王娜，劉春靜，楊鈺杰，趙薇，劉麗晶

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江齊齊哈爾 161000；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院教務(wù)科，黑龍江齊齊哈爾 161000

根據(jù)子宮內(nèi)膜癌臨床特征可將其分為Ⅰ型和Ⅱ型兩大類(lèi)，其中Ⅰ型約占子宮內(nèi)膜癌病例的70%~80%，多見(jiàn)高分化，患者預(yù)后良好[1-2]；Ⅱ型約占子宮內(nèi)膜癌病例的10%~20%，具有較強(qiáng)的侵襲性、細(xì)胞分化程度低，預(yù)后較差[3-4]。雖然上述基因與子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后相關(guān)，但是仍存在一定的局限性。因此，臨床急需新的生物標(biāo)志物來(lái)分析子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后水平。細(xì)胞分裂周期蛋白20（cell division cycle 20, CDC20）是最早發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞周期中的有絲分裂異常相關(guān)的因子，其與染色體分離異常及蛋白-蛋白相互作用密切相關(guān)[5]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌等患者腫瘤干細(xì)胞中存在大量的CDC20，而CDC20 水平與癌癥患者預(yù)后水平密切相關(guān)[6-7]。但目前臨床并無(wú)關(guān)于CDC20 與子宮內(nèi)膜樣腺癌的研究，基于此，本研究將選取2020 年1 月—2021 年3 月于齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的96 例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象，探討CDC20 在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取本院收治入院的96 例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象。根據(jù)子宮內(nèi)膜癌組織中CDC20 表達(dá)將其分為CDC20 高表達(dá)組及CDC20 低表達(dá)組。本研究已通過(guò)本院醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)審批[齊倫審2021（102）號(hào)]。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)病理診斷確診為子宮內(nèi)膜癌；凝血功能正常；既往未接受過(guò)其他抗腫瘤治療；心、肺等功能正常；患者及家屬依從性較好，且精神正常；簽訂知情同意書(shū)者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患者不符合手術(shù)治療條件；在其他部位出現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞者；妊娠合并心肝腎等臟器功能不全者；合并其他腫瘤患者；嚴(yán)重全身免疫性疾病患者；近期進(jìn)行放、化療等抗癌治療患者；患者不愿意進(jìn)行手術(shù)治療者；不愿意參加本次研究者。

1.3 方法

組織中的CDC20 表達(dá)采用免疫組化法檢測(cè)：將患者癌組織及癌旁組織制備成石蠟切片，脫蠟，水化，修復(fù)，滅火內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，封閉，將美國(guó)Abcam 公司生產(chǎn)的一抗CDC20 按照1∶100 倍稀釋后，4℃下反應(yīng)12 h，切片，加入二抗，顯色，復(fù)染，染色情況采用光鏡觀察。雙盲法判斷結(jié)果，棕黃色為陽(yáng)性。染色強(qiáng)度評(píng)分：>75%的陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)4 分；51%~75%的陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)3 分；26%~50%的陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)2 分；1%~25%的陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)1分；無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞不計(jì)分。陰性表達(dá)為0~1 分，陽(yáng)性表達(dá)為2~12 分。染色強(qiáng)度評(píng)分：76%~100%計(jì)4分，51%~75%計(jì)3 分，26%~50%計(jì)2 分，5%~25%計(jì)1 分，<5%為0 分。總得分=染色范圍評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分。

CDC20 mRNA 水平采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)術(shù)中取患者癌組織和癌旁組織（距癌組織3 cm），將Trizol 試劑加入后提取RNA，檢測(cè)合格的樣本量，合成cDNA 模板鏈，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction, PCR）擴(kuò)增。反應(yīng)條件：下面過(guò)程連續(xù)40 個(gè)循環(huán)，3 min94℃預(yù)變性，30 s94℃變性，60℃退火30 s。采用2-??Ct 法，計(jì)算CDC20 mRNA 的相對(duì)表達(dá)水平。

CDC20 蛋白水平采用Western blotting 檢測(cè)，提取患者癌組織和癌旁組織（距癌組織3 cm），行電泳，轉(zhuǎn)至PVDF 膜上，加入CDC20 鼠單克隆抗體、抗β-actin 鼠單克隆抗體（1∶1 000）4℃孵育過(guò)夜，洗滌3 次；將羊抗鼠抗體（1∶4 000）室溫孵育1 h，洗滌3次，顯色，拍照。

1.4 觀察指標(biāo)

①兩組臨床病理特征的對(duì)比：對(duì)比兩組年齡、體質(zhì)指數(shù)（body mass index, BMI）、分娩次數(shù)、分娩方式、組織學(xué)分型、國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（federation international of gynecology and obstetrics, FIGO）分期、病理分級(jí)等。②子宮內(nèi)膜癌患者CDC20 表達(dá)情況的影響因素分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，采用Excel 建立數(shù)據(jù)庫(kù)。符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)的計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）和率（%）表示，比較采用采用χ2檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)；經(jīng)Cox 回歸分析子宮內(nèi)膜癌的影響因素。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床病理特征的對(duì)比

96 例子宮內(nèi)膜癌組織中CDC20 高表達(dá)69 例，低表達(dá)27 例。兩組年齡、BMI、分娩次數(shù)、分娩方式比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；兩組組織學(xué)分型、FIGO 分期、病理分級(jí)、CDC20mRNA 及CDC20 蛋白評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 子宮內(nèi)膜癌患者CDC20 表達(dá)情況的影響因素分析

經(jīng)Cox 回歸分析顯示，子宮內(nèi)膜癌患者CDC20表達(dá)情況的影響因素是FIGO 分期、病理分級(jí)、CDC20mRNA、CDC20 蛋白。見(jiàn)表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌患者CDC20 表達(dá)情況的影響因素分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率和致死率均較高。目前，子宮內(nèi)膜癌的早期診斷通常是根據(jù)患者的絕經(jīng)后出血等臨床表現(xiàn)及宮腔鏡下子宮內(nèi)膜活檢、診斷性刮宮為主，但若患者錯(cuò)失最佳的診斷時(shí)機(jī)，則會(huì)造成腫瘤轉(zhuǎn)移或術(shù)后復(fù)發(fā)，預(yù)后不佳。因此，臨床急需有效的、可靠的生物學(xué)標(biāo)記物，改善患者的預(yù)后[8-9]。CDC20 屬于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，位于染色體1p34.1。在細(xì)胞周期的不同時(shí)期CDC20 水平并不相同，細(xì)胞的G1 期內(nèi)并無(wú)CDC20表達(dá)，S 期則出現(xiàn)CDC20 表達(dá)，CDC20 在G2/M 期則達(dá)到一個(gè)峰值[10]。細(xì)胞處于有絲分裂后期時(shí)，則CDC20 能夠降解其蛋白依賴激酶和底物細(xì)胞周期蛋白等泛素化，其參與細(xì)胞調(diào)節(jié)。機(jī)體內(nèi)CDC20 水平異常則會(huì)造成有絲分裂出錯(cuò)，且會(huì)造成部分癌癥基因的過(guò)表達(dá)和抑癌基因的丟失或者突變。CDC20 水平高表達(dá)會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，也促使癌細(xì)胞自我修復(fù)能力提高，造成腫瘤患者腫瘤抑制失控[11]。CDC20 亦可緩沖腫瘤細(xì)胞凋亡速度，參與腫瘤的進(jìn)展。近年來(lái)，隨著SAC 與CDC20 關(guān)系的深入研究，臨床也越來(lái)越重視CDC20 與腫瘤的關(guān)系。

CDC20 在胃癌、卵巢癌、宮頸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、胰腺導(dǎo)管腺癌等惡性腫瘤中呈高表達(dá)，且參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程[12]。張哲等[13]的研究指出，CDC20 在乳腺癌中呈高表達(dá)，且與臨床分期密切相關(guān)，可預(yù)測(cè)患者的預(yù)后水平。在乳腺癌進(jìn)展中CDC20 能夠發(fā)揮重要作用，CDC20 參與腫瘤細(xì)胞的增殖，同時(shí)也與乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力相關(guān)，這可能在細(xì)胞有絲分裂后期中CDC20 也發(fā)揮了重要作用，其可以通過(guò)調(diào)節(jié)后期促進(jìn)復(fù)合體的活性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程。但目前臨床并無(wú)關(guān)于CDC20 與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究。本研究結(jié)果顯示，不同組織學(xué)分型、FIGO 分期、病理分級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中CDC20 表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示CDC20 與子宮內(nèi)膜癌患者組織學(xué)分型、FIGO 分期、病理分級(jí)密切相關(guān)。

目前的研究指出，治療如子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤疾病時(shí)需根據(jù)手術(shù)病理分期進(jìn)行區(qū)分，以明確手術(shù)治療的準(zhǔn)確性。FIGO 分期能夠?yàn)樽訉m內(nèi)膜癌的治療方案提供依據(jù)，其可確定患者的腫瘤分期，其能夠有效評(píng)估癌組織是否侵犯到陰道、直腸等組織，輔助檢查包括膀胱鏡等，其操作簡(jiǎn)單，具有較高的適應(yīng)性，直接影響到臨床決策及預(yù)后水平[14]。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌患者CDC20 表達(dá)情況的影響因素是FIGO分期（OR=2.604、95%CI=1.401~3.886，P<0.001）、病理分級(jí)、CDC20 陽(yáng)性，提示FIGO 分期、病理分級(jí)、CDC20mRNA、CDC20 蛋白是子宮內(nèi)膜癌患者CDC20 表達(dá)情況的影響因素。但楊影等[15]的研究指出，F(xiàn)IGO 分期（β=0.813、S.E.=0.189，Waldχ2=17.936、OR=2.255、95%CI=1.557~3.226，P=0.001）是子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的影響因素，與本研究結(jié)果相同。但本研究也存在不足之處，本研究所納入病例均為本院子宮內(nèi)膜癌患者，病例較少，后期應(yīng)聯(lián)合其他醫(yī)院擴(kuò)大比例人數(shù)進(jìn)一步研究證實(shí)。另外，且未進(jìn)行基礎(chǔ)研究，后期有機(jī)會(huì)希望通過(guò)基礎(chǔ)研究進(jìn)一步證實(shí)本研究結(jié)果。

綜上所述，不同組織學(xué)分型、FIGO 分期、病理分級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織與CDC20 表達(dá)密切相關(guān)，且癌組織中CDC20 表達(dá)高于癌旁組織，子宮內(nèi)膜癌患者CDC20 表達(dá)情況的影響因素是FIGO分期、病理分級(jí)、CDC20mRNA、CDC20 蛋白。