(nèi)的免疫激活和腫瘤抑制[64]。另一項(xiàng)I期臨床研究證明,ADV-tk可激活NSCLC患者全身和瘤內(nèi)CD8+T細(xì)胞的同時(shí)也證明了其安全性[65]。CVA21作用于NSCLC的生物安全性也在最近的一項(xiàng)臨床研究中得到驗(yàn)證[66]。一項(xiàng)II期臨床研究表明,重組安卡拉病毒聯(lián)合順鉑和其他化療藥物在NSCLC患者中產(chǎn)生了令人鼓舞的結(jié)果[67]。

（3）在主梁桁架的上弦桿與下弦桿之間設(shè)置主立桿，將主立桿的上下接口打磨成與上弦桿（與下弦桿）外表面相吻合的弧形凹槽，與上弦桿（與下弦桿）焊接牢固，主立桿的高度1200mm，間距1500mm。

兩表的對比也表明,最近的研究越來越多地關(guān)注OV與放化療或免疫藥物的聯(lián)合。多療法并用已經(jīng)成為研究OV的重要方向。

Table 2 Completed clinical trials of OVs in the treatment of cancers including NSCLC

3 問題與展望

目前,OV療法仍處于探索階段,其臨床研究主要局限于一期、二期臨床試驗(yàn),在治療NSCLC領(lǐng)域尚未開展有效的三期臨床實(shí)驗(yàn)。其中,存在的主要問題包括:(1)生產(chǎn)工藝:在OV生產(chǎn)過程中,既要保證產(chǎn)品的純凈問題,又無法使用傳統(tǒng)滅菌方法進(jìn)行安全性處理,因此,保證生物來源原材料的OV的產(chǎn)品安全性是一項(xiàng)極具挑戰(zhàn)性的工作。(2)人體的抗病毒免疫:將OV以生物活性形式輸入患者體內(nèi)時(shí),如何逃避機(jī)體的中和抗體是首先需要考慮的問題。有研究表明,呼腸孤病毒靜脈內(nèi)治療導(dǎo)致小鼠體內(nèi)腫瘤在腫瘤生長抑制3周后重新生長,這與血清抗呼腸孤病毒抗體滴度的上升相吻合[68]。(3)靶向性不精準(zhǔn):未經(jīng)改造的野生型病毒和改造不完全的病毒可能出現(xiàn)靶向性差的問題,引發(fā)OV攻擊正常體細(xì)胞等副反應(yīng),曾有報(bào)導(dǎo)使用OV治療后出現(xiàn)肺組織損傷的病例[69 -70]。(4)基因工程相關(guān)問題:人工改造的OV也存在一定風(fēng)險(xiǎn),可能造成靶細(xì)胞發(fā)生非預(yù)期性的有害轉(zhuǎn)變;即使改造病毒的效果達(dá)到預(yù)期水平,如何保證外源基因、目的基因在腫瘤細(xì)胞中穩(wěn)定存在也是亟待解決的問題。

Table 3 Ongoing and (or) recruiting clinical trials of OVs in the treatment of cancers including NSCLC

2005年,重組人5型腺病毒安柯瑞H101在中國獲批上市用于頭頸腫瘤治療;用于惡性黑色素瘤治療的溶瘤皰疹病毒T-VEC于2015年在美國、歐洲獲批上市;2021年,一種新型改良單純皰疹病毒Teserpaturev也在日本獲批上市,用于治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等腦部惡性腫瘤。由此可見,OV療法已經(jīng)步入高速發(fā)展的時(shí)期,其未來在肺癌治療中的運(yùn)用亦大有可能。未來,隨著基因工程技術(shù)和分子生物學(xué)的日益進(jìn)步,學(xué)界對OV的認(rèn)知必將更加成熟,使用野生OV或基因編輯OV單獨(dú)或聯(lián)合治療NSCLC也將成為腫瘤治療策略不可或缺的部分,在人類探索腫瘤治療方式的道路上發(fā)揮重要作用。