doi：10.3969/j.issn.1000-4440.2024.05.014

收稿日期：2023-07-05

基金項(xiàng)目：廣東省特色家禽生態(tài)健康養(yǎng)殖科技創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（300702-C18082）

作者簡(jiǎn)介：趙君文（1998-），女，安徽蚌埠人，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。（E-mail）zhaojunwen5273@163.com

通訊作者：安立龍，（E-mail）anlilong@126.com

摘要：" 高溫引起的雞熱應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致其生殖機(jī)能?chē)?yán)重下降。本試驗(yàn)以26周齡雌性懷鄉(xiāng)雞為研究對(duì)象，探究斑蝥黃對(duì)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能、生殖激素水平、卵泡發(fā)育的影響。結(jié)果表明，與常溫對(duì)照相比，循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率及血清中促卵泡素（FSH）、黃體生成素（LH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）水平降低，等級(jí)卵泡、小黃卵泡、大黃卵泡、小白卵泡、大白卵泡數(shù)量降低，卵泡膜結(jié)構(gòu)松散、斷裂，卵泡顆粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損。常溫環(huán)境中，飼糧中添加斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能、血清中生殖激素水平有一定提升作用，但對(duì)卵泡膜結(jié)構(gòu)無(wú)明顯影響。循環(huán)高溫環(huán)境中，飼糧中添加斑蝥黃能夠顯著改善懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能，提高血清中生殖激素水平，提高各級(jí)卵泡數(shù)量，緩解高溫造成的卵泡膜松散、斷裂和卵泡顆粒細(xì)胞損傷。綜上，斑蝥黃具有較強(qiáng)的抗氧化特性，能夠提高懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能，調(diào)節(jié)血清中生殖激素水平，降低高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞造成的傷害，使各級(jí)卵泡正常發(fā)育并排出。

關(guān)鍵詞：" 斑蝥黃；懷鄉(xiāng)雞；循環(huán)高溫；卵泡發(fā)育；產(chǎn)蛋率

中圖分類(lèi)號(hào)：" S831""" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：" A""" 文章編號(hào)：" 1000-4440（2024）05-0890-15

Effects of canthaxanthin on laying performance， reproductive hormone level and follicular development of Huaixiang chicken in cyclic high temperature environment

ZHAO Junwen，" ZHAO Zhuangzhi，" XIE Tingting，" SUN Zhuo，" ZHONG Peishan，" XIAO Mei，" ZHANG Li，WU Jiang，" AN Lilong

（Binhai Agricultural College， Guangdong Ocean University， Zhanjiang 524088， China）

Abstract：" Heat stress of chicken caused by high temperature can lead to the seriously decline of reproductive function. Effects of canthaxanthin on laying performance， reproductive hormone level and follicle development of 26-week-old female Huaixiang chickens in cyclic high temperature environment were studied. The results showed that， compared with control group of room temperature， the laying rate， levels of follicle-stimulating hormone （FSH）， luteinizing hormone （LH）， progesterone （P4） and estradiol （E2） in serum decreased in Huaixiang chickens exposed to circulating high temperature， and the number of grade follicles， small yellow follicles， large yellow follicles， small white follicles and large white follicles decreased. The structure of follicular membrane was loose and broken， and the structure of granulosa cells of follicles was damaged. In normal temperature environment， diet added with canthaxanthin could improve laying performance and serum reproductive hormone level of Huaixiang chickens， but had no obvious effect on follicular membrane structure. Adding canthaxanthin into the diet could significantly improve laying performance， serum reproductive hormone levels and follicle number of Huaixiang chickens in cyclic high temperature to alleviate the looseness， rupture of follicular membrane and damage of follicular granulosa cells caused by high temperature. In conclusion， canthaxanthin has strong antioxidant properties， which can improve laying performance， regulate the level of reproductive hormones in serum of Huaixiang chickens， and can reduce the harm caused by high temperature to make all levels of follicles develop and ovulate normally.

Key words：" canthaxanthin；Huaixiang chicken；cyclic high temperature；follicular development；laying rate

高溫天氣不僅對(duì)人類(lèi)健康造成威脅，同時(shí)也對(duì)家禽養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生了不良影響，影響動(dòng)物的身心健康。在熱帶和亞熱帶地區(qū)，夏季時(shí)間長(zhǎng)，使得規(guī)?；呙芏瑞B(yǎng)殖條件下的懷鄉(xiāng)雞易產(chǎn)生熱應(yīng)激。由于雞沒(méi)有汗腺，不能通過(guò)皮膚上的汗液蒸發(fā)來(lái)調(diào)節(jié)體溫，因此高溫使家禽的生產(chǎn)性能?chē)?yán)重降低。其中最直觀的表現(xiàn)就是產(chǎn)蛋量的降低。Yalcin等的研究結(jié)果表明，當(dāng)環(huán)境溫度超過(guò)29 ℃時(shí)，蛋雞的產(chǎn)蛋率會(huì)顯著降低，同時(shí)蛋重、蛋殼重量也會(huì)出現(xiàn)下降趨勢(shì)。Al-Otaibi等和Castro等研究結(jié)果證實(shí)高溫會(huì)使蛋雞體重和采食量顯著降低，產(chǎn)蛋量、蛋重均顯著下降。卵泡是雞蛋的前體，高溫環(huán)境會(huì)對(duì)雞卵泡的發(fā)育產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響雞蛋的數(shù)量和重量。研究發(fā)現(xiàn)，高溫引發(fā)的家禽熱應(yīng)激會(huì)使家禽產(chǎn)蛋率下降，其中一個(gè)重要原因是熱應(yīng)激導(dǎo)致畜禽體內(nèi)激素代謝紊亂，生殖系統(tǒng)的生理功能被損害，家禽的繁殖性能受到抑制。Raj等發(fā)現(xiàn)，在高溫環(huán)境中，雞體內(nèi)的睪酮（Testosterone，T）、孕酮（Progesterone，P4）、雌二醇（Estradiol，E2）等生殖激素水平明顯下降，生殖細(xì)胞的生長(zhǎng)受到影響，雞的生殖能力降低。李永洙等研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激的濟(jì)寧百日雞和海蘭褐雞血液中促卵泡素（Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（Luteinizing hormone，LH）、孕酮、雌二醇水平均下降。

斑蝥黃（Canthaxanthin， CX）屬于酮類(lèi)類(lèi)胡蘿卜素，能夠清除自由基，其抗氧化特性可以提高雞的抗氧化狀態(tài)。Cho等和Ren等的研究結(jié)果表明，飼糧中添加斑蝥黃提高了家禽的產(chǎn)蛋率。Rosa等在種雞飼糧中添6 mg/kg 斑蝥黃，可有效提高種雞的繁殖力；Araujo等的研究結(jié)果表明，斑蝥黃可顯著提高種雞的產(chǎn)蛋量、肉仔雞的飼料利用率。本研究在飼糧中添加斑蝥黃，探究斑蝥黃對(duì)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率、激素水平的影響，為提高肉用種雞繁殖生產(chǎn)性能提供理論依據(jù)。

1" 材料與方法

1.1" 試驗(yàn)動(dòng)物與藥品

1日齡懷鄉(xiāng)母雞360羽，購(gòu)自廣州立林生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，飼養(yǎng)至25周齡。斑蝥黃（生產(chǎn)批號(hào)UE01611012）購(gòu)自法國(guó)帝斯曼維生素貿(mào)易（上海）有限公司，斑蝥黃含量10%。

1.2" 飼養(yǎng)管理與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在廣東海洋大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院雞舍內(nèi)，用三層階梯籠養(yǎng)懷鄉(xiāng)雞。選取體重及生產(chǎn)性能相近的26周齡雌性懷鄉(xiāng)雞360羽，如表1所示，試驗(yàn)分為10個(gè)處理，每處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6羽雞。飼料中斑蝥黃添加量分別為0 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg、8 mg/kg、10 mg/kg。試驗(yàn)期采用自然光照+人工補(bǔ)光，光照度為10～15 lx，光照周期為光照16 h/黑暗8 h。用保溫?zé)?、除濕機(jī)控制環(huán)境溫濕度，常溫處理組的NC處理和NT1、NT2、NT3、NT4處理全天環(huán)境溫度都保持在（25±2） ℃，高溫處理組的HC、HT1、HT2、HT3、HT4處理9：00-17：00環(huán)境溫度保持在（32±2） ℃，17：00-9：00環(huán)境溫度保持在（25±2） ℃，各處理濕度均維持在65%～75%。預(yù)試期為2周，懷鄉(xiāng)雞26～27周齡。正試期9周，懷鄉(xiāng)雞28～36周齡為正式試驗(yàn)期，其中懷鄉(xiāng)雞28～30周齡為試驗(yàn)前期，31～33周齡為試驗(yàn)中期，34～36周齡為試驗(yàn)后期。參照《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)——雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T33-2004）和廣東的實(shí)際情況，設(shè)計(jì)如表2所示的玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧， 1 kg預(yù)混料包含維生素A 9 000 IU，維生素D 2 500 IU，維生素E 20 IU，維生素B 1 212 μg，維生素K 2.4 mg；微量元素Mn 100 mg，Zn 60 mg，F(xiàn)e 25 mg，Cu 5 mg，Co 0.1 mg（微量元素以硫酸鹽形式添加）； Se（N2SeO3·5H2O） 0.2 mg，I（KI） 0.5 mg?；A(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平如表3所示。

1.3" 樣品采集

血清采集：分別在試驗(yàn)的第3周、第6周、第9周的周日7：00從各重復(fù)中隨機(jī)挑選1羽雞，饑餓12 h后翅下靜脈采血5 ml，3 000 r/min離心10 min，-20 ℃保存。

卵泡采集：斷頸處死雞后取卵巢，剝離卵泡（直徑＞1 mm）。

1.4" 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1" 產(chǎn)蛋性能的測(cè)定" 每周統(tǒng)計(jì)懷鄉(xiāng)雞日均采食量、平均蛋重、產(chǎn)蛋率、破損率。

平均日采食量=每日總采食量/雞羽數(shù)；

平均蛋重=總蛋重/產(chǎn)蛋數(shù)；

產(chǎn)蛋率=每日總產(chǎn)蛋數(shù)/總雞數(shù)×100%；

破損率=破蛋數(shù)/總蛋數(shù)×100%。

1.4.2" 生殖激素指標(biāo)的測(cè)定" 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清中促卵泡素（Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（Luteinizing hormone，LH）、孕酮（Progesterone，P4）、雌二醇（Estradiol，E2）的含量，試劑盒購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司。

1.4.3" 不同等級(jí)卵泡的測(cè)定" 取懷鄉(xiāng)雞卵巢，剝離直徑＞1 mm的卵泡，稱(chēng)重，用電子游標(biāo)卡尺測(cè)量卵泡直徑，按直徑大小分為等級(jí)卵泡（Grade follicles，GF）（≥12 mm），大黃卵泡（Large yellow follicles，LYF）（9～11 mm），小黃卵泡（Small yellow follicles，SYF）（6～8 mm），小白卵泡（Small white follicles，SWF）（≤2 mm），大白卵泡（Large white follicles，LWF）（3～5 mm），統(tǒng)計(jì)各級(jí)卵泡數(shù)。

1.4.4" 小黃卵泡、大黃卵泡結(jié)構(gòu)觀察" 避光，于4％多聚甲醛中固定SYF、LYF組織，用乙醇脫水，透明（乙醇+二甲苯），透蠟（二甲苯+石蠟），將溶解的石蠟注入包埋盒內(nèi)包埋后，修蠟，切片（厚度為4 μm），經(jīng)蘇木精-伊紅染色后在光學(xué)顯微鏡（型號(hào)：CX31）下觀察卵泡的組織形態(tài)并拍照，分析結(jié)構(gòu)差異。

1.4.5" 小黃卵泡顆粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察" 于電鏡固定液（2.5%戊二醛）中固定小黃卵泡，室溫固定2 h，4 ℃冷鏈運(yùn)輸送至武漢博爾夫生物科技有限公司制作電鏡超薄切片，用透射電鏡拍照。

1.5" 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2021整理全部試驗(yàn)數(shù)據(jù)，用IBM SPSS 26.0軟件進(jìn)行方差分析（一般線性模型-單變量）和差異顯著性檢驗(yàn)（Duncan’s法），P＜0.05為差異顯著，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 斑蝥黃對(duì)常溫和循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能的影響

2.1.1" 斑蝥黃對(duì)常溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能的影響" 如表4所示，在試驗(yàn)前期，與NC處理相比，NT2處理懷鄉(xiāng)雞日均采食量顯著增加（P＜0.05），NT1、NT2處理懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率顯著提高（P＜0.05）。所有常溫處理（NC、NT1、NT2、NT3、NT4）懷鄉(xiāng)雞的平均蛋重和蛋破損率均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)前期，NT2處理懷鄉(xiāng)雞日均采食量最高，顯著高于其他常溫處理（NC、NT1、NT3、NT4）（P＜0.05）。在試驗(yàn)前期，NT1和NT2處理懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率顯著高于其他常溫處理（NC、NT3、NT4）（P＜0.05）。在試驗(yàn)中期， NT2處理懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率顯著高于其他常溫處理（NC、NT1、NT3、NT4）（P＜0.05）。NT3處理懷鄉(xiāng)雞平均蛋重顯著高于NC處理（P＜0.05），NC、NT1、NT2、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞蛋破損率無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)后期，NT2處理懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率顯著高于NC、NT3、NT4處理（P＜0.05）。NT2、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞平均蛋重顯著高于NC處理（P＜0.05），NC、NT1、NT2、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞蛋破損率無(wú)顯著差異（P＜0.05）。綜上可知，在常溫環(huán)境中，添加6～8 mg/kg斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能具有促進(jìn)作用。

HT491.44±3.46e41.65±0.74e47.12±4.83c2.35±0.18cNC、NT1、NT2、NT3、NT4、HC、HT1、HT2、HT3、HT4見(jiàn)表1。同一列數(shù)據(jù)后不同小寫(xiě)字母表示差異顯著（P＜0.05）。

2.1.2" 高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能的影響" 如表4所示，在試驗(yàn)前、中、后期，與NC處理相比，HC處理懷鄉(xiāng)雞日均采食量、平均蛋重、產(chǎn)蛋率均顯著降低（P＜0.05），蛋破損率顯著提高（P＜0.05）。

2.1.3" 斑蝥黃對(duì)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能的影響" 如表4所示，在試驗(yàn)前期，與HC處理相比，HT1、HT2、HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞平均蛋重和產(chǎn)蛋率均顯著提高（P＜0.05）。在試驗(yàn)中期，與HC處理相比，HT1、HT2、HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞平均蛋重顯著提高（P＜0.05），HT4處理懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率最高，為48.12%。在試驗(yàn)前、中期，所有循環(huán)高溫處理（HC、HT1、HT2、HT3、HT4）的蛋破損率均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)后期，HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞蛋破損率顯著低于HC、HT1、HT2處理（P＜0.05），與HC處理相比，HT4處理懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋率最高，為47.12%。表5是溫度和斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能影響的雙因素方差分析結(jié)果。綜上可知，在循環(huán)高溫環(huán)境中，添加10 mg/kg斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能具有促進(jìn)作用。

2.2" 斑蝥黃對(duì)常溫和循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞血清生殖激素水平的影響

2.2.1" 斑蝥黃對(duì)常溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞血清生殖激素水平的影響" 如表6所示，在試驗(yàn)前期，與NC處理相比，NT1、NT2、NT3處理血清中促卵泡素含量顯著增加（P＜0.05），NT1、NT2、NT3、NT4處理血清中黃體生成素質(zhì)量濃度顯著增加（P＜0.05）。在試驗(yàn)前、中期，NC、NT1、NT2、NT3、NT4處理血清中雌二醇和孕酮質(zhì)量濃度均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)中、后期，與NC處理相比，NT1、NT2、NT3、NT4處理血清中促卵泡素和黃體生成素質(zhì)量濃度均顯著增加（P＜0.05）。

2.2.2" 高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞血清生殖激素水平的影響" 如表6所示，在試驗(yàn)前期，與NC處理相比，HC處理血清中促卵泡素含量與黃體生成素、雌二醇質(zhì)量濃度顯著下降（P＜0.05）。在試驗(yàn)中期，與NC處理相比，HC處理血清中促卵泡素含量與黃體生成素、孕酮質(zhì)量濃度顯著下降（P＜0.05）。在試驗(yàn)后期，與NC處理相比，HC處理血清中促卵泡素含量與黃體生成素、雌二醇、孕酮質(zhì)量濃度均顯著下降（P＜0.05）。

2.2.3" 斑蝥黃對(duì)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞血清生殖激素水平的影響" 如表6所示，在試驗(yàn)前期，與HC處理相比，HT1、HT2、HT3、HT4處理血清中促卵泡素含量顯著增加（P＜0.05），HT3、HT4處理血清中雌二醇質(zhì)量濃度顯著增加（P＜0.05）。在試驗(yàn)前期，HC、HT1、HT2、HT3、HT4處理血清中黃體生成素、孕酮質(zhì)量濃度均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)中期，HC、HT1、HT2、HT3、HT4處理血清中促卵泡素含量與黃體生成素、雌二醇、孕酮質(zhì)量濃度均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)后期，HT3處理血清中黃體生成素、雌二醇、孕酮質(zhì)量濃度均顯著高于HC處理（P＜0.05）。溫度和斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞血清生殖激素水平影響的雙因素方差分析結(jié)果見(jiàn)表7。綜上，在懷鄉(xiāng)雞34～36周齡，在飼糧中添加8 mg/kg斑蝥黃可以促進(jìn)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞血清中生殖激素的升高。

2.3" 斑蝥黃對(duì)常溫和循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞卵泡發(fā)育的影響

2.3.1" 斑蝥黃對(duì)常溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞卵泡發(fā)育的影響" 如表8所示，在試驗(yàn)前期，NT3處理懷鄉(xiāng)雞大黃卵泡、大白卵泡數(shù)量顯著高于NC、NT1、NT2、NT4處理（P＜0.05），NC、NT1、NT2、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞卵巢重、小黃卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)中期，與NC處理相比，NT1、NT4處理懷鄉(xiāng)雞大白卵泡數(shù)量顯著增加（P＜0.05）。在試驗(yàn)中期，NC、NT1、NT2、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞卵巢重、等級(jí)卵泡數(shù)量、小黃卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)后期，NT2處理懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡數(shù)量最高，顯著高于NC處理（P＜0.05），NT3處理懷鄉(xiāng)雞大白卵泡數(shù)量最高，顯著高于NC處理（P＜0.05）。在試驗(yàn)后期，NC、NT1、NT2、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞卵巢重、等級(jí)卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。

NC、NT1、NT2、NT3、NT4、HC、HT1、HT2、HT3、HT4見(jiàn)表1。同一列數(shù)據(jù)后不同小寫(xiě)字母表示差異顯著（P＜0.05）。

2.3.2" 高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞卵泡發(fā)育的影響" 如表8所示，在試驗(yàn)前期，與NC處理相比，HC處理懷鄉(xiāng)雞卵巢重、等級(jí)卵泡數(shù)量、小黃卵泡數(shù)量、大黃卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量均顯著降低（P＜0.05）。在試驗(yàn)中期，與NC處理相比，HC處理懷鄉(xiāng)雞大黃卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量均顯著降低（P＜0.05）。在試驗(yàn)后期，與NC處理相比，HC處理懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡數(shù)量、大黃卵泡數(shù)量、大白卵泡數(shù)量均顯著降低（P＜0.05）。

NC、NT1、NT2、NT3、NT4、HC、HT1、HT2、HT3、HT4見(jiàn)表1。同一列數(shù)據(jù)后不同小寫(xiě)字母表示差異顯著（P＜0.05）。

2.3.3" 斑蝥黃對(duì)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞卵泡發(fā)育的影響" 如表8所示，在試驗(yàn)前期，HT3處理懷鄉(xiāng)雞大黃卵泡數(shù)量顯著高于HC處理（P＜0.05），HT1處理小白卵泡數(shù)量顯著高于HC處理（P＜0.05），HT3處理懷鄉(xiāng)雞大黃卵泡數(shù)量顯著高于HC處理（P＜0.05），HC、HT1、HT2、HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞等級(jí)卵泡數(shù)量、大白卵泡數(shù)量均無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)中期，HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞大黃卵泡數(shù)量顯著高于HC、HT1、HT2 處理（P＜0.05），HT2處理懷鄉(xiāng)雞小白卵泡數(shù)量顯著高于HC、HT1、HT3、HT4處理（P＜0.05），HC、HT1、HT2、HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞卵巢重、等級(jí)卵泡數(shù)量、小黃卵泡數(shù)量、大白卵泡數(shù)量無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。在試驗(yàn)后期，HT4處理懷鄉(xiāng)雞大黃卵泡數(shù)量顯著高于HC、HT1、HT2、HT3處理（P＜0.05），HC、HT1、HT2、HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞卵巢重、等級(jí)卵泡數(shù)量、大白卵泡數(shù)量無(wú)顯著差異（Pgt;0.05）。溫度和斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞卵泡發(fā)育影響的雙因素方差分析結(jié)果見(jiàn)表9。綜上所述，在飼糧中添加8～10 mg/kg斑蝥黃對(duì)循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞卵泡發(fā)育具有積極作用。

2.4" 斑蝥黃對(duì)常溫和循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡、大黃卵泡結(jié)構(gòu)的影響

如圖1、圖2、圖3所示，用透射電鏡觀察懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡和大黃卵泡結(jié)構(gòu)，在試驗(yàn)前、中、后期，飼糧中添加斑蝥黃對(duì)常溫環(huán)境下懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡和大黃卵泡結(jié)構(gòu)均無(wú)顯著影響。NC、NT1、NT2、NT3和NT4處理懷鄉(xiāng)雞的卵泡發(fā)育良好，顆粒細(xì)胞層與卵泡膜層連接緊密，顆粒細(xì)胞無(wú)空泡變性現(xiàn)象，卵泡膜組織結(jié)構(gòu)完整，無(wú)松散或破裂現(xiàn)象。與NC處理相比，HC處理懷鄉(xiāng)雞的小黃卵泡和大黃卵泡膜結(jié)構(gòu)均受到不同程度的損傷，表現(xiàn)為卵泡結(jié)締組織破裂、卵泡膜結(jié)構(gòu)松散、顆粒細(xì)胞層與膜層之間出現(xiàn)空隙。與HC處理相比，飼糧中添加斑蝥黃的HT1、HT2、HT3、HT4處理懷鄉(xiāng)雞卵泡膜層排列緊密，顆粒細(xì)胞層和膜細(xì)胞層緊密連接，且卵泡膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞無(wú)明顯空泡變性現(xiàn)象。并且隨著斑蝥黃添加量的增加，卵泡膜結(jié)構(gòu)松散、斷裂現(xiàn)象得到改善，試驗(yàn)前期，HT2、HT3處理改善循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞卵泡膜結(jié)構(gòu)松散、斷裂現(xiàn)象的效果較好，試驗(yàn)中期和后期，HT3、HT4處理的效果較好。

2.5" 斑蝥黃對(duì)常溫和循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響

如圖4、圖5、圖6所示，用透射電子顯微鏡觀察懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞，在試驗(yàn)前、中、后期，飼糧中添加斑蝥黃對(duì)常溫環(huán)境下懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響，NC、NT3、NT4處理懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞細(xì)胞核均無(wú)皺縮，核膜完好，核質(zhì)顏色無(wú)異常。與NC處理相比，HC處理懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的核染色質(zhì)凝聚，核質(zhì)顏色深，細(xì)胞核呈皺縮狀，線粒體嵴排列紊亂且部分嵴消失或融合，細(xì)胞變形。循環(huán)高溫環(huán)境中，與HC處理相比，飼糧中添加斑蝥黃的懷鄉(xiāng)雞小黃卵泡核質(zhì)顏色有變淺的趨勢(shì)，但顆粒細(xì)胞的形態(tài)未恢復(fù)至常溫水平。

3" 討論

3.1" 高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能的影響機(jī)制

熱應(yīng)激導(dǎo)致家禽的繁殖能力下降是一種普遍現(xiàn)象。熱應(yīng)激對(duì)家禽產(chǎn)蛋性能的負(fù)面影響，首先表現(xiàn)為日均采食量下降。研究發(fā)現(xiàn)，循環(huán)高溫顯著降低了雞的采食量，肉雞上皮細(xì)胞在高溫環(huán)境中發(fā)生水分失衡，脫水改變了細(xì)胞的通透性，影響了腸道結(jié)構(gòu)，降低了十二指腸和空腸的絨毛高度和空腸的絨隱比，降低了空腸胰蛋白酶的活性，對(duì)家禽的消化功能產(chǎn)生了不利影響。由此推測(cè)循環(huán)高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞腸道產(chǎn)生的不利影響，可能是因?yàn)橄拗屏四c道的消化吸收功能，使種雞用于產(chǎn)蛋的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入不足，從而降低了種雞的產(chǎn)蛋性能。其次，熱應(yīng)激條件下，家禽呼吸頻率增加，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生呼吸性堿中毒，血漿蛋白質(zhì)和鈣流失，整體產(chǎn)蛋率下降，蛋破損率上升。Barrett等發(fā)現(xiàn)，持續(xù)的熱應(yīng)激在導(dǎo)致蛋雞采食量和產(chǎn)蛋率下降的同時(shí)，血清中的鈣離子濃度也明顯下降，說(shuō)明熱應(yīng)激狀態(tài)下蛋雞攝入的鈣水平也會(huì)下降。刁華杰等的研究結(jié)果表明，在高溫環(huán)境中，蛋雞日均采食量、體增重和平均蛋重顯著降低，和本研究結(jié)果一致。

研究結(jié)果顯示，雞發(fā)生熱應(yīng)激時(shí)，體內(nèi)黃體生成素水平和下丘腦促性腺激素釋放激素的含量均會(huì)降低，排卵前黃體生成素和黃體酮的水平降低。由垂體分泌的促卵泡素（FSH）和促黃體素（LH）協(xié)同參與卵泡發(fā)育和類(lèi)固醇類(lèi)激素的合成和性腺活動(dòng)。高溫影響蛋雞機(jī)體內(nèi)分泌功能，降低下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）的分泌量，減少垂體促性腺激素（GTH）的生成，導(dǎo)致黃體生成素（LH）和促卵泡素（FSH）水平降低，也是影響其產(chǎn)蛋性能的重要原因。家禽發(fā)生熱應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)分泌失調(diào)，下丘腦和垂體功能受限，黃體生成素（LH）和促卵泡素（FSH）水平降低，高文發(fā)現(xiàn)，高溫環(huán)境中27周齡羅曼蛋雞血清促卵泡素（FSH）、黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P4）水平顯著下降。研究發(fā)現(xiàn)，家禽發(fā)生熱應(yīng)激時(shí)卵巢和大黃卵泡受到氧化損傷，卵巢和大黃卵泡的相對(duì)重量下降，在家禽發(fā)生嚴(yán)重?zé)釕?yīng)激時(shí)，可能會(huì)中止排卵。Li等研究發(fā)現(xiàn)，35～37 ℃的高溫會(huì)使30周齡蛋雞卵巢大白卵泡、小黃卵泡、大黃卵泡的數(shù)量降低，抑制等級(jí)前卵泡進(jìn)一步發(fā)育成大黃卵泡和等級(jí)卵泡，從而降低產(chǎn)蛋率。

在本試驗(yàn)中，懷鄉(xiāng)雞在循環(huán)高溫環(huán)境中產(chǎn)蛋性能下降，表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率下降和蛋破損率增加，這可能是由于卵巢功能下降，導(dǎo)致血漿生殖激素水平下降，使卵泡膜結(jié)構(gòu)松散，造成卵泡顆粒細(xì)胞損傷。在本試驗(yàn)中高溫可明顯降低懷鄉(xiāng)雞血清促卵泡素（FSH）、黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P4）水平，懷鄉(xiāng)雞的卵巢重、等級(jí)卵泡數(shù)量、小黃卵泡數(shù)量、大黃卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量和大白卵泡數(shù)量均降低，造成卵泡膜結(jié)構(gòu)松散、卵泡顆粒細(xì)胞損傷，這表明高環(huán)境溫度可能對(duì)家禽卵泡發(fā)育有直接的傷害。

3.2" 斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能的影響機(jī)制

類(lèi)胡蘿卜素已被證實(shí)對(duì)蛋雞的生產(chǎn)性能有促進(jìn)作用。目前，在飼糧中添加斑蝥黃對(duì)懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能影響的研究較少。有研究結(jié)果證實(shí)，常溫環(huán)境中在飼糧中添加斑蝥黃，蛋雞的產(chǎn)蛋性能無(wú)顯著提升，而本研究中，在飼糧中添加斑蝥黃對(duì)常溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞的產(chǎn)蛋性能和生殖激素水平有一定提升作用，可能與基因型的隨機(jī)選擇有關(guān)，不同遺傳群體的家禽對(duì)相同補(bǔ)充劑的反應(yīng)可能不同。

本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，在循環(huán)高溫環(huán)境中，相較于HC處理，飼糧中添加斑蝥黃處理的懷鄉(xiāng)雞的整體日均采食量、平均蛋重、產(chǎn)蛋率上升，蛋破損率下降。血清中促卵泡素（FSH）、黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P4）水平整體上升，等級(jí)卵泡數(shù)量、小黃卵泡數(shù)量、大黃卵泡數(shù)量、小白卵泡數(shù)量和大白卵泡數(shù)量整體增多。說(shuō)明斑蝥黃可以促進(jìn)循環(huán)高溫中種雞垂體分泌FSH和LH，提高卵泡合成、分泌E2、P4的能力。

線粒體內(nèi)膜上分布大量的生殖激素合成酶，是合成生殖激素的場(chǎng)所。斑蝥黃和蝦青素同為酮式類(lèi)胡蘿卜素，具有抗氧化特性，類(lèi)胡蘿卜素因其自身的抗氧化特性可以保護(hù)細(xì)胞線粒體免受應(yīng)激損傷，蝦青素作為一種抗氧化劑能緩解氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的線粒體功能障礙。Dai等發(fā)現(xiàn)，蝦青素可作用于小鼠下丘腦和卵巢，緩解下丘腦和卵巢的衰老，提高生育力。Wang等的研究結(jié)果表明，將斑蝥黃添加到雞的飼糧中可以顯著增加卵泡直徑，促使卵泡更快地成熟和排卵，提高產(chǎn)蛋率。斑蝥黃可以直接作用于卵巢，促進(jìn)卵泡細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，從而提高卵巢重和卵細(xì)胞數(shù)量。Jan等研究發(fā)現(xiàn)，將斑蝥黃注射到母雞卵巢中，可以顯著增加卵巢重和卵泡數(shù)量，并促進(jìn)卵泡細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)。有研究結(jié)果顯示，蝦青素可以提高牛卵母細(xì)胞核的成熟率，抑制卵母細(xì)胞中活性氧（ROS）的作用，抑制顆粒細(xì)胞的黃體化，促進(jìn)卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)和成熟。

現(xiàn)階段，關(guān)于對(duì)斑蝥黃影響循環(huán)高溫環(huán)境中家禽卵泡發(fā)育的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加斑蝥黃可以提高循環(huán)高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞血清中生殖激素水平、各級(jí)卵泡數(shù)量，并改善卵泡膜結(jié)構(gòu)，由此推測(cè)斑蝥黃具有強(qiáng)大的抗氧化特性，可以提高下丘腦和垂體的激素分泌水平，緩解熱應(yīng)激對(duì)細(xì)胞線粒體的不利影響，調(diào)節(jié)生殖激素水平，改善卵泡膜結(jié)構(gòu)，使各級(jí)卵泡正常發(fā)育并排出，從而提高家禽產(chǎn)蛋性能。斑蝥黃屬類(lèi)胡蘿卜素，可能和蝦青素有相似的功能，目前相關(guān)研究主要集中于蝦青素對(duì)哺乳動(dòng)物的影響。

在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)斑蝥黃可以緩解高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞血清生殖激素水平、各級(jí)卵泡數(shù)、卵泡結(jié)構(gòu)的不利影響，但對(duì)于斑蝥黃如何提高懷鄉(xiāng)雞生殖激素的分泌水平，如何緩解高溫對(duì)懷鄉(xiāng)雞下丘腦-垂體-性腺軸的損傷，以及如何保證高溫環(huán)境中懷鄉(xiāng)雞生殖功能的正常發(fā)揮，機(jī)制有待進(jìn)一步研究。斑蝥黃可以通過(guò)多種途徑影響雞的生殖功能，包括刺激卵泡成熟和排卵、增加卵巢重和卵泡數(shù)量、抑制生殖激素合成和釋放等，這為斑蝥黃在雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ)。

4" 結(jié)論

與常溫相比，高溫會(huì)顯著降低懷鄉(xiāng)雞母雞的產(chǎn)蛋性能、血清生殖激素水平及各級(jí)卵泡數(shù)量，導(dǎo)致卵泡膜結(jié)構(gòu)松散。常溫環(huán)境下，在飼糧中添加斑蝥黃對(duì)提高懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能、血清激素水平具有一定作用，但對(duì)卵泡膜結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響。高溫環(huán)境中，在飼糧中添加斑蝥黃可以改善懷鄉(xiāng)雞產(chǎn)蛋性能、血清激素水平，促進(jìn)卵泡發(fā)育，緩解高溫對(duì)卵泡結(jié)構(gòu)和卵泡顆粒細(xì)胞的損傷。其機(jī)制可能是斑蝥黃具有抗氧化功效，可以調(diào)節(jié)血清生殖激素水平和卵泡結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)排卵，提高家禽產(chǎn)蛋性能。

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（責(zé)任編輯：成紓寒）