李公奇，姜艷，張曉卉

（1.臨沂市中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，山東 臨沂 276003；2. 臨沂市中醫(yī)醫(yī)院肛腸科，山東 臨沂 276003）

低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）由一系列密度、體積、理化特征不同的顆粒組成，存在明顯的異質(zhì)性。 小而密低密度脂蛋白膽固醇（Small and low density lipoprotein cholesterol，sdLDL-C）為LDL 亞組分之一，是心腦血管疾病的獨立危險因素[1]。 目前臨沂地區(qū)的sdLDL-C 基線水平不明， 實驗室大多直接引用試劑生產(chǎn)廠家提供的生物參考區(qū)間，但因地域、種族等原因， 引用的參考區(qū)間與本地區(qū)居民的實際參考區(qū)間之間可能會存在一定差異[2]；另外，不同的檢測系統(tǒng)得到的檢測結(jié)果也存在一定差異。 試劑說明書中明確指出，實驗室應(yīng)該根據(jù)實際情況，建立適合本地區(qū)人群的參考區(qū)間[3]。 因此，不同地區(qū)、不同性別、 不同年齡段建立相應(yīng)的正常參考區(qū)間是很有必要的[4]。 本研究旨在初步建立臨沂地區(qū)健康成人sdLDL-C 的參考區(qū)間， 為臨沂市的醫(yī)學(xué)實驗室提供參考。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 依據(jù)WS/T 402-2012 《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》[5]中對參考個體的篩選標(biāo)準(zhǔn)， 選取2020 年3 月至12 月在我院正常體檢成人3 791 名，其中男性1 651 名，年齡18～93 歲，女性2 140 名，年齡18～92 歲。 所有入選者經(jīng)詢問病史、血清學(xué)檢查、心電圖、超聲波檢查等排除心腦血管疾病、惡性腫瘤、糖尿病、高血壓、高脂蛋白血癥、肝臟腎臟疾病，且半年內(nèi)均未服用降血脂藥物。

1.2 儀器與試劑 采用Beckman AU5821 全自動生化分析儀，試劑、校準(zhǔn)液、質(zhì)控品均由浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)，檢測系統(tǒng)精密度、正確度均已通過驗證。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集及處理 所有樣本均在空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min，2 h 內(nèi)完成血清sdLDL-C 的檢測， 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作，準(zhǔn)確記錄數(shù)據(jù)。

1.3.2 樣本分組 依據(jù)世界衛(wèi)生組織對年齡段劃分標(biāo)準(zhǔn)將男、 女各分為3 組：18～44 歲為青年組，45～59 歲為中年組，≥60 歲為老年組。 樣本共分6 組，每組樣本數(shù)n≥120 例。

1.3.3 剔除離群值 參考CLSI EP28-A3c 文件[6]，采用Dixon法剔除離群值，離群值判斷標(biāo)準(zhǔn)為疑似離群值與相鄰值之差（D）與數(shù)據(jù)全距（R）比值D/R≥1/3，若有離群值應(yīng)剔除并補充上其他數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 以Kolmogorov-Smirnov法進(jìn)行正態(tài)性檢驗，樣本sdLDL-C 在各組中的分布均為非正態(tài)分布，在統(tǒng)計學(xué)描述時采用中位數(shù)（四分位數(shù)）M（P25~P75）表示，兩組間比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗， 多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行sdLDL-C 水平與年齡的相關(guān)性分析；采用百分位數(shù)法建立sdLDL-C 的參考區(qū)間。

1.5 參考區(qū)間的驗證 每組隨機選取20 份健康人群血清樣本（男女各半），按照sdLDL-C 的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行檢測，根據(jù)WS/T402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》[5]的要求，檢測結(jié)果應(yīng)有90%落在區(qū)間內(nèi)， 即不超過2 個超出參考區(qū)間時驗證通過。

2 結(jié)果

2.1 與試劑盒提供的參考區(qū)間比對 本研究3 791例樣本呈非正態(tài)分布， 采用百分位數(shù)法建立P2.5～P97.5的參考區(qū)間，與試劑盒提供的參考區(qū)間比較有差異，見表1。

表1 臨沂地區(qū)健康成人與試劑盒sdLDL-C 參考區(qū)間的比對（P2.5～P97.5，mmol/L）

2.2 不同性別、不同年齡組sdLDL-C 分布情況 將3 791 例樣本按性別、 年齡劃分為6 組進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 男性中年組（45～59歲）sdLDL-C 水平明顯高于青年組（18～44 歲）和老年組（≥60 歲），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 女性中年組（45～59 歲）和老年組（≥60 歲）sdLDL-C 水平明顯高于青年組（18～44 歲），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 青年組（18～44 歲）sdLDL-C 水平男性高于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 中年組（45～59 歲）、老年組（≥60 歲）sdLDL-C 水平男、女差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.158，P=0.114），見表2。

表2 不同性別、不同年齡組sdLDL-C 分布[M（P25～P75），mmol/L]

2.3 不同性別sdLDL-C 分布與年齡相關(guān)性分析男、 女兩組樣本與年齡均為非正態(tài)分布， 采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行分析， 男性sdLDL-C 水平與年齡無相關(guān)性（P＞0.05，r=0.016），女性sdLDL-C 水平與年齡呈顯著性正相關(guān)(P<0.05，r=0.254)，見表3。

表3 不同性別sdLDL-C 分布與年齡相關(guān)性分析

2.4 各組人群sdLDL-C 參考區(qū)間的建立， 男性各組間sdLDL-C 水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義， 需分組建立參考區(qū)間；女性中年組（45～59 歲）與老年組（≥60 歲）sdLDL-C 水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，合并為一組，女性青年組（18～44 歲）單獨一組，見表4。

表4 各組人群sdLDL-C 參考區(qū)間（P2.5～P97.5，mmol/L）

2.5 參考區(qū)間的驗證 以上三組每組各選取20 例健康體檢個體， 測定結(jié)果均在建立的參考區(qū)間范圍內(nèi)，符合參考區(qū)間驗證的要求，說明本研究建立的參考區(qū)間可以用于臨床。

3 討論

小而密低密度脂蛋白膽固醇（sdLDL-C）被美國膽固醇教育計劃委員會列入新發(fā)現(xiàn)的成人心血管疾病的重要危險因素之一[7-8]。 sdLDL-C 可自由穿過血管壁，極易氧化，并能募集巨噬細(xì)胞吞噬被氧化的LDL，形成泡沫細(xì)胞，聚集到動脈壁[9]，不易通過受體介導(dǎo)的途徑被清除， 導(dǎo)致其蓄積于血管壁，對血管壁造成持續(xù)損傷[10-11]，加重心肌梗死病情。 近年來，sdLDL-C 水平的檢測在國內(nèi)外受到普遍的重視， 國內(nèi)許多醫(yī)學(xué)實驗室已逐步實現(xiàn)對sdLDL-C 的檢測。 但是，由于地域、種族等差異，sdLDL-C 在人群中的分布很難進(jìn)行統(tǒng)一[12]，本實驗室使用的廠家提供的參考區(qū)間源于浙江、 北京和山東地區(qū)的360 例健康人群， 其sdLDL-C 分布水平與本地區(qū)人群的分布水平差異較大。 因此，非常有必要根據(jù)臨沂地區(qū)人群的sdLDL-C 分布情況來建立相應(yīng)的參考區(qū)間， 為臨沂市的醫(yī)學(xué)實驗室提供參考。

本研究發(fā)現(xiàn)， 臨沂地區(qū)sdLDL-C 水平在人群中的分布存在性別、年齡的差異，不能直接引用試劑廠家提供的單一參考區(qū)間。 男性各年齡段sdLDL-C 水 平 有 顯 著 性 差 異，45 ～59 歲 男 性sdLDL-C 水平明顯高于其他年齡段， 其sdLDL-C分布與年齡無相關(guān)性；45 歲以上女性sdLDL-C 水平明顯高于18～44 歲女性， 其sdLDL-C 分布與年齡呈顯著性正相關(guān)，表明女性隨著年齡的增長，其體內(nèi)sdLDL-C 水平逐漸增高， 這可能和雌性激素的相關(guān)保護機制有關(guān)， 絕經(jīng)前女性的保護性脂蛋白水平較高[13]，這就是年齡較大的婦女患心血管疾病的風(fēng)險明顯增加的原因， 與LDL-C 各組分的不同分布密切相關(guān)[14]；18～44 歲男性sdLDL-C 水平明顯高于同年齡段女性，這與吳燕等[15]的研究結(jié)果一致。本研究認(rèn)為，男性各年齡組間sdLDL-C 水平有顯著性差異，需分組建立參考區(qū)間；女性中年組、老年組間sdLDL-C 水平無顯著性差異， 可合并為一組，女性青年組需單獨建立參考區(qū)間。 建立本地區(qū)sdLDL-C 的生物水平參考區(qū)間對個體化醫(yī)療發(fā)展有重大意義。

本研究中因受青少年（18 歲以下）人群樣本采集所限， 未將18 歲以下健康人群列入調(diào)查之列，只初步建立了健康成人的sdLDL-C 參考區(qū)間，且納入的3 791 名健康成人在需要根據(jù)性別、年齡分組的情況下樣本量還不夠， 研究存在一定的局限性。 在下一步的研究中，將聯(lián)合多家地市醫(yī)院采集樣本進(jìn)行統(tǒng)計分析，并將18 歲以下健康人群納入研究中，建立大區(qū)域性人群的sdLDL-C 參考區(qū)間，這樣會更具實際應(yīng)用價值。