馬晨

(淄博市中心血站,山東淄博255000)

為了保證臨床輸血安全有效,最大程度降低輸血反應(yīng)的發(fā)生,在輸注紅細(xì)胞血液制品前都要進(jìn)行交叉配血試驗(yàn),配血相合才能將獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞血液制品輸注給患者。對(duì)于臨床輸血患者出現(xiàn)配血困難的現(xiàn)象,多是同種抗體和自身抗體引起的,自身抗體中以冷自身抗體較為常見,當(dāng)發(fā)現(xiàn)患者存在冷自身抗體時(shí),要仔細(xì)篩查其是否具有同種抗體,以免漏檢同種抗體而引發(fā)輸血后免疫反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 患者,女,69 歲。因胸悶、氣急、腰痛就診,血紅蛋白42 g/L,臨床診斷為貧血,無既往輸血史。

1.2 試劑與儀器 抗-A、-B 標(biāo)準(zhǔn)血清(批號(hào):20211220),抗-D(IgM,批號(hào):20221809),人ABO 反定型試劑紅細(xì)胞(批號(hào):20235337),抗-C(IgM,批號(hào):20233001),抗-c(IgM,批號(hào):20233101),抗-E(IgM,批號(hào):20233201),抗-e(IgM,批號(hào):20233301),篩選細(xì)胞(批號(hào):20237046),以上為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品,抗人球蛋白試劑(多特異性,批號(hào):8000458512),抗-IgG(批號(hào):8000456496),抗-C3d(批號(hào):8000455557),抗-S(IgM,批號(hào):8000454483),譜細(xì)胞(批號(hào):8000459981),以上為Sanquin 公司產(chǎn)品,微柱凝膠卡(達(dá)亞美有限責(zé)任公司,批號(hào):50531.82.16),KA-2200 離心機(jī)(久保田公司),37℃水浴箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司),微柱凝膠交叉配血系統(tǒng)(GRIFOLS 公司)。

1.3 方法

1.3.1 紅細(xì)胞血型鑒定 ABO、Rh 及其他血型鑒定均為鹽水介質(zhì)法,立即離心并在37℃溫育3 min 看結(jié)果,用溫鹽水(37℃左右)六洗后再次進(jìn)行血型鑒定。

1.3.2 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 包括抗球蛋白試劑(多特異性)、單抗-IgG、單抗-C3d、ABs 對(duì)照,立即離心進(jìn)行檢測,用溫鹽水(37℃左右)六洗后再次進(jìn)行檢測。

1.3.3 抗體篩選和特異性鑒定 使用抗篩細(xì)胞和譜細(xì)胞進(jìn)行抗體篩選和鑒定,分別采用鹽水介質(zhì)法和凝膠微柱法,使用2-Me 破壞IgM 抗體后的血清采用凝膠微柱法進(jìn)行抗體篩選和鑒定,使用酸放散的方法將放散液采用凝膠微柱法進(jìn)行抗體篩選和鑒定。

1.3.4 吸收放散試驗(yàn) 1)選擇6 人份O 型紅細(xì)胞和患者血清等量混合,放4℃吸收1 晚,將上清液和譜細(xì)胞在抗人球蛋白卡反應(yīng),進(jìn)行抗體的初步鑒定,2)選擇6 人份O 型S 抗原陰性紅細(xì)胞均分4 管,和患者血清等量混合,依次放4℃30 min 2 次,放37℃30 min 2 次,將上清液和譜細(xì)胞在抗人球蛋白卡反應(yīng),進(jìn)一步進(jìn)行抗體鑒定。

1.3.5 效價(jià)檢測 使用試管法和試管經(jīng)典抗人球法檢測IgM 和IgG 抗體的效價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞血型 患者血型為B、CcDEe,見表1。

2.2 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 患者單抗實(shí)驗(yàn)>1＋,需要進(jìn)行酸放散試驗(yàn),見表2。

ABO 反定型ABO 正定型Rh 血型系統(tǒng)定型抗-A抗-BAcBcOc自身c抗-D抗-C抗-c抗-E抗-e IS1＋4＋3＋s3＋3＋1＋s4＋2＋w2＋2＋s2＋37℃2＋s000溫六洗04＋4＋1＋s1＋s2＋2＋

2.3 抗篩試驗(yàn) 抗篩細(xì)胞陽性,表明存在不規(guī)則抗體,需用譜細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步鑒定,見表3。

2.4 抗體鑒定試驗(yàn) 患者血清中檢出IgM 冷自身抗體,未確定其特異性,血清中檢出IgG 不規(guī)則抗體,未確定其特異性,放散液中檢出不規(guī)則抗體,未確定其特異性,見表4。

2.5 吸收放散試驗(yàn) 第1 次吸收放散試驗(yàn)結(jié)果顯示譜細(xì)胞格局有抗-S,第2 次吸收放散試驗(yàn)結(jié)果顯示上清液中存在抗-S,見表5。

序號(hào)Rh-hr Kidd MNSs Duffy Lewis P DCEceJkaJkbMNSsFyaFybLeaLebP1 IS37℃1＋＋＋＋＋＋00＋0＋＋0＋＋＋3＋s2＋w 2＋＋00＋＋＋＋＋0＋＋00＋03＋1＋s 3＋＋＋＋＋＋0＋＋＋＋＋＋0＋03＋1＋s

2.6 患者S 抗原檢測 S 抗原為陰性。

2.7 效價(jià)檢測 冷自身抗體IgM 效價(jià):4℃條件為256,37℃條件為<1,室溫條件為8?？?S IgG 效價(jià):4(2-Me 處理后,經(jīng)典抗人球法)。

3 討論

紅細(xì)胞的自身抗體是1 種能與自身抗原特異性結(jié)合并具有免疫功能的抗體,它在正常人血清中的效價(jià)很低。冷自身抗體絕大部分是IgM 類型的免疫球蛋白,在某些病理情況下,冷自身抗體的存在會(huì)干擾ABO、Rh 等血型鑒定,造成交叉配血困難[1]。據(jù)報(bào)道,冷凝集素的效價(jià)>64 時(shí),就開始干擾血型鑒定和交叉配血[2],用溫鹽水(37～45℃)反復(fù)洗滌紅細(xì)胞可去除大量的自身抗體[3]。本例中冷自身抗體的效價(jià)在4℃條件下達(dá)到了256,已經(jīng)影響試驗(yàn)的結(jié)果,經(jīng)過溫鹽水(37℃左右)6 次洗滌后,才清晰顯示血型為B、CcDEe。

MNSs 血型系統(tǒng)的抗-S 絕大多數(shù)是由輸血、妊娠等紅細(xì)胞免疫產(chǎn)生,但也存在天然產(chǎn)生的[4]。間接抗球蛋白試驗(yàn)可檢測出絕大多數(shù)具有臨床意義的同種抗體[5],大多數(shù)抗-S 可以通過間接抗人球蛋白試驗(yàn)檢測到[6-7]。中國漢族人群S 抗原陰性的概率很高,受S 抗原免疫刺激的概率較低,因此平常很難檢測到抗-S[8]。

當(dāng)患者同時(shí)存在自身抗體和同種抗體時(shí),自身抗體常易遮蓋同種抗體的特異性,使同種抗體漏檢而導(dǎo)致嚴(yán)重的輸血反應(yīng)[9]。因此,當(dāng)判斷冷自身抗體和同種抗體同時(shí)存在時(shí),應(yīng)當(dāng)首先排除冷自身抗體的干擾,一般可用遞增溫度(由37℃逐升到45℃)的生理鹽水反復(fù)洗滌紅細(xì)胞[10]。目前最有效和能夠依賴的方法還是自體或異體吸收技術(shù),但是吸收技術(shù)操作耗時(shí)、昂貴且對(duì)操作人員技術(shù)水平要求高[3]。在配血困難的情況下,要在37℃、室溫、4℃同時(shí)進(jìn)行,這樣可以初步斷定是冷自身抗體還是溫自身抗體引起的自身凝集,從而選擇正確的吸收方法,除去患者血清中的自身抗體后再進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查和交叉配血試驗(yàn)。而自身抗體伴同種抗體的存在多數(shù)為Rh 系統(tǒng)的特異性抗體,少數(shù)為MNSs 和Kidd系統(tǒng)[11]。本例采用異體吸收,沒有采用自體吸收,是因?yàn)榇嘶颊咧笨箯?qiáng)陽性,無法將紅細(xì)胞處理到不凝集同型、O 型和自身細(xì)胞的狀態(tài),所以選用異體細(xì)胞,通過4 次吸收試驗(yàn)后上清液上譜細(xì)胞,可以清晰地看到抗-S 的格局。

總之,對(duì)于自身抗體和同種抗體同時(shí)存在的疑難標(biāo)本,我們要盡量排除自身抗體的干擾,鑒定同種抗體,根據(jù)鑒定結(jié)果找出與患者相匹配的血液進(jìn)行輸注以降低輸血反應(yīng),提高臨床輸血的安全性。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。