楊敏，郭中龍，閆翠勤，梁鑫磊，徐艷梅，張丹丹

［1.石藥集團中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司，石家莊 050035； 2.河北省藥品醫(yī)療器械檢驗研究院，石家莊 050200］

阿普米司特是首個口服磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑，用于類風濕性關(guān)節(jié)炎及銀屑病治療[1]。近年來大量文獻報道了阿普米司特說明書標示適應癥之外的應用開發(fā)，如特異反應性皮炎、斑禿、口瘡性口炎、大皰性表皮松解癥、多形性紅斑、化膿性汗腺炎、白塞病、急性呼吸窘迫綜合征、脂多糖(LPS)誘導的肺損傷等[2-4]。由于其在相關(guān)治療領(lǐng)域的巨大潛力，阿普米司特片成為各大制藥公司爭相仿制的品種。

藥品中的雜質(zhì)元素包括各組分可能引入的部分人體必需的微量元素及部分尚未發(fā)現(xiàn)存在于人體內(nèi)的金屬元素[5]。雜質(zhì)元素不能給患者提供任何治療作用，甚至會產(chǎn)生毒性反應，有些情況下還會催化藥物活性成分(APⅠ)的降解，縮短藥物保質(zhì)期，產(chǎn)生副作用及不良反應，損害人體健康[6]，因此近年來藥物制劑中雜質(zhì)元素成為藥品質(zhì)量控制的重要組成部分。ⅠCH Q3D[7]的發(fā)布為藥品中雜質(zhì)元素研究提供理論支持，ⅠCH Q3D中基于元素毒性及在藥品中出現(xiàn)的可能性，將元素分為3 類，1 類包括砷、鎘、汞和鉛；2類包括2A類鈷、鎳、釩，2B類銀、金、銥、鋨、鈀、鉑、銠、釕、硒和鉈；3 類包括鋇、鉻、銅、鋰、鉬、銻和錫。其中1 類和2A 類是口服固體制劑中必須進行評估的雜質(zhì)元素[7]。

阿普米司特片于2021年在我國獲批上市，目前暫無關(guān)于阿普米司特片雜質(zhì)元素研究的相關(guān)報道。筆者依據(jù)ⅠCH Q3D指導原則，對阿普米司特片中雜質(zhì)元素進行分析研究。目前電感耦合等離子體質(zhì)譜(ⅠCP-MS)法、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜(ⅠCP-OES)法因分析速度快，靈敏度高，工作曲線范圍寬，可同時檢測多種雜質(zhì)元素的優(yōu)勢，在藥物制劑的雜質(zhì)元素研究中多有應用[8-15]。筆者建立了微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法對阿普米司特片中必須關(guān)注的7 種雜質(zhì)元素進行檢測，為建立該藥物雜質(zhì)元素的質(zhì)量控制方法提供依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀：Agilent 7800 型，美國安捷倫科技有限公司。

微波消解儀：SⅠNEO MDS-15型，上海新儀微波化學科技有限公司。

電子天平：XS105DU 型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒托利多科技(中國)有限公司。

釩、鈷、鎳、砷、鎘、鉻、鍺、銠、錸、金單元素標準溶液：質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，中國計量科學研究院。

汞、鉛單元素標準溶液：質(zhì)量濃度均為100 μg/mL，中國計量科學研究院。

硝酸：色譜純，德國默克公司。

氫氟酸：分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

阿普米司特片藥品：規(guī)格為10、20、30 mg，石藥集團中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 微波消解儀

程序升溫，初始溫度為130 ℃，保持10 min，再升溫至150 ℃，保持5 min，再升溫至185 ℃，保持25 min。

1.2.2 ⅠCP-MS儀

高頻等離子體發(fā)射功率：1 600 W；載氣：氬氣；載氣流量：1 L/min；載氣補償氣流量：1 L/min；霧化室溫度：2 ℃；等離子體氣體流量：15 L/min；樣品提升時間：30 s；穩(wěn)定時間：40 s。

1.3 實驗步驟

1.3.1 樣品處理

將阿普米司特片研成細粉，取粉末約60 mg，精密稱定，置于消解罐中，加入氫氟酸1 mL、硝酸5 mL，置于微波消解儀中，在1.2.1 條件下消解，置于加熱板上趕酸，放冷至室溫后完全轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，加水稀釋至標線，搖勻；精密量取上述溶液1 mL，置于10 mL 容量瓶中，再精密量取金單元素標準溶液1 mL加入，加水稀釋至標線，搖勻，作為樣品溶液。

1.3.2 標準溶液制備

金標準溶液：20 μg/mL，取金單元素標準溶液適量，用2%(體積分數(shù)，下同)硝酸溶液稀釋制得。

內(nèi)標溶液：取鉻、鍺、銠、錸單元素標準溶液適量，用0.2%硝酸溶液稀釋成鉻、鍺、銠、錸質(zhì)量濃度分別為20、3、1、2 ng/mL混合內(nèi)標溶液。

空白消解液：取空白消解罐，加入氫氟酸1 mL、硝酸5 mL，置于微波消解儀中，在1.2.1 條件下消解，置于加熱板上趕酸，放冷至室溫，完全轉(zhuǎn)移入50 mL容量瓶中，加水稀釋至標線，搖勻。

空白溶液：精密量取1 mL 空白消解液，置于10 mL樣品管中，精密量取1 mL金標準溶液，加水稀釋至標線，搖勻。

系列混合標準工作溶液：精密量取釩、鈷、鎳、砷、鎘、汞、鉛單元素標準溶液適量，用0.2%的硝酸溶液稀釋成質(zhì)量濃度分別為100、50、200、15、5、30、5 ng/mL 的混合貯備液；分別精密量取混合貯備液0.2、1、2、3、4、5 mL，置于6 只10 mL 容量瓶中，分別于各容量瓶中精密加入1 mL空白消解液及1 mL金標準溶液，加水稀釋至標線，搖勻。系列混合標準工作溶液中7種元素的質(zhì)量濃度見表1。

表1 系列混合標準工作溶液組分質(zhì)量濃度 ng/mL

1.3.3 定量分析方法

采用ⅠCP-MS法，按照1.2儀器工作條件依次分析標準溶液、空白溶液、樣品溶液。采用標準曲線法對樣品溶液中的元素進行定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 各雜質(zhì)元素控制限度的擬定

根據(jù)ⅠCH Q3D相關(guān)規(guī)定，阿普米司特片中潛在的雜質(zhì)元素釩、鈷、鎳、砷、鎘、汞、鉛每日允許暴露量(PDE)分別為100、50、200、15、5、30、5 μg。阿普米司特片最大日劑量為600 mg，按公式(1)計算各雜質(zhì)元素在該藥品中的控制限量wL(質(zhì)量分數(shù))：

計算得阿普米司特片中釩、鈷、鎳、砷、鎘、汞、鉛的允許質(zhì)量分數(shù)限量分別為0.016 6%、0.008%、0.033 3%、0.002 5%、0.000 8%、0.005%、0.000 8%。

2.2 樣品處理方法的選擇

常用樣品處理方法有干法灰化、電熱消解、微波消解等[12]，其中微波消解法操作簡單，對有機基質(zhì)消解更完全，雜質(zhì)元素損失量少。目前藥物制劑因其處方組成復雜樣品處理多采用微波消解法[16-19]，故選用微波消解法對阿普米司特片樣品進行處理，并對消解溶劑體系進行優(yōu)化。分別對比硝酸、硝酸-鹽酸、硝酸-高氯酸、硝酸-H2O2、硝酸-氫氟酸各消解體系對阿普米司特片的消解效果，其中硝酸、硝酸-鹽酸體系均不能將樣品消解完全，仍有不溶物殘留，從而影響雜質(zhì)元素檢測；采用硝酸-高氯酸、硝酸-H2O2體系，消解后雖溶液澄清，但個別元素回收率低于80%，表明存在過度消解導致元素損失現(xiàn)象；采用硝酸-氫氟酸體系，消解后溶液澄清無色，初步考察各雜質(zhì)元素回收率為85%～115%，滿足分析技術(shù)要求，因此樣品處理選用硝酸-氫氟酸作為消解溶劑。

2.3 內(nèi)標元素的選擇

內(nèi)標法是校正基質(zhì)效應的常用方法。理想情況下，所選擇內(nèi)標元素的質(zhì)量數(shù)、第一電離能以及化學行為應與目標物相近。由于ⅠCP-MS是一種多元素檢測技術(shù)，通常采用一種以上的內(nèi)標元素對不同質(zhì)量數(shù)的目標元素分別校正[20]。因此根據(jù)目標元素的質(zhì)量數(shù)，選擇鉻(52Cr)作為釩、鈷、鎳的內(nèi)標元素，選擇鍺(72Ge)作為砷的內(nèi)標元素，銠(103Rh)作為鎘的內(nèi)標元素，錸(185Re)作為汞和鉛的內(nèi)標元素。另外目標元素中的汞元素具有較強的吸附作用，采用ⅠCP-MS法分析時會吸附于與其接觸的儀器各個部位，產(chǎn)生記憶效應。文獻報道多采用向溶液中加入金元素與汞元素形成金汞齊的方法，以增加汞元素的溶解性，將汞元素帶出儀器系統(tǒng)，降低汞的記憶效應[21]，因此試驗在標準溶液及樣品溶液中同時添加金標準溶液，以有效清除汞元素記憶效應對樣品檢測干擾。

2.4 線性關(guān)系

取系列混合標準工作溶液進樣分析，以外標響應與內(nèi)標響應比值為縱坐標，以各元素質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制標準曲線，并進行線性回歸，計算各元素線性方程。線性范圍和相關(guān)系數(shù)見表2。由表2可知，7種雜質(zhì)元素線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，表明線性良好。

表2 7種雜質(zhì)元素線性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)

2.5 方法檢出限與定量限

以11次測定空白背景響應值，計算其標準偏差σ，以3.3σ/k作為方法檢出限(k為標準曲線斜率)，以10σ/k作為定量限。試驗并計算得7 種雜質(zhì)元素的方法檢出限均小于0.2 ng/mL，定量限均小于0.6 ng/mL。配制定量限溶液，重復測定6 次，計算測定結(jié)果的相對標準偏差，結(jié)果見表3。由表3可知，7種雜質(zhì)元素的定量限及檢出限均遠低于其控制限量，且該方法靈敏度較高，滿足測定要求。

表3 方法檢出限及定量限試驗結(jié)果(n=6)

2.6 方法精密度

取阿普米司特片樣品適量，精密稱定，置于消解罐中，分別加入適量標準溶液，使目標元素殘留量相當于控制限量水平，按照1.3 樣品溶液制備方法操作，平行制備6 份，進樣分析，計算每種雜質(zhì)元素測定值的相對標準偏差，結(jié)果見表4。由表4 可知，各元素測定值的相對標準偏差均小于3.0%，表明方法精密度良好。

表4 精密度試驗結(jié)果

2.7 準確度

將阿普米司特片樣品研細，取粉末約60 mg，精密稱定，置于消解罐中，加入氫氟酸1 mL、硝酸5 mL，共制作9份；分別加入適量混合標準工作溶液，按照1.3樣品溶液配制方法操作，配制成濃度水平分別為限量的50%、100%和150%的溶液各3份，進樣分析，結(jié)果見表5。由表5可知，7種雜質(zhì)元素三個水平的平均回收率為97.5%～100.7%，準確度滿足測定要求。

表5 樣品加標回收試驗結(jié)果

3 結(jié)語

建立了微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法同時測定阿普米司特片中7 種雜質(zhì)元素，該方法操作簡單，靈敏度高，準確可靠，為阿普米司特片中雜質(zhì)元素檢測提供參考。