張王芝, 舒相華, 張 瑩, 張雅靖, 李長妹, 楊春坤, 全 偉, 宋春蓮

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院, 云南 昆明 650201 ; 2.云南省綠春縣普查中心, 云南 綠春 662599 ;3. 云南省農(nóng)村科技服務(wù)中心, 云南 昆明 650021)

中醫(yī)藥的臨床防治毒副作用小,能提高機體免疫力,控制病毒復(fù)制或阻止病毒致細胞病變等,在治療病毒性疾病方面顯示出抗生素不可替代的優(yōu)勢[1]。目前,已知黃芩多糖(ScutellariabaicalensisGeorgi polysaccharide,SBGP)是黃芩提取黃酮過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物,具有免疫調(diào)節(jié)和抗病毒等功效[2]。許多研究表明,不同濃度的黃芩多糖能顯著抑制新城疫病毒對雞胚成纖維細胞的侵染作用和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的增殖,且通過小鼠附睪精子畸形試驗發(fā)現(xiàn),黃芩多糖無生殖遺傳毒性[3-5]。偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)可感染許多哺乳動物,豬是其自然宿主,被感染后極易引起繁殖障礙和生殖功能下降等癥狀[6],PRV感染公豬后大多導(dǎo)致睪丸腫脹或萎縮,引發(fā)睪丸炎,精子活力下降,喪失種用能力[7],因此給許多國家的養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。免疫接種是防控PRV感染仔豬的有效手段,但目前可用的PRV商業(yè)疫苗并不能有效預(yù)防PRV變異株感染[8]。豬睪丸(Swine testis,ST)細胞能提高抗原效價,是制備偽狂犬病(Pseudorabies,PR)疫苗的首選細胞[9]。轉(zhuǎn)錄組學(xué)為探索中藥治療疾病的機制提供了新思路,應(yīng)用RNA-seq轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)研究宿主基因轉(zhuǎn)錄本信息,揭示藥物多靶點影響基因差異表達水平和調(diào)控疾病發(fā)展的分子機制。

本試驗旨在研究黃芩多糖對PRV感染ST細胞的作用,并通過RNA-Seq測序分析其相關(guān)差異基因的表達,以期為進一步研究黃芩多糖調(diào)控PRV感染的宿主機制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料來源 黃芩多糖粉末,購自北京索萊寶科技有限公司;ST細胞,購自湖南豐暉生物科技有限公司,置于液氮中保存;PRV-XD-2014毒株病毒液,由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)傳染病實驗室留存。

1.2 主要試劑和儀器 胎牛血清和DMEM高糖培養(yǎng)基,均購自Gibco公司;磷酸鹽緩沖液(Phosphate buffer saline,PBS,1×)、二甲基亞砜(Dimethylsulfoxide,DMSO)和細胞凍存液,均購自昆明贊納生物科技有限公司;CCK-8試劑盒,購自日本東仁化學(xué)科技有限公司;蒸餾水(Distilled water),購自Invitrogen公司;0.25%胰蛋白酶,購自HyClone公司;青-鏈霉素(雙抗),購自北京索萊寶科技有限公司;豬腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、豬γ干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)和豬α干擾素(Interferon-α,IFN-α) ELISA檢測試劑盒,均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。倒置顯微鏡,重慶光電儀器有限公司產(chǎn)品;全波長酶標儀,Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品。

1.3 試驗方法

1.3.1 主要溶液配制 黃芩多糖溶液:稱取3.125 g黃芩多糖粉末加入1 L蒸餾水,振蕩混勻后備用。

1.3.2 細胞復(fù)蘇和培養(yǎng) 將ST細胞凍存管置于37 ℃水浴鍋中快速搖晃融化后,將細胞懸液轉(zhuǎn)移到10 mL離心管,加3 mL DMEM高糖培養(yǎng)基混勻,1 000 r/min離心4 min;棄上清液,加1 mL細胞完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基)吹勻,吸取細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中,補加4 mL細胞完全培養(yǎng)基,置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞匯合度達90%時,用于后續(xù)試驗。

1.3.3 PRV擴增 將1 mL PRV-XD-2014毒株病毒液接種于ST細胞,吸附1 h后棄去病毒液,加入5 mL細胞維持培養(yǎng)基(含2%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基)繼續(xù)培養(yǎng)。待90%的細胞發(fā)生細胞病變效應(yīng)(Cytopathic effect,CPE)時,-80 ℃反復(fù)凍融3次,4 ℃、12 000 r/min離心15 min,取上清病毒液分裝,于-80 ℃長期保存。

1.3.4 50%組織細胞感染量(Median tissue culture infective dose,TCID50)測定 將ST細胞接種于96孔細胞培養(yǎng)板中,1×104個/孔,用PBS清洗2遍,加入用細胞維持培養(yǎng)基按10倍倍比梯度法稀釋的病毒液,稀釋度分別為10-1～10-10,每個稀釋度設(shè)置8個重復(fù),另設(shè)只加細胞維持培養(yǎng)基的細胞作為對照,置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。逐日觀察CPE情況并記錄,根據(jù)Reed-Muench法按公式(1)計算病毒滴度。

lgTCID50=距離比例×稀釋對數(shù)間的差值+高于50%病變率的稀釋度的對數(shù)

(1)

距離比例=(高于50%病變率的百分數(shù)-50%)÷(高于50%病變率的百分數(shù)-低于50%病變率的百分數(shù))

(2)

1.3.5 黃芩多糖對ST細胞最大安全濃度的測定 將ST細胞以1×104個/孔接種到96孔板中,用PBS清洗2遍,加入用DMEM 高糖培養(yǎng)基按2倍倍比稀釋的9個濃度的黃芩多糖溶液(即1 562.50、781.25、390.63、195.31、97.66、48.83、24.41、12.21和6.10 μg/mL),另設(shè)不加黃芩多糖溶液的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的ST細胞作為空白對照組和只加DMEM高糖培養(yǎng)基作為空白組,每個濃度組、空白對照組和空白組均設(shè)6個復(fù)孔,培養(yǎng)48 h后,按照CCK-8試劑盒說明書操作,根據(jù)公式(3)計算細胞存活率,以確定黃芩多糖對ST細胞的最大安全濃度(Cmax)。

細胞存活率(%)=[(試驗孔OD450 nm-空白孔OD450 nm)÷(空白對照孔OD450 nm-空白孔OD450 nm)]×100%

(3)

1.3.6 黃芩多糖對PRV感染ST細胞的作用 將ST細胞以1×104個/孔接種于96孔板,預(yù)防模式組細胞分別先加入不同濃度的黃芩多糖溶液(Cmax、1/2Cmax、1/4Cmax、1/8Cmax和1/16Cmax)培養(yǎng)4 h后,再加入100 TCID50的PRV病毒液,0.1 mL/孔,孵育2 h后PBS洗2遍,加細胞維持培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng);治療模式組細胞先接種100 TCID50的PRV病毒液,0.1 mL/孔,孵育2 h,PBS洗2遍后,再使用不同濃度的黃芩多糖溶液處理;殺毒模式組細胞則先分別將不同濃度的黃芩多糖溶液和100 TCID50的PRV病毒液混合,再將各濃度混合液加至細胞中,0.1 mL/孔,處理2 h后PBS洗2遍,加細胞維持培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng);同時設(shè)置只接種PRV病毒液的細胞作為PRV對照組和不作任何處理的細胞作為空白對照組,每組均設(shè)6個復(fù)孔。PRV對照組出現(xiàn)典型CPE時,按照CCK-8試劑盒操作說明書測定各組細胞OD450 nm值,并于倒置顯微鏡下觀察CPE。參照參考文獻[12]進行黃芩多糖抗病毒活性評價:處理組OD450 nm值極顯著大于PRV對照組,表明具有顯著抗病毒活性;OD450 nm值顯著大于PRV對照組,表明具有一定抗病毒活性;OD450 mm值與PRV對照組差異不顯著,表明無抗病毒活性。按照公式(4)計算黃芩多糖的治療指數(shù)(Therapeutic index,TI)。

TI=最大安全濃度÷最小有效濃度

(4)

細胞培養(yǎng)48 h后,收集各組細胞培養(yǎng)液,1 500 r/min離心20 min,取上清液,按照ELISA檢測試劑盒說明書測定IFN-γ、IFN-α和TNF-α的含量。

1.3.7 細胞總RNA的提取和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的測定 選取效果較優(yōu)的空白對照組、PRV對照組和最佳藥物濃度組,每組3個重復(fù)樣本,在24 h時采用TRIzol法提取細胞總RNA,送廣州基迪奧生物科技有限公司進行mRNA 樣品質(zhì)量檢測和純化,并構(gòu)建測序文庫。

1.3.8 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件進行處理,Graphpad Prism 8制圖。試驗結(jié)果以“平均值±標準差”表示,采用單因素分析方法進行顯著性分析,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)采用RPKM(Reads Per Kbper Million mapped reads)方法計算基因表達量,以差異表達倍數(shù)為2,| log2(Fold change)|>1,且錯誤發(fā)現(xiàn)率(False discovery rate,FDR)<0.05 為篩選標準。其中FDR<0.05時,log2(Fold change)≥1的為上調(diào)表達基因,log2(Fold change)≤-1的為下調(diào)表達基因。使用NCBI 數(shù)據(jù)庫中的BLASTX對確定的對應(yīng)基因進行比較?；虮倔w論(Gene Ontology,GO)(http://www.geneontology.org)和 Kyoto京都基因與基因組百科全書(Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路(http://www.genome.jp/kegg/)使用DEGseq軟件和超幾何檢驗進行分析,隨后使用Omicsmart 動態(tài)實時數(shù)據(jù)分析平臺(http://www.omicsmart.com)進行總的數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 PRV TCID50的測定 按照Reed-Muench法計算得PRV病毒滴度為10-5.39TCID50/0.1 mL。

2.2 黃芩多糖對ST細胞最大安全濃度的測定 如圖1所示,在一定范圍內(nèi),細胞存活率隨著黃芩多糖濃度的降低逐漸升高。與空白對照組相比,當(dāng)黃芩多糖濃度≤97.66 μg/mL時,OD450 nm值差異均不顯著(P>0.05),即97.66 μg/mL為黃芩多糖對ST細胞的最大安全濃度。

圖1 ST細胞存活率測定

2.3 黃芩多糖對PRV感染ST細胞的作用

2.3.1 CCK8檢測 如圖2所示,不同模式下PRV對照組OD450 nm值均極顯著低于空白對照組(P<0.01),即PRV感染可導(dǎo)致ST細胞存活率極顯著降低,表明建模成功。預(yù)防模式中,97.66 μg/mL黃芩多糖處理組的OD450 nm值均極顯著高于PRV對照組(P<0.01),具有顯著抗病毒活性,當(dāng)黃芩多糖濃度<48.83 μg/mL時,OD450 nm值與PRV對照組差異均不顯著(P>0.05),即48.83 μg/mL為預(yù)防模式中黃芩多糖對ST細胞的最小有效濃度;TI為2。治療模式中,97.66 μg/mL和48.83 μg/mL黃芩多糖處理組的OD450 nm值均極顯著高于PRV對照組(P<0.01),具有顯著抗病毒活性;當(dāng)黃芩多糖濃度<24.41 μg/mL時,OD450 nm值與PRV對照組差異均不顯著(P>0.05),即24.41 μg/mL為治療模式中黃芩多糖對ST細胞的最小有效濃度;TI為4。殺毒模式中,97.66 μg/mL和24.41 μg/mL黃芩多糖處理組的OD450 nm值均極顯著高于PRV對照組(P<0.01),具有顯著抗病毒活性;當(dāng)黃芩多糖濃度<24.41 μg/mL時,OD450 nm值與PRV對照組差異均不顯著(P>0.05),即24.41 μg/mL為治療模式中黃芩多糖對ST細胞的最小有效濃度;TI為4。

圖2 預(yù)防、治療和殺毒模式下ST細胞的OD450 nm值測定

綜上,黃芩多糖在3個模式中均可顯著提高PRV感染細胞的存活率,且濃度為97.66 μg/mL時效果最佳。根據(jù)TI可知,黃芩多糖的治療和殺毒模式優(yōu)于預(yù)防模式,且24.41 μg/mL以上濃度為有效藥物濃度。

2.3.2 CPE變化情況 如圖3所示,PRV對照組ST細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、融合,形成葡萄串樣細胞團,明顯脫落和死亡等典型的CPE現(xiàn)象(圖3B)。預(yù)防模式中,97.66和48.83 μg/mL黃芩多糖處理均能減輕PRV所引起的CPE(圖3C1和3C2),24.41 μg/mL的 CPE與PRV對照組無明顯差異(圖3C3)。治療和殺毒模式中,3個濃度的黃芩多糖處理均能減弱PRV感染引起的CPE(圖3D1～3E3)。

圖3 ST細胞病變(200×)

2.3.3 IFN-γ、IFN-α和TNF-α含量的測定 如圖4所示,與空白對照組相比,PRV對照組IFN-γ和IFN-α含量均極顯著降低(P<0.01),TNF-α含量極顯著升高(P<0.01)。與PRV對照組相比,不同模式下IFN-γ含量在濃度為97.66 μg/mL和48.83 μg/mL的黃芩多糖處理后均極顯著升高(P<0.01);IFN-α含量在濃度為97.66 μg/mL的黃芩多糖處理后均極顯著升高(P<0.01);TNF-α含量在濃度為97.66 μg/mL的黃芩多糖處理后均極顯著降低(P<0.01)。不同模式下3個濃度黃芩多糖處理組的IFN-γ、IFN-α和TNF-α含量與空白對照組相比差異均不顯著(P>0.05)。

圖4 預(yù)防、治療和殺毒模式中ST細胞IFN-γ(A)、IFN-α(B)和TFN-α(C)含量

綜上試驗結(jié)果表明,黃芩多糖在3個模式中均可使PRV感染細胞的IFN-γ和IFN-α分泌增加,炎癥因子TNF-α分泌減少;改善PRV引起的CPE,提高細胞存活率,且在濃度為97.66 μg/mL時效果最好。鑒于臨床上主要以治療為主,本試驗選取治療模式下97.66 μg/mL黃芩多糖處理組、空白對照組和PRV對照組進行轉(zhuǎn)錄組測序,分析黃芩多糖對PRV感染ST細胞作用的相關(guān)分子或藥物靶點。

2.4 黃芩多糖對PRV感染ST細胞的差異基因表達

2.4.1 差異表達基因 如圖5A所示,空白對照組和PRV對照組共有3 284個差異基因,其中1 528個上調(diào),1 756個下調(diào);PRV對照組和黃芩多糖治療組共有531個差異基因,其中398個上調(diào),133個下調(diào)。如圖5B所示,3個組共同交集的差異基因有74個,其中,空白對照組與PRV對照組和空白對照組與黃芩多糖治療組均上調(diào)、下調(diào)的基因分別為19和 55個;PRV對照組和黃芩多糖治療組上調(diào)、下調(diào)的基因分別為70和 4個。74個基因中以SOCS3、VEGFA、ZBTB18、CLCN6、RSBN1、RBM47和TET2差異表達較為顯著。

圖5 差異基因分析

2.4.2 GO功能分析 從生物過程(Biological processes)、分子功能(Molecular function)和細胞組分(Cellular component)3個方面分析3個組差異基因的富集情況。空白對照組與PRV對照組比較,上調(diào)和下調(diào)的差異基因主要注釋在細胞過程(Cellular process)、代謝過程(Metabolic process)和生物調(diào)節(jié)(Biological regulation)等生物過程中,結(jié)合(Binding)和催化活性(Catalyic activity)等分子功能中,以及細胞(Cell)和細胞器(Organelle)等細胞組分中(圖6A)。PRV對照組與黃芩多糖治療組比較,上調(diào)和下調(diào)的差異基因注釋最多的條目分別是生物過程中的細胞過程(Cellular process),分子功能中的結(jié)合(Binding),細胞組分中的細胞(Cell)和細胞部分(Cell part)(圖6B)。

圖6 差異基因GO富集分類圖

綜上,在空白對照組和PRV對照組主要富集的是下調(diào)基因,在PRV對照組和黃芩多糖治療組中主要富集的是上調(diào)基因。顯著富集的差異基因主要集中在生物過程中的細胞和代謝過程,細胞組分中的細胞和細胞器,分子功能中的催化和結(jié)合活性。

2.4.3 KEGG分析 對空白對照組與PRV對照組、PRV對照組與黃芩多糖治療組間統(tǒng)計了富集顯著性最高的15個KEGG通路。空白對照組與PRV對照組分別為:核糖體、剪接體、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信號通路、泛素介導(dǎo)的蛋白水解、微小核糖核酸、細胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白加工、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解、RNA轉(zhuǎn)運、焦點粘連、黏合連接通路、氧化磷酸化、內(nèi)吞、絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPK)信號通路和腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor,TNF)信號通路(圖7A);PRV對照組與黃芩多糖治療組分別為:TNF信號通路、MAPK信號通路、mTOR信號通路、胰島素抵抗、粘連結(jié)、子宮內(nèi)膜癌、礦物質(zhì)吸收、叉頭框蛋白O(Forkhead box O protein,FoxO)、腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、神經(jīng)營養(yǎng)素、Toll樣受體(Toll-like receptors,TLR)、Hedgehog(Hh)信號通路、T細胞受體、NOD樣受體(NOD-like receptors,NLRs)和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3 kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信號通路(圖7B)。

圖7 KEGG通路分析氣泡圖

3 討論

許多植物多糖,包括黃芪多糖、板藍根多糖和金銀花多糖等,均具有抗病毒作用,多糖和病毒的不同加入方式可以判定其是否能夠與病毒結(jié)合達到直接抑制或殺滅病毒的作用[10]。宛燕飛[11]發(fā)現(xiàn),仙人掌多糖對雞新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)具有明顯的抑制作用,且先加仙人掌多糖再攻毒效果最優(yōu)。王鑫瀅等[12]利用細胞病變觀察和MTT法研究3種不同給藥方式下黃芩多糖體外抗NDV的活性,結(jié)果表明,黃芩多糖對NDV具有較好的預(yù)防和治療作用,但對病毒的直接滅活作用相對較低。本試驗與之相似,通過觀察細胞形態(tài)變化和測定細胞存活率研究黃芩多糖對PRV感染ST細胞的作用,結(jié)果顯示,預(yù)防、治療和殺毒模式均能明顯改善PRV引起的CPE,且能夠提高細胞存活率。許多多糖對免疫系統(tǒng)都有調(diào)節(jié)作用,不僅可以激活T/B淋巴細胞、巨噬細胞和自然殺傷細胞等免疫細胞參與機體免疫,還可以刺激IFN產(chǎn)生,活化補體,實現(xiàn)多糖抗病毒作用[13]。機體免疫介導(dǎo)因子中,IFN-α和IFN-γ是抗病毒感染的主要細胞因子,由T淋巴細胞和NK細胞分泌,具有抑制病毒復(fù)制和防止病毒感染的作用,在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。王永霞等[14]研究表明,紅樹林淡紫擬青霉胞外多糖具有一定的抗單純皰疹病毒(Herpes simplex virus,HSV-1)作用,可能是通過抑制病毒復(fù)制,刺激IFN-γ和IL-12分泌,抑制TNF-α產(chǎn)生完成的。本研究前期試驗發(fā)現(xiàn),PRV感染仔豬后,通過黃芩多糖治療后可以提高仔豬的IFN-γ和IL-4含量,促進CD4+和CD8+分化,以增強其體液免疫和細胞免疫,并提高仔豬感染PRV后的存活率[15]。同樣的,本試驗發(fā)現(xiàn),黃芩多糖在預(yù)防、治療和殺毒模式中均可以促進IFN-γ和IFN-α細胞因子的釋放,以抑制病毒而提高細胞存活率,還可以抑制炎性因子TNF-α的釋放而發(fā)揮抗炎作用,改善PRV引起的CPE。

由上述試驗結(jié)果可知,黃芩多糖對PRV感染ST細胞有一定保護作用,但潛在機制仍不清楚。因此,本試驗結(jié)合RNA-seq深度挖掘黃芩多糖治療組(97.66 μg/mL)、空白對照組和PRV對照組共交集差異基因74個,主要參與細胞代謝和結(jié)合活性等生物學(xué)過程。楊高娟[16]通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析PRV感染早期PK-15細胞差異基因,主要包括突觸囊泡內(nèi)吞作用、炎癥應(yīng)答、p53信號通路和細胞因子-細胞因子受體相互作用。本試驗中,空白對照組和PRV對照組KEGG富集結(jié)果提示,MAPK信號通路、mTOR信號通路和細胞凋亡可能促進PRV體外增殖。侯子馳等[10]研究發(fā)現(xiàn),多糖可與細胞表面特異性受體結(jié)合,激活細胞內(nèi)各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和抗病毒作用。有研究表明,板藍根多糖可與TLR3受體結(jié)合,激活相關(guān)信號通路,抑制流感病毒復(fù)制[17]。劉丹華[18]利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),在脂多糖(Lipopolysacharide,LPS)誘導(dǎo)雞巨噬細胞HD11炎癥模型中,黃芪多糖預(yù)處理能通過誘導(dǎo)SOCS3的高表達抑制NF-κBp65和p38MAPK的過度活化,降低炎性細胞因子IL-1β和TNF-α的釋放,從而發(fā)揮抑制炎癥的作用。另外,黃芩多糖可通過抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和NLRP3炎癥體活化改善結(jié)腸炎[19]。本試驗經(jīng)轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析顯示,黃芩多糖能調(diào)節(jié)TNF信號通路相關(guān)基因(SOCS3、CCL5、PIK3R1、CREB3L1、MLKL、FOS、CREB5、LIF、TNFRSF1A和MAP3K8)和TLR信號通路相關(guān)基因(TBK1、CCL5、PIK3R1、FOS和MAP3K8)過度表達,提示黃芩多糖對PRV感染ST細胞起到保護作用的機制可能與TNF信號通路和Toll樣受體信號通路有關(guān),但還需進一步研究。此外,MAPK、mTOR、AMPK、神經(jīng)營養(yǎng)素和T細胞受體等信號通路上均有顯著富集表達基因,黃芩多糖可能對這些信號通路有影響。

綜上,黃芩多糖可顯著減輕PRV引起的ST細胞存活率下降和病變,具有一定的保護作用;其作用機理可能是通過調(diào)節(jié)TNF和TLR信號通路中SOCS3、CCL5、FOS、PIK3R1和MAP3K8基因的表達。本試驗結(jié)果為黃芩多糖調(diào)控PRV感染宿主機制的關(guān)鍵分子和藥物靶點研究提供理論依據(jù)。