白 羽

福建省泉州市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 362000

乙型肝炎表面抗體(HBsAb)由乙型肝炎表面抗原(HBsAg)誘導(dǎo)產(chǎn)生,是乙型肝炎免疫力的重要標(biāo)志,檢測(cè)該抗體水平對(duì)于評(píng)估疫苗反應(yīng)至關(guān)重要[1-2]。在完成初次疫苗接種計(jì)劃1～2個(gè)月后,抗體水平>10mIU/ml 被認(rèn)為具有血清保護(hù)作用。隨著時(shí)間和年齡的增長(zhǎng),已知抗體滴度明顯降低,且部分個(gè)體可能對(duì)加強(qiáng)劑量反應(yīng)更好[3]。因此,測(cè)量HBsAb水平在暴露后預(yù)防的決策制定中起著重要作用?；瘜W(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法(CMIA)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)是兩種常用測(cè)量HBsAb的方法[4]。但ELISA和CMIA基于不同的測(cè)試原理,ELISA是一種直接的抗體夾心酶測(cè)定法,利用天然HBsAg(亞型ad和ay)作為固相,利用偶聯(lián)物和底物之間反應(yīng)產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度來(lái)測(cè)量存在的抗體量。CMIA則為化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與免疫反應(yīng)相結(jié)合的方法。與血清中的抗HbsAg結(jié)合的重組HBsAg包被的順磁性微粒和吖啶酯標(biāo)記的HBsAb的包被粒子作為綴合物,HBsAb抗體濃度由抗原抗體反應(yīng)發(fā)出的光決定,并使用相對(duì)光單位測(cè)量。研究報(bào)道,由于方法信號(hào)及方法學(xué)等方面的差異,CMIA及ELISA對(duì)HBsAb的測(cè)量數(shù)值可能存在不同[5]?；诖?本文對(duì)CMIA及ELISA檢測(cè)HBsAb的價(jià)值進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 樣本來(lái)源 隨機(jī)抽取我院2022年2—12月已按要求按時(shí)接種乙型肝炎疫苗接種的血液樣本共180份。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑:儀器:全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國(guó)雅培公司,型號(hào):Architect i2000SR)、全自動(dòng)酶標(biāo)儀(意大利 SEAC公司,型號(hào):Alisei)。試劑:CMIA法試劑盒、ELISA 法試劑盒分別由美國(guó)雅培公司、北京萬(wàn)泰公司提供。

1.2.2 檢測(cè)方法:ELISA法:按照全自動(dòng)操作流程規(guī)范對(duì)收集的180份血清樣本予以檢測(cè)。儀器檢測(cè)范圍為2～1 000mIU/ml,若檢測(cè)過(guò)程中某血清樣本檢測(cè)值超過(guò)儀器檢測(cè)上限(>1 000mIU/ml)則需對(duì)血清樣本進(jìn)行稀釋后再次予以檢測(cè)。以HBsAb水平≥10mIU/ml為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。CMIA法:將血清樣品加入96孔板相應(yīng)孔中后,添加50μl酶標(biāo)試劑,孵育60min;洗板顯色,對(duì)待測(cè)樣本抗體濃度予以定標(biāo)曲線計(jì)算濃度。HBsAb水平≥10mIU/ml為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn),以上嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作。檢測(cè)前均進(jìn)行精密度、正確度驗(yàn)證及線性評(píng)價(jià)。

1.3 觀察指標(biāo) 分別從定性檢測(cè)和定量檢測(cè)兩個(gè)方面對(duì)比CMIA法和ELISA法檢測(cè)HBsAb的價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 CMIA法和ELISA法定性檢測(cè)HBsAb結(jié)果的一致性對(duì)比 180份血清樣本中,CMIA法檢測(cè)陽(yáng)性170例,陰性10例,陽(yáng)性率為94.44%, ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性164例,陰性16例,陽(yáng)性率為91.11%,兩組陽(yáng)性率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且一致性檢驗(yàn)顯示Kappa值=0.752>0.75,提示上述方法定性檢測(cè)HBsAb結(jié)果一致性好,見(jiàn)表1。

表1 CMIA法和 ELISA法定性檢測(cè)結(jié)果一致性對(duì)比

2.2 CMIA法和ELISA法定量檢測(cè)HBsAb結(jié)果對(duì)比 Bland-Altman圖顯示:兩種方法平均差值為356.4mIU/ml>0,CMIA法和ELISA法定量檢測(cè)結(jié)果一致性差,見(jiàn)圖1。

圖1 CMIA法和ELISA法檢測(cè)HBsAb水平Bland-Altman圖

2.3 CMIA法和ELISA法對(duì)不同濃度樣本檢查結(jié)果對(duì)比 隨機(jī)選取CMIA法檢測(cè)濃度>2 000mIU/ml的30例血清樣本進(jìn)行ELISA法檢測(cè),結(jié)果顯示ELISA法檢測(cè)值較CMIA法低;選取CMIA法檢測(cè)濃度10～50mIU/ml樣本20例予以ELISA法檢測(cè),結(jié)果顯示ELISA法檢測(cè)20例樣本中有4份(20.00%)樣本為陰性(<10mIU/ml)。見(jiàn)表2。

表2 CMIA法和 ELISA法對(duì)不同濃度樣本檢查結(jié)果對(duì)比

3 討論

HBsAb可在自然感染或注射疫苗后產(chǎn)生,其能有效減少HBV的傳播,降低乙型肝炎感染風(fēng)險(xiǎn)[6]。通常測(cè)量HBsAb可確定機(jī)體在接種疫苗后是否產(chǎn)生足夠的免疫反應(yīng),評(píng)估是否具有保護(hù)效價(jià),另外,動(dòng)態(tài)檢測(cè)HBsAb水平有助于為暴露后管理決策提供理論依據(jù)。雖然ELISA因成本低、操作簡(jiǎn)便、批量檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)成為臨床廣泛使用的檢測(cè)方法,但臨床實(shí)際工作檢測(cè)中,多數(shù)ELISA試劑盒無(wú)法做到定量檢測(cè)均為定性檢測(cè),即使能進(jìn)行定量檢測(cè)的科研用試劑盒在HBsAb低水平狀態(tài)下,也存在一定的漏診及誤診風(fēng)險(xiǎn),因此無(wú)法準(zhǔn)確判斷處于較低HBsAb水平者是否需要加強(qiáng)免疫[7]。若出現(xiàn)溶血樣本、黃疸樣本等情況將會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾。近年來(lái),化學(xué)發(fā)光免疫分析法技術(shù)的發(fā)展逐漸用于血清中的小分子物質(zhì)、腫瘤標(biāo)志物等檢測(cè)中,CMIA作為化學(xué)發(fā)光免疫分析法技術(shù)中的一種方法,在電化學(xué)發(fā)光技術(shù)基礎(chǔ)上增加了生物索—親和素技術(shù)以及磁性微珠包被技術(shù),有助于提高該檢測(cè)方法的靈敏度[8]。本研究從定性和定量測(cè)量?jī)蓚€(gè)方面對(duì)比CMIA和ELISA方法檢測(cè)HBsAb的價(jià)值。

本文結(jié)果顯示,在定性檢測(cè)方面,180份血清樣本中,CMIA法檢測(cè)陽(yáng)性170例,陰性10例,陽(yáng)性率為94.44%,ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性164例,陰性16例,陽(yáng)性率為91.11%,兩組陽(yáng)性率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且一致性檢驗(yàn)顯示Kappa值為0.752>0.75,兩種檢測(cè)方法對(duì)HBsAb水平檢測(cè)的一致性好,說(shuō)明兩種方法均能有效檢測(cè)出HBsAb。HBsAb檢測(cè)受內(nèi)源性和外源性影響,類風(fēng)濕因子、各種補(bǔ)體、特殊自身抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)等為ELISA檢測(cè)的內(nèi)源性干擾因素[9]。標(biāo)本溶血、血清標(biāo)本離心處理過(guò)程、試劑質(zhì)量等為ELISA檢測(cè)結(jié)果的外源性干擾因素[10]。相較于ELISA檢測(cè),CMIA法檢測(cè)可有效保證標(biāo)本離心分離效果,盡量避免外源性干擾因素,以提高對(duì)HBsAb的檢測(cè)效能。

在定量檢測(cè)方面,Bland-Altman圖顯示兩種方法平均差值為356. 4mIU/ml>0,說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果一致性較差。分析這兩種定量檢測(cè)結(jié)果較差的原因,一方面,ELISA法為全手工操作,容易受人為因素的干擾,且血清樣本在加樣、洗板、孵育溫度和時(shí)間任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)失誤將影響HBsAb結(jié)果[11],而相較于ELISA法的手工操作,CMIA法全程自動(dòng)化程度較高。另一方面,ELISA法定量檢測(cè)范圍僅為10～160mIU/ml[12],相對(duì)較窄。部分接種完乙型肝炎疫苗后,體內(nèi)HBsAb水平在短時(shí)間內(nèi)迅速上升,因此在檢測(cè)時(shí)需對(duì)血液樣本予以稀釋,此過(guò)程可能會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響。且ELISA法檢測(cè)范圍的下限正好為HBsAb判斷陰性、陽(yáng)性的界限,這一情況可導(dǎo)致對(duì)低樣本靈敏度不足,對(duì)弱陽(yáng)性樣本錯(cuò)判為陰性,影響檢測(cè)結(jié)果。而CMIA法可檢測(cè)范圍較ELISA法10～160mIU/ml范圍廣,為2 ～1 000mIU/ml,且CMIA法以“鏈霉親和素—生物素”放大系統(tǒng)與三聯(lián)吡啶釕相結(jié)合為檢測(cè)原理,能在電場(chǎng)中持續(xù)獲得電子發(fā)光,增強(qiáng)獲得的信號(hào)強(qiáng)度,延長(zhǎng)信號(hào)發(fā)光的持續(xù)時(shí)間,以提高檢測(cè)結(jié)果的靈敏度和特異性。黃韜等[12]研究對(duì)比ELISA與CMIA法對(duì)HBsAb檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),相較于ELISA法,CMIA法診斷性能更高。另有研究顯示,ELISA法對(duì)其他肝炎的抗原或者抗體中弱陽(yáng)性樣本檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性較差,易造成假陰性結(jié)果[13]。另外值得注意的是,由于本研究檢測(cè)儀器僅擇了Architect i2000SR型免疫分析儀和Alisei型酶標(biāo)儀對(duì)血清中HBsAg的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比較和評(píng)估,是否存在檢測(cè)儀器型號(hào)等其他差異則需要后期展開(kāi)進(jìn)一步探討。

綜上所述,HBsAb定性檢測(cè)中CMIA法和ELISA法的一致性較高,在控制檢測(cè)成本的情況下可選擇ELISA法;CMIA法定量檢測(cè)效能較ELISA法更高,且重復(fù)性更好,操作簡(jiǎn)便,但CMIA法成本相對(duì)較高,臨床工作中建議結(jié)合臨床實(shí)際和檢驗(yàn)需求等因素綜合考慮以選擇合適的檢測(cè)方法,有條件的實(shí)驗(yàn)室可以CMIA法檢測(cè)為主,也可以先予以ELISA法檢測(cè),對(duì)于可疑結(jié)果再使用CMIA法復(fù)核其結(jié)果。