張云帆，崔亞飛

（1.鄭州人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450000；2.鄭州兒童醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450000）

近年來，乳腺癌發(fā)病率呈明顯增長、年輕化趨勢[1]，流行病學調(diào)查顯示，到2021 年，乳腺癌發(fā)病率預計將增加到每10 萬名女性中85 人[2]，已成為嚴重危害女性健康的主要疾病之一。 乳腺癌早期無典型性臨床癥狀，僅利用影像學檢查，難以獲得較高檢出率。 隨生物學方向?qū)θ橄侔┻z傳及表觀遺傳的深入研究， 生物標志物在乳腺疾病早期診斷中的價值逐漸受到臨床關(guān)注。 鐵蛋白（SF）可參與多種組織細胞代謝，參與惡性腫瘤發(fā)生、進展過程[3]。 胰島素樣生長因子-1（IGF-1）能刺激腫瘤細胞分裂，增加其惡性程度，提高其轉(zhuǎn)移潛力[4]。 泛素偶聯(lián)酶E2C（UBE2C）可調(diào)控細胞有絲分裂，調(diào)節(jié)細胞周期進展，其水平高表達參與惡性腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移[5]。本研究探討了血清SF、IGF-1、UBE2C在乳腺疾病良惡性診斷中意義及與臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2013 年8 月至2016年12 月我院乳腺癌患者96 例為惡性組， 其中臨床分期Ⅰ～Ⅱ期56 例， Ⅲ期40 例；68 例乳腺良性疾病患者為良性組，其中乳腺炎14 例，乳腺增生23 例，乳腺纖維瘤19 例，乳腺囊腫12 例，另選取同期健康體檢者68 例為健康組。3 組年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、體質(zhì)量指數(shù)比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），惡性組血清腫瘤標志物［糖類抗原153（CA153）、糖類抗原125（CA125）、癌胚抗原（CAE）］水平高于良性組（P＜0.05）。見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

表1 3 組一般資料比較（±s）［n(%)］

注：“-”表示無需進行該指標對比。

一般資料 惡性組（n=96） 良性組（n=68） 健康組（n=68） F/χ2 P年齡（歲）體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）絕經(jīng)49.18±5.33 22.19±1.50 48.79±5.01 21.98±1.42 47.33±8.24 21.65±2.09 1.835 2.073 0.162 0.128是否血清腫瘤標志物CA125（U/ml）CAE（μg/L）CA153（U/ml）31（32.29）65（67.71）155.98±32.49 12.08±4.01 17.50±3.64 21（30.88）47（69.12）47.18±10.09 9.70±2.26 8.87±1.49 19（27.94）49（72.06）26.31±5.69 3.09±1.33 2.67±0.92 0.358 853.866 190.282 707.732 0.836＜0.001＜0.001＜0.001

1.2 納入排除標準

1.2.1 納入標準 （1）惡性組均經(jīng)手術(shù)病理學檢查證實為乳腺癌， 良性組均經(jīng)B 超等影像學檢查確診為乳腺良性疾??；（2） 患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 （1）肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；（2）Ⅳ期乳腺癌等不符合手術(shù)指征者；（3）凝血機制紊亂或活動性內(nèi)出血者；（4）嚴重心腦血管疾病者；（5）其他部位惡性腫瘤者；（6）精神行為異常者。

1.3 檢測方法 空腹取3 mL 靜脈血，離心12 min，3 000 r/min，分離取血清。（1）采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清IGF-1、UBE2C 水平，試劑盒購自深圳市科潤達生物工程有限公司， 操作步驟： 設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。 酶標包被板上標準孔加入50 μL 樣品， 待測樣品孔分別加入40 μL 樣品稀釋液、10 μL 待測樣品，輕輕搖勻，封板，置于37 ℃溫水中，促使抗體與抗原充分反應(yīng)。溫育30 min 后每孔均加入洗滌液， 重復洗滌5 次， 拍干后加50 μL 酶標試劑，并置于37 ℃溫水溫育30 min。 重復洗滌5 次，拍干，加顯色劑。37 ℃避光顯色10 min，于每孔加50 μL 終止液，終止反應(yīng)。15 min 內(nèi)450 nm 波長依序測量各孔吸光度。 （2）采用E-170 電化學發(fā)光分析儀及配套試劑盒檢測血清SF 水平，嚴格按照德國羅氏診斷有限公司提供的儀器及配套試劑盒說明書操作。

1.4 治療方法 惡性組均實施改良乳腺癌根治術(shù)，良性組則予以弧形切口切除手術(shù)。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0 軟件分析處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料采用（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗，不符合正態(tài)分布的計量資料采用中位數(shù)表示，非參數(shù)秩和檢驗，計數(shù)資料用n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗， 采用Spearman進行相關(guān)性分析，采用受試者工作特征曲線 （Receiver operating characteristic，ROC） 分析診斷價值，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較 惡性組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平高于良性組、 健康組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 3 組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

表2 3 組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

組別 n惡性組良性組健康組96 68 68 FP SF（ng/mL） IGF-1（ng/mL）128.37±36.92 70.02±24.15 51.97±20.64 154.827＜0.001 204.29±41.30 116.94±29.42 79.28±24.65 299.789＜0.001 UBE2C（pg/mL）837.32±164.19 304.08±69.05 267.91±54.02 638.386＜0.001

2.2 血清各指標水平與乳腺癌患者血清腫瘤標志物關(guān)聯(lián)性Spearman相關(guān)性分析顯示， 血清SF、IGF-1、UBE2C 水平與乳腺癌患者血清CA153、CA125、CAE 水平呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。 見表3。

表3 血清各指標與乳腺癌患者血清腫瘤標志物關(guān)聯(lián)性

2.3 血清指標單一診斷乳腺疾病良惡性ROC曲線通過繪制ROC曲線可知，血清UBE2C 診斷乳腺疾病良惡性曲線下面積（AUC）為0.813，明顯大于SF（0.804）、IGF-1（0.733）。 見表4、圖1。

圖1 血清指標單一診斷乳腺疾病良惡性ROC 曲線

表4 血清指標單一診斷乳腺疾病良惡性ROC 曲線分析

2.4 血清指標聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的ROC曲線 血清SF、IGF-1、UBE2C 聯(lián)合診斷時采取Logistic二元回歸擬合，返回預測概率logit(p)，將其作為獨立檢驗變量繪制ROC曲線， 得出各指標聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的AUC為0.875，95%CI為0.814～0.921，敏感度為72.92%，特異度為86.76%。見圖2。

圖2 血清指標聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的ROC 曲線

2.5 惡性組不同臨床病理參數(shù)患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較 不同腫瘤大小患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平相比， 差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）； Ⅲ期、 中低分化、 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。 見表5。

表5 惡性組不同臨床病理參數(shù)患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

表5 惡性組不同臨床病理參數(shù)患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

項目 n SF（ng/mL） t P腫瘤大小t P IGF-1（ng/mL） t P UBE2C（pg/mL）0.464 0.644 0.741 0.461 0.425 0.672臨床分期9.292＜0.001 9.393＜0.001 3.881＜0.001組織分化程度＞2 cm≤2 cmⅢ期Ⅰ～Ⅱ期中低分化高分化6.467＜0.001 7.140＜0.001 3.039 0.003淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無44 52 40 56 34 62 46 50 130.25±39.18 126.78±34.07 169.54±43.85 98.96±30.62 160.28±41.02 110.87±32.63 149.72±40.76 108.73±34.35 5.342＜0.001 207.68±42.92 201.42±39.78 252.84±53.97 169.61±32.65 244.75±50.90 182.10±34.69 229.81±45.86 180.81±37.72 5.736＜0.001 845.04±170.21 830.79±158.16 916.41±194.23 780.83±148.07 906.38±186.20 799.45±152.11 876.42±179.23 801.35±154.09 2.206 0.030

2.6 血清各指標與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性 以乳腺癌患者臨床病理參數(shù)為因變量， 血清SF、IGF-1、UBE2C 表達為自變量進行的Spearman相關(guān)性分析顯示， 上述血清指標與患者腫瘤大小無明顯相關(guān)性（P＞0.05）；上述血清指標與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)，與組織分化程度呈顯著負相關(guān)（P＜0.05）。 見表6。

表6 血清SF、IGF-1、UBE2C 與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性

3 討論

數(shù)據(jù)顯示，30.0%左右乳腺癌患者確診時已處于中晚期，喪失最佳手術(shù)時機[6]。 同時乳腺癌病程較長， 術(shù)后5 年生存率＜30.0%[7]。 CA153、CA125、CAE 為臨床常用診斷乳腺癌的血清腫瘤標志物[8]，但其特異性較差。 因此研究新的高特異性血清腫瘤標志物，探索乳腺癌發(fā)生、發(fā)展機制是目前臨床亟待解決問題之一。

SF 主要生物學功能為貯存鐵和調(diào)節(jié)腸黏膜對鐵的吸收，可有效反映機體鐵儲備含量，促進腫瘤細胞增殖[9]。通過研究96 例乳腺癌患者、68 例乳腺良性疾病患者可知，血清SF 水平與乳腺癌患者血清CA153、CA125、CAE 水平存在明顯正相關(guān)關(guān)系，與王軍梅等[10]研究相似。 SF 水平升高會導致含鐵黃素在組織中大量沉積，引發(fā)氧化損傷，乳腺癌細胞異常增殖[11]。

UBE2C 是泛素結(jié)合酶家族的重要成員， 在泛素蛋白酶途徑（UPS）中具有重要作用[12]。 UPS 通路失調(diào)會異常降解一些癌基因及腫瘤抑制基因編碼蛋白，造成體內(nèi)蛋白蓄積，參與癌癥病程進展[13]。本研究結(jié)果顯示，血清UBE2C 水平在乳腺癌患者中呈高表達，與魏震[14]觀點一致，并與乳腺癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在正相關(guān)性，與組織分化程度存在負相關(guān)性。ROC曲線顯示，UBE2C 診斷乳腺疾病良惡性AUC最大， 為0.813， 且特異度高達85.29%，提示UBE2C 有望成為鑒別乳腺疾病良惡性的特異性血清標志物。

研究結(jié)果顯示，IGF-1 可作用于乳腺細胞基質(zhì)，刺激乳腺癌患者雌激素活性，提高機體雌激素水平，異常增生乳腺導管上皮細胞，促進乳腺癌發(fā)生、發(fā)展[15]。Spearman相關(guān)性分析顯示，血清IGF-1與乳腺癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度存在一定相關(guān)性。

本研究采用聯(lián)合應(yīng)用模式， 結(jié)果顯示， 血清SF、IGF-1、UBE2C 聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的AUC為0.875，特異度可達86.76%，可見血清SF、IGF-1、UBE2C 聯(lián)合診斷具有成為乳腺良惡性疾病診斷指標的潛力。