賴麗玲，陳丹，郭曉莉，陳旭輝，謝福發(fā)，林標(biāo)聲，3，何玉琴，3※

（1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建 龍巖 364000；2.福建福邇金生物科技有限公司，福建 漳平 364400；3.福建省人畜寄生與病毒性疫病防控工程技術(shù)研究中心，福建 龍巖 364000）

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑 1,1-二苯基-2 苦苯肼（DPPH）購自福州艾博生物技術(shù)有限公司；-谷甾醇純度≥95%購自合肥千盛生物科技有限公司；Tris-Hcl 緩沖液、抗壞血酸、水楊酸、雙氧水、乙醇95%、無水乙醇均為分析純。

供試菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌由微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 主要儀器 恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；SW-CJ-2D超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）；UV-759 型紫外可見分光光度計(jì)（上海奧譜勒儀器公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

DPPH 清除率K=1（B1+B2）/B0

式中:B1是2 mL DPPH 與2 mL 樣品液測得的吸光度；B2 是2 mL 樣品液與2 mL 95%乙醇測得的吸光度；B0是2 mL DPPH與2 mL 95%乙醇測得的吸光度。

式中：A1是加入空白對照測得的吸光度；Ax是加入-谷甾醇溶液測得的吸光度。

式中：A空白為不加入樣品，只加入鄰苯三酚和緩沖液測得的吸光度值；A樣品為加入-谷甾醇的吸光度值；A 對照的設(shè)置使用蒸餾水代替鄰苯三酚。

1.2.4 供試菌種活化及菌懸液的制備 將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌先轉(zhuǎn)入LB 液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，傳代2～3 次。分別取活化的菌種入無菌生理鹽水中，并將其稀釋成1.0×106～1.0×108CFU/mL 的菌懸液備用[10,11]。

抑菌率（%）=（樣品抑菌圈直徑—空白對照抑菌圈直徑）/空白對照抑菌圈直徑×100

1.3 數(shù)據(jù)處理

本文所涉及到的數(shù)據(jù)均為3 次重復(fù)試驗(yàn)的平均值，數(shù)據(jù)處理分析均采用Excel 軟件。

2 結(jié)果與分析

從圖1 中可知，Vc 對于DPPH 的清除效果較好，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，Vc 去除率最高達(dá)到96.3%，相比-谷甾醇的去除效果比較差，當(dāng)樣品溶液的濃度達(dá)到0.8 mg/mL，其清除率達(dá)到了22.2%。-谷甾醇的清除曲線與橫坐標(biāo)基本重合，因此斷定，-谷甾醇不能清除DPPH。觀察到DPPH 溶液被添加到樣品中不會褪色。DPPH 溶液加入Vc 后，DPPH 溶液的吸光值會不斷降低，褪色時(shí)間也會減少。由此可見，Vc抗氧化能力很強(qiáng)，能與氫及游離基相結(jié)合。Vc 可以永久性的阻斷自由基的能力，是良好的氫化物給體劑。

圖1 -谷甾醇與Vc 對DPPH 清除能力的對比Fig.1 Comparison of DPPH clearance ability between -sitosterol and Vc

圖2 -谷甾醇與Vc 對羥自由基清除能力的對比Fig.2 Comparison of OH clearance ability between -sitosterol and Vc

圖3 -谷甾醇與Vc 對超氧陰離子自由基清除能力的對比Fig.3 Comparison of clearance ability between -sitosterol and Vc

表1 -谷甾醇對不同菌種的抑菌圈直徑Table 1 The diameter of the antibacterial zone of -sitosterol against different bacterial strains 單位：cm

表2 -谷甾醇對不同菌種抑菌率的影響Table 2 The effect of -sitosterol on the antibacterial rate of different bacterial strains

表2 -谷甾醇對不同菌種抑菌率的影響Table 2 The effect of -sitosterol on the antibacterial rate of different bacterial strains

3 討論

DPPH 是一種穩(wěn)定的自由基、在酒精溶液顏色為紫色，在517 nm 處有很強(qiáng)的吸附能力。在自由基清除劑中，它與單個(gè)電子配對，因此，其吸附能力逐漸降低，其消退與其所能接收的使孤電子成對，從紫色變?yōu)闇\黃色，且吸光光顏色為度值下降，反應(yīng)完成后達(dá)到了穩(wěn)定狀態(tài)。由此，自由基清除能力可以通過517 nm 的吸光度來評估，-谷甾醇的抗氧化能力可以用自由基清除率來表示。DPPH 自由基清除率以Vc 清除能力最高、-谷甾醇的清除率較低，這與黃瀅璋等[13]研究結(jié)果相似。

羥自由基（OH）是代謝過程中會產(chǎn)生的一種非常活潑的自由基，被認(rèn)為是活性最強(qiáng)的活性氧。它不僅可以引發(fā)細(xì)胞凋亡，炎性反應(yīng)以及癌癥等一系列疾病，而且還可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖和分化。因此，對于其研究越來越受到人們的重視。但目前，關(guān)于它的作用機(jī)制并不清楚。羥自由基（OH）有很強(qiáng)的毒性，生物大分子可以引起蛋白質(zhì)、DNA、核酸和脂質(zhì)的體內(nèi)氧化，導(dǎo)致代謝異常和身體的各種病理變化。羥自由基可以使細(xì)胞退化，破壞DNA、細(xì)胞膜和多糖類化合物，后來發(fā)現(xiàn)，當(dāng)羥自由基可以降解細(xì)胞，其有害作用顯著降低。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，-谷甾醇相對于Vc 清除OH 能力稍弱，但-谷甾醇具有一定的羥自由基清除能力。這與蔣瓊鳳等[14]發(fā)現(xiàn)從蓼藍(lán)中提取的-谷甾醇具有清除羥自由基和超氧陰離子的能力，效果較甘露醇和苯甲酸更佳，可防止油脂發(fā)生氧化作用的研究結(jié)果相一致。

4 小結(jié)