姬生威 王萍

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer ,NSCLC)早期臨床表現(xiàn)不明顯,臨床診斷多以中晚期為主,生存率較低[1]。腫瘤根治術(shù)是治療腫瘤的最佳手段,但術(shù)后生存率仍較低,術(shù)后常以放化療輔助,但其治療療效和預(yù)后程度差異較大。有研究指出,腫瘤突變負(fù)荷(tumor mutation load,TMB)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI)對腫瘤預(yù)后有著密切關(guān)系[2]。術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是影響病人生存率的主要因素之一,化療療效與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的發(fā)生有著直接影響的關(guān)系。本研究分析MSI聯(lián)合TMB對NSCLC術(shù)后病人復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的評估價值。

對象與方法

一、對象

2020年3月～2021年3月本院收治的NSCLC病人病理組織標(biāo)本80例,男42例,女38例。根據(jù)術(shù)后是否發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移分為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組(47例)和未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組(33例)。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組:男∶女(例)=29∶18,平均年齡(64.54±3.47)歲,鱗癌∶非鱗癌=14∶33。未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組:男∶女(例)=13∶20,平均年齡(63.79±2.53)歲,鱗癌∶非鱗癌=12∶21。兩組性別年齡等比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素分析

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)符合肺癌根治術(shù)適應(yīng)癥并同意手術(shù)且手術(shù)順利;(3)已留存癌組織病理組織標(biāo)本及靜脈血標(biāo)本;(4)完成1年以上隨訪;(5)術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者均已經(jīng)影像學(xué)或病理診斷進(jìn)行確診。排除標(biāo)準(zhǔn):病例資料缺失;合并其他惡性腫瘤;術(shù)前有接受免疫治療。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》。

二、方法

1.參考《非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療中國胸外科專家共識(2018版)》[3],兩組病人均行肺癌根治術(shù),術(shù)后均予以維持性化療。

2.臨床相關(guān)資料收集:自制信息調(diào)查表,以查閱病歷的方式收集病人臨床相關(guān)資料:性別、年齡、病理類型、吸煙史、腫瘤分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。資料收集均由專職人員負(fù)責(zé),采用雙人錄入法進(jìn)行登記核對。

3.MSI及TMB檢測:癌組織病理標(biāo)本經(jīng)固定、石蠟包埋后切片染色,靜脈血經(jīng)抗凝處理沉淀白細(xì)胞,提取腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞中DNA。MSI檢測采用PCR,經(jīng)變性、退火、延伸后,進(jìn)行電泳反應(yīng)(150 V),觀察電泳圖。與正常組織比較,任一電位電泳條帶有增多或減少的表現(xiàn)則為陽性,反之則為陰性。TMB采用基于Illumina測序平臺的5209ene panel NGS測序。TMB(mut/Mb)=總突變數(shù)量(包括同義、非同義點(diǎn)突變、置換、插入及缺失突變)/目標(biāo)區(qū)域編碼區(qū)大小,與白細(xì)胞數(shù)據(jù)對比。TMB突變個數(shù)在8個及以上為高TMB,反之則為低TMB。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料用例(%)表示,行χ2檢驗(yàn),Logistic回歸單、多因素分析影響病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的危險因素,評估價值以ROC曲線分析,聯(lián)合檢查采用并聯(lián),Delong Test函數(shù)比較不同檢測方案評估NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移ROC曲線之間AUC。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素分析:復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移可能與吸煙史、腫瘤分期高、低中分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MSI陰性、高TMB有關(guān)(P<0.05)。見表1。

2.影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素分析:將是否發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作為因變量,有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移=1;未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移=0,表1中有差異的自變量進(jìn)行賦值:吸煙史(是=1;否=0),腫瘤分期(Ⅲ期=1;Ⅱ期=0),腫瘤分化(低中分化=1;高分化=0),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1;否=0),MSI(陰性=1;陽性=0),TMB(高水平=1;低水平=0)。多因素分析結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高TMB是影響術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險因素(P均<0.05);MSI陽性是術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的保護(hù)因素(P<0.05)。見表2。

3.ROC曲線分析:MSI與TMB檢測均具有評估NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的價值(P<0.05),MSI AUC與 TMBAUC比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。聯(lián)合檢測AUC與MSIAUC比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),但與TMBAUC比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表2 影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素分析

表3 ROC曲線分析水平分析

討論

NSCLC臨床多采取術(shù)后放化療輔助[4],但仍有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可能性。本研究結(jié)果顯示,NSCLC術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移可能與存在吸煙史、腫瘤分期高、低中分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MSI陰性、高TMB有關(guān),與既往研究部分相似[5]。其原因可能是,非吸煙史病人的肺部對化療藥效的敏感性較高,降低復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險;腫瘤惡性程度越高,術(shù)中殘留的癌細(xì)胞惡性程度可能越高;存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人,癌細(xì)胞侵襲部分廣泛,術(shù)后癌細(xì)胞易感性可能高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,在受到外界一些致癌因素的刺激下易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

MSI是指腫瘤組織DNA多聚酶滑動導(dǎo)致重復(fù)序列中一個或多個堿基的錯配和微衛(wèi)星重組,導(dǎo)致堿基對缺失或插入,而造成微衛(wèi)星長度的改變,出現(xiàn)新的微衛(wèi)星等位基因現(xiàn)象,而錯配修復(fù)的基因突變導(dǎo)致DNA功能改變,易引發(fā)廣泛MSI[6]。本研究顯示,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者M(jìn)IS陽性率低于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者,提示MSI陽性與其術(shù)后預(yù)后具有顯著關(guān)系,與張文靜等[7]研究相似。MSI陽性的出現(xiàn),腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在大量的DNA功能缺失,基因轉(zhuǎn)錄功能減弱,可有效增加治療療效,降低術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。TMB是指腫瘤細(xì)胞基因組內(nèi)基因外顯子編碼區(qū)每兆堿基中發(fā)生置換和體細(xì)胞突變的總數(shù)。本研究顯示,NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的TMB水平較高,與既往研究相似[8]。腫瘤組織中突變的基因越多,就越有可能產(chǎn)生更多的異常的蛋白質(zhì),而這些異常的蛋白質(zhì)產(chǎn)生的抗原對機(jī)體免疫功能存在攻擊作用,增加病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。多因素分析結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MSI陽性、低TMB是影響術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險因素。ROC曲線顯示,MSI與TMB的檢測均具有評估病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的價值,兩者AUC比較無差異,聯(lián)合檢測的價值雖有所提高,但與TMB比較無顯著差異,提示臨床醫(yī)師可直接觀察NSCLC病人病理組織的TMB特征來對病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險進(jìn)行評估。