劉小娟，陳桂琴，黃佳穎，梁柱業(yè)，肖樹雄

（廣東省藥品檢驗所國家藥品監(jiān)督管理局化妝品風險評估重點實驗室，廣州 510663）

水楊酸酯類紫外線吸收劑屬于鄰位取代芳香族化合物，能夠選擇性地吸收日光內(nèi)的紫外線，從而達到防曬的效果[1]。由于此類化合物具有潤滑、性質(zhì)穩(wěn)定以及防水等特點，能夠使某些不溶性化妝品組分增溶，同時能夠有效提升其余防曬劑的防曬效果，故常被添加于各類防曬化妝品中[2-4]。紫外吸收劑對人體有副作用，易對皮膚產(chǎn)生刺激，使皮膚過敏，引起紅疹、皮膚發(fā)炎、變黑等[5]，國際上對使用紫外線吸收劑有嚴格的限制和管理[6]，有文獻建議孕婦和哺乳期謹慎使用此類化合物[7]。

丁基辛醇水楊酸酯是水楊酸與丁基辛醇的酯化物，是一款極佳的防曬劑溶劑。它不僅可以提高防曬產(chǎn)品美觀度，增強防曬效果，同時具有良好的粉體潤濕性，能排除粉料間隙中的空氣，使粉體分散均勻，疏松并防止聚團，改善粉體鋪展性，促進成膜性，改善顏料的顯色性，提高保色性，也可以廣泛應用于面部護理和彩妝增效，顯著減少由光敏性金屬氧化物產(chǎn)生的自由基[8]。筆者按照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015 年版)相關(guān)規(guī)定對化妝品中3-亞芐基樟腦等22種防曬劑進行檢測時，發(fā)現(xiàn)部分樣品在二乙基己基丁酰胺基三嗪酮附近有干擾峰。通過進一步探索，確定該干擾峰為丁基辛醇水楊酸酯，而化妝品中該組分尚未建立標準分析方法。

目前，與水楊酸酯類相關(guān)的檢測方法主要有高效液相色譜法[4-5，9-10]、氣相色譜法[11]、熒光分光光度法[12]、氣相色譜-質(zhì)譜法[13-14]等。筆者建立高效液相色譜法測定化妝品中乙二醇單水楊酸酯、水楊酸苯酯、水楊酸芐酯、水楊酸己酯、丁基辛醇水楊酸酯5種防曬劑，該方法操作簡便、靈敏度高，可用于化妝品中紫外吸收劑的檢測。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：SHⅠMADZA LC-20AT 型，配二極管陣列檢測器，日本島津儀器有限公司。

電子天平：(1) ME204 型，感量為0.1 mg；(2)XS205型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

超聲波清洗器：S300H型，德國Elma公司。

渦旋混合器：Lab Dancer型，德國ⅠKA集團。

超純水發(fā)生器：Milli Q Reference 型，美國密理博公司。

乙二醇單水楊酸酯、水楊酸苯酯對照品：質(zhì)量分數(shù)均為98.0%，東京化成工業(yè)株式會社。

水楊酸芐酯對照品：質(zhì)量分數(shù)為98.0%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

水楊酸己酯對照品：質(zhì)量分數(shù)為99.0%，西格瑪奧德里奇中國有限公司。

丁基辛醇水楊酸酯對照品：質(zhì)量分數(shù)為100%，上海問彩新材料科技有限公司。

甲醇、四氫呋喃：色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易(上海)有限公司。

甲酸：色譜純，上海安譜實驗科技股份有限公司。

實驗用水為一級純化水。

1.2 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK MGⅡC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，日本大阪曹達株式會社)；柱溫：30 ℃；檢測波長：305 nm；進樣體積：10 μL；流動相：四氫呋喃-甲醇-0.1%(體積分數(shù)，下同)甲酸溶液，流量為1.0 mL/min，梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3 標準溶液配制

標準儲備溶液：稱取丁基辛醇水楊酸酯50 mg(精確至0.01 mg)至25 mL 棕色容量瓶中，用四氫呋喃溶解，定容至標線，搖勻。分別稱取乙二醇單水楊酸酯、水楊酸苯酯、水楊酸芐酯、水楊酸己酯50 mg (精確至0.01 mg)至25 mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶解，定容至標線，搖勻。

系列混合標準工作溶液：取5 種水楊酸酯標準儲備溶液適量，混合，用四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸混合溶液(60∶30∶10，體積比，下同)逐級稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為10、20、50、100、200 μg/mL 的系列混合標準工作溶液。

1.4 樣品制備

稱取樣品0.25 g (精確至0.1 mg)至25 mL 具塞比色管中，加入適量四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸混合溶液(60∶30∶10)，渦旋震蕩至均勻，用混合溶劑定容至標線，超聲提取20 min。精密移取該溶液1 mL至10 mL 具塞比色管中，用四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸混合溶液(60∶30∶10)稀釋至標線，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，取濾液作為樣品溶液。

1.5 樣品測定

取系列混合標準工作溶液及樣品溶液，按1.2色譜條件進樣分析，記錄色譜峰面積，以系列混合標準工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標建立標準工作曲線，計算線性方程，利用標準曲線法計算樣品中目標成分的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱

因為5種目標物可用作防曬劑，參考使用《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015 年版)檢測防曬劑所用的色譜柱CAPCELL PAK MGⅡ C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，日本大阪曹達株式會社)進行分析[15]，結(jié)果表明，該色譜柱響應值高，色譜峰形尖銳對稱，分離情況良好。

2.1.2 檢測波長

使用二極管陣列檢測器，在190～700 nm 范圍內(nèi)進行光譜掃描，5 種水楊酸酯紫外吸收劑的光譜吸收圖見圖1。由圖1可知，丁基辛醇水楊酸酯等5種水楊酸酯紫外吸收劑最大吸收在305～309 nm之間，在305 nm檢測波長下，基線噪音較小，響應值較高，所以選擇305 nm為檢測波長。

圖1 5種水楊酸酯的紫外吸收光譜圖

2.1.3 流動相

分別采用乙腈-水、四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸溶液作為流動相進行試驗，發(fā)現(xiàn)使用乙腈-水(體積比為65∶35)作為流動相時，在45 min內(nèi)未見丁基辛醇水楊酸酯色譜峰，其余組分分離良好，但是峰展寬較大。提高乙腈的比例以增強洗脫能力，仍未見丁基辛醇水楊酸酯色譜峰，說明該流動相不適于分析強吸附性物質(zhì)。將流動相更換為四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸溶液，梯度洗脫，5 種組分在30 min 內(nèi)全部出峰，色譜峰形尖銳對稱，分離度好，專屬性強，避免了常用防曬劑的干擾。因此實驗選擇四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸溶液作為流動相。5種水楊酸酯混合標準溶液色譜圖見圖2。

圖2 5種水楊酸酯紫外吸收劑的混合標準溶液色譜圖

2.2 樣品處理

池琴等[9]考察了四氫呋喃作為水楊酸酯類紫外吸收劑的提取溶劑時目標物的提取率，結(jié)果表明，乙二醇單水楊酸酯、水楊酸苯酯、水楊酸芐酯、水楊酸己酯提取率為78.0%～92.1%。結(jié)合實驗使用的流動相體系，選擇四氫呋喃-甲醇-0.1%甲酸溶液(60∶30∶10)作為提取溶液，結(jié)果表明，提取效率高、溶劑干擾少。按照1.4 處理方法，使用超聲波清洗器對含有丁基辛醇水楊酸酯的樣品以及在空白樣品中添加適量乙二醇單水楊酸酯、水楊酸苯酯、水楊酸芐酯、水楊酸己酯對照品溶液進行超聲提取，分別選擇提取時間為20、30、40 min，考察目標物的提取率，結(jié)果見表2。由表2 可見，三個提取時間測得的色譜峰面積相近，故選取超聲提取時間為20 min以提高檢測效率。

表2 不同提取時間的色譜峰面積

2.3 線性范圍和檢出限

在1.2色譜條件下，采用外標法進行定量分析，對系列混合標準工作溶液進行測定。分別以各目標物的質(zhì)量濃度為橫坐標、對應色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線，并進行線性回歸分析。結(jié)果表明，丁基辛醇水楊酸酯等5 種水楊酸酯紫外吸收劑在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)不小于0.999 5以上。根據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015 年版)衛(wèi)生化學檢測方法總則要求，以3倍空白噪聲時對應的質(zhì)量或濃度表示方法檢出限，以10倍空白噪聲時對應的質(zhì)量或濃度表示定量限。結(jié)果見表3。

表3 5種水楊酸酯紫外吸收劑的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、檢出限和定量限

2.4 加標回收試驗

稱取空白樣品0.25 g，進行高、低兩個濃度水平加標，每個加標水平平行制備6份，按照該方法進行樣品處理和測定，計算回收率和相對標準偏差，結(jié)果見表4，空白樣品與加標樣品色譜圖分別見圖3和圖4。由表4 可見，5 種目標物的平均回收率為93.7%～105.1%，相對標準偏差為1.1%～4.5%。

圖3 空白樣品色譜圖

圖4 加標樣品色譜圖

表4 5種水楊酸酯紫外吸收劑樣品加標回收試驗結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性試驗

考察了高(100 μg/mL)、低(10 μg/mL)兩個濃度水平的混合標準工作溶液的穩(wěn)定性?；旌蠘藴使ぷ魅芤河谑覝胤胖?天及在4 ℃冰箱存放2個月后，比較5 種目標物色譜峰面積并計算相對偏差，結(jié)果見表5。由表5可見，丁基辛醇水楊酸酯等5種紫外吸收劑至少在2 個月內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性相對偏差為0.34%～2.43%。

表5 5種水楊酸酯類紫外吸收劑的穩(wěn)定性試驗結(jié)果

3 結(jié)語

建立高效液相色譜法測定化妝品中丁基辛醇水楊酸酯等5 種水楊酸酯紫外吸收劑的檢測方法，該方法操作簡便、準確度高、靈敏度好，可用于化妝品中紫外吸收劑的檢測，為化妝品監(jiān)管提供技術(shù)支撐。