◎ 陳金余，李貝貝

（深圳信測(cè)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，廣東 深圳 518000）

飲料是人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢扇鄙俚囊徊糠?，商超?nèi)擺設(shè)的飲料數(shù)不勝數(shù)，琳瑯滿(mǎn)目。甜味劑是一種用于改善食品風(fēng)味的添加劑，人工合成的甜味劑由于在人體內(nèi)不進(jìn)行代謝吸收、熱量低、用量少而得到廣泛使用。防腐劑是用于抑制有害微生物活動(dòng)、防止食品腐敗變質(zhì)、延長(zhǎng)貨架期、保持食品原有品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的添加劑。其中，人工食用合成著色劑是人工合成的用以改善食品色澤的物質(zhì)，具有色澤鮮艷、性質(zhì)穩(wěn)定、使用成本低等優(yōu)點(diǎn)。基于此，本研究通過(guò)建立可以同時(shí)測(cè)定飲料中3 種防腐劑、2 種甜味劑和6 種色素的方法，旨在提高日常檢測(cè)效率，為廣大檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

設(shè)備：Agilent 1260（美國(guó)安捷倫公司）、MS205DU電子天平（十萬(wàn)分之一）、JA5103N 電子天平（千分之一）。實(shí)驗(yàn)室用水均為一級(jí)水，試劑信息詳見(jiàn)下表1，實(shí)驗(yàn)所用飲料均來(lái)自市售。

表1 試劑及標(biāo)準(zhǔn)溶液信息一覽表

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

①亞鐵氰化鉀溶液（92 g·L-1）：稱(chēng)取106 g 亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL；②乙酸鋅溶液（183 g·L-1）：稱(chēng)取220 g 乙酸鋅溶于少量水中，加入30 mL 冰乙酸，用水定容至1 000 mL；③苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 000 μg·mL-1）：分別準(zhǔn)確稱(chēng)取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸 10.0 mg（精確至0.1 mg)，轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。④混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液配制（50 μg·mL-1）：分別從每種標(biāo)準(zhǔn)貯備液中準(zhǔn)確移取 0.500 mL 置于同一10 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，得到濃度為 50 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。⑤10 mol·L-1的NaOH：稱(chēng)取440 g 氫氧化鈉，用無(wú)二氧化碳的水分批次將氫氧化鈉轉(zhuǎn)移至1 L 的容量瓶中，轉(zhuǎn)移完后，用無(wú)二氧化碳的水定容至刻度。⑥0.02 mol·L-1乙酸銨溶液：稱(chēng)取1.54 g 乙酸銨于1 L的容量瓶中，用一級(jí)水定容至刻度。

1.2.2 樣品前處理

稱(chēng)取樣品5.000 g（精確至 0.001 g）至 25 mL 離心管（酒類(lèi)、碳酸飲料需先加熱超聲20 min除去二氧化碳、酒精），加水約10 mL，渦旋混勻，于50 ℃水浴超聲20 min，冷卻至室溫后定容至刻度后搖勻作為待測(cè)液。如果是蛋白質(zhì)含量較高的飲料，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL 和乙酸鋅溶液2 mL，并定容至刻度后搖勻，于8 000 r·min-1離心5 min，上清液為待測(cè)液。用10 mol·L-1的NaOH 調(diào)pH 至9～10，并定容。將待測(cè)液的pH 調(diào)到9～10 之間過(guò)0.22 μm 聚四氟乙烯濾膜，超高效液相色譜測(cè)定。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱：Agilent；類(lèi)型C18；規(guī)格：250×4.6 mm；流動(dòng)相：A 為0.02 mol·L-1乙酸銨溶液；B為甲醇二極管陣列檢測(cè)器；（DAD）程序：

通道1：DAD1 A,Sig=254,4 Ref=360

通道2：DAD1 B,Sig=230,4 Ref=360

通道3：DAD1 C,Sig=595,4 Ref=360

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理的優(yōu)化

結(jié)合GB 5009.28—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》[1]、GB/T 5009.140—2003《飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》[2]、GB 5009.35—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》和GB 5009.121—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脫氫乙酸的測(cè)定》[3]標(biāo)準(zhǔn)中的前處理試劑選擇驗(yàn)證，最終樣品的定容液為一級(jí)水。經(jīng)測(cè)試，結(jié)果表明統(tǒng)一選擇用一級(jí)水作為最后的定容液，回收率不會(huì)有影響，簡(jiǎn)化了前處理過(guò)程。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

將混合溶液中間配置液注入超高效液相色譜，分別用0.02 mol·L-1乙酸銨和0.02 mol·L-1硫酸銨作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，洗脫梯度相同，考察不同流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)物的分離效果的影響。結(jié)果表明，用0.02 mol·L-1乙酸銨作流動(dòng)相，可以使3 種防腐劑、2 種甜味劑和6 種色素徹底分開(kāi)，但是需注意柱溫不得超過(guò)35℃。具體標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 50 μg·mL-1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.3 線性范圍與檢出限

本研究檢測(cè)結(jié)果中，各種防腐劑和甜味劑的檢出限為0.1 mg·kg-1，定量限為0.3 mg·kg-1，各種色素的檢出限為0.2 mg·kg-1，定量限為0.6 mg·kg-1，線性范圍均為0.5～50μg·mL-1。檢出限和定量限均滿(mǎn)足GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中的限制要求，且每種線性方程的相關(guān)系數(shù)均＞0.99，符合GB/T 27417—2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》對(duì)于定量線性方程的要求。

2.4 回收率和精密度

稱(chēng)取陰性樣品的飲料，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液配制成0.3、2.5、5 mg·kg-1。每個(gè)添加水平為3，按照上述前處理方法配制成待測(cè)液，進(jìn)入高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)。這11 個(gè)項(xiàng)目的回收率均在87.8%～103%，RSD 值均小于0.43%。結(jié)果表明，3種濃度下的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿(mǎn)足GB/T 27417—2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》的要求，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 飲料中3 種防腐劑、2 種甜味劑和6 種色素的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表（n=6）

3 結(jié)語(yǔ)

本文建立了一種高效液相色譜法，可同時(shí)檢測(cè)飲料中3 種防腐、2 種甜味劑和6 種色素的方法。具體來(lái)說(shuō)，本方法采用純水提取所有目標(biāo)物質(zhì)的手段，且在流動(dòng)相中加入一定量的甲醇，并優(yōu)化梯度洗脫程序[4-5]，使安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)在反向C18 色譜柱上得到良好的分離。結(jié)果顯示，這種方法解決了日常色素和防腐劑分開(kāi)檢測(cè)浪費(fèi)時(shí)間的弊端，簡(jiǎn)單、快捷，在提高工作效率的同時(shí)，也節(jié)約了實(shí)驗(yàn)室的成本，適合第三方檢測(cè)公司檢測(cè)飲料時(shí)使用。