陳雅君,朱 婧,李 璐,何 欽

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)主要表現(xiàn)為血清轉(zhuǎn)氨酶異常升高和血清自身抗體陽(yáng)性等。隨著病情的進(jìn)一步發(fā)展,部分患者可以發(fā)生肝硬化和肝衰竭[1]。主要采用藥物治療AIH患者,除了標(biāo)準(zhǔn)的免疫抑制治療以外,異甘草酸鎂屬于一種肝細(xì)胞保護(hù)劑,主要具有抗炎和護(hù)肝等作用,可在一定程度上有利于AIH患者肝功能的改善。采取異甘草酸鎂輔助治療AIH患者取得了較好的療效[2,3]。中醫(yī)理論認(rèn)為,AIH是由于肝郁脾虛、肝陰虧虛等所引發(fā)[4]。異甘草酸鎂具有降低血清轉(zhuǎn)氨酶的作用,應(yīng)用于治療慢性肝炎和早期肝硬化患者效果較好[5]。本研究探討了應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)免疫抑制療法聯(lián)合異甘草酸鎂治療AIH患者的療效及其外周血B細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞表型變化,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 病例來(lái)源 2017年4月～2022年4月我院收治的AIH患者108例,男性42例,女性66例,年齡為26～65歲,平均年齡為(39.6±5.6)歲。符合《自身免疫性肝炎診斷和治療共識(shí)(2015年)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn):伴有其他肝臟疾病或伴有嚴(yán)重的心腦血管疾病。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核、通過(guò),患者簽署知情同意書。

1.2 治療方法 給予對(duì)照組患者標(biāo)準(zhǔn)的免疫抑制治療方案治療,具體為潑尼松龍(江西國(guó)藥有限責(zé)任公司) 0.5 mg.kg-1d-1口服,4周后每周減量5 mg,至7.5～10 mg.d-1維持,硫唑嘌呤(北京嘉林藥業(yè)股份有限公司)50 mg.d-1;觀察組患者在對(duì)照組治療方案的基礎(chǔ)上加用異甘草酸鎂(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)100 mg口服,3次/d。兩組均連續(xù)治療半年,觀察治療效果。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血生化指標(biāo);采用免疫濁度試驗(yàn)法檢驗(yàn)血漿免疫球蛋白水平(上?？道噬锟萍加邢薰?;外周血B細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群檢測(cè):使用藻紅蛋白-德克薩斯紅(ECD)標(biāo)記的小鼠抗人CDl9單克隆抗體(1:20,美國(guó)Beckman公司)、藻紅蛋白-花青素(PE-Cy5)標(biāo)記的小鼠抗人CD27單克隆抗體(1:20,美國(guó)eBioscience公司)、異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的小鼠抗人CD38單克隆抗體(1:20,美國(guó)BioLegend公司)、PE標(biāo)記的小鼠抗人CD24單克隆抗體(1:20,美國(guó)BD公司)、熒光染料標(biāo)記的同型對(duì)照IgG包括ECD標(biāo)記的小鼠IgG(1:20)、FITC標(biāo)記的小鼠IgG(1:20,美國(guó)Beckman公司)、PE-Cy5標(biāo)記的小鼠IgG(I:20,美國(guó)BioLegend公司)和PE標(biāo)記的小鼠IgG(I:20,美國(guó)BioLegend公司);紅細(xì)胞裂解液購(gòu)自美國(guó)Beckman公司,COULTER EPICS XL型流式細(xì)胞儀和Allegra X-12型溫控離心機(jī)購(gòu)自美國(guó)Beckman公司。采集空腹靜脈血4 ml,取全血50 μl,分別滴加ECD、PE—Cy5、FITCP和E標(biāo)記的小鼠抗人CDl9、CD27、CD38和CD24單克隆抗體各50 μl,同時(shí)設(shè)立同型對(duì)照,分別加入由ECD、PE-Cy5、FITC和PE標(biāo)記的小鼠IgG各50 μl,室溫下避光孵育20 min,每管滴加紅細(xì)胞裂解液250 μl、40℃水浴10 min,滴加磷酸鹽緩沖液5 ml,終止紅細(xì)胞裂解反應(yīng),于4℃、1600 r/m離心5 min,棄上清液,加入磷酸鹽緩沖液500 μ1,輕微震蕩后形成細(xì)胞懸液,上流式細(xì)胞儀檢測(cè)并計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 療效情況 在治療半年末,觀察組生化學(xué)應(yīng)答率為85.2%(46/54),顯著高于對(duì)照組的66.7%(36/54,P<0.05)。

2.2 兩組肝功能指標(biāo)比較 在治療半年末,觀察組血清肝功能指標(biāo)顯著低于對(duì)照組(P<0.05,表1)。

表1 兩組肝功能指標(biāo)比較

2.3 兩組血清球蛋白和免疫球蛋白水平比較 在治療半年末,兩組血漿IgG、IgM及血清GLO水平無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05,表2)。

表2 兩組血漿免疫球蛋白和血清球蛋白水平比較

2.4 兩組外周血B細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群百分比變化比較 在治療后,觀察組患者外周血CD19+B細(xì)胞、CD19+IL-10+B細(xì)胞、CD19+CD24hiCD38hi調(diào)節(jié)性B細(xì)胞和CD19+CD24hiCD27+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞百分比顯著高于對(duì)照組,而CD19+CD27+CD38++漿細(xì)胞和CD19+CD27-CD38-/+幼稚B細(xì)胞百分比顯著低于對(duì)照組(P<0.05,表3、表4)。

表3 兩組外周血B細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群百分比比較

表4 兩組外周血B細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群百分比比較

3 討論

AIH屬于一種自身免疫系統(tǒng)過(guò)度激活引發(fā)的慢性肝臟疾病。該病的特征有肝功能異常、高球蛋白血癥等[7]。據(jù)相關(guān)報(bào)道顯示,AIH的發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì),尤其在歐洲、美國(guó),具有較高的患病率[8]。AIH患者以女性居多,若不及時(shí)采取相應(yīng)的治療措施,則預(yù)后較差。由于AIH的發(fā)病較為隱匿,患者發(fā)病后癥狀不明顯,確診時(shí)多數(shù)病情已遷延,從而增加了治療難度。

目前,治療AIH主要采用糖皮質(zhì)激素,或聯(lián)合硫唑嘌呤。作為一種甘草提取物,異甘草酸鎂的適應(yīng)證為慢性病毒性肝炎,其可有效改善肝功能異常[9]。但單獨(dú)使用該藥治療效果有待提升。中醫(yī)學(xué)中將肝病歸為“脅痛、肝癖、肝水”等范疇,應(yīng)予以活血化瘀、疏肝健脾的治療方法[10-12]。有學(xué)者研究顯示,對(duì)于AIH患者采用異甘草酸鎂治療,治療后患者肝功能指標(biāo)有了較大的改善[13]。在AIH發(fā)生后,持續(xù)性的炎癥可使細(xì)胞外基質(zhì)的合成明顯增多,從而使肝臟的正常結(jié)構(gòu)遭受破壞,進(jìn)而導(dǎo)致血清ALT、AST、TBiL和ALP水平顯著上升[14]。本研究結(jié)果顯示,在治療半年后,觀察組患者生化學(xué)應(yīng)答率顯著高于對(duì)照組,肝功能指標(biāo)比對(duì)照組顯著降低,提示聯(lián)合異甘草酸鎂治療AIH患者有助于肝功能的改善,其原因在于異甘草酸鎂具有較強(qiáng)的護(hù)肝、降酶作用,可降低轉(zhuǎn)氨酶,起到改善肝功能指標(biāo),減輕肝纖維化的作用[15],與有關(guān)研究結(jié)果相符[16]。有研究還顯示,聯(lián)合異甘草酸鎂治療還可以改善血清肝纖維化指標(biāo),提示異甘草酸鎂聯(lián)合應(yīng)用于AIH患者的治療有助于延緩肝纖維化進(jìn)程,其原因可能在于異甘草酸鎂可抑制相關(guān)蛋白的表達(dá),減少細(xì)胞外基質(zhì)成分合成,從而延緩肝纖維化進(jìn)程。同時(shí),異甘草酸鎂治療也可調(diào)節(jié)免疫功能紊亂,控制自身免疫反應(yīng)過(guò)度激活[17,18]。

相關(guān)報(bào)道指出,采用利妥昔對(duì)難治性AIH患者進(jìn)行治療可有效緩解臨床癥狀[19],由此可以證實(shí)B細(xì)胞與AIH的發(fā)病有著密不可分的關(guān)系。B細(xì)胞的表型是克隆多樣性細(xì)胞表面免疫球蛋白受體的細(xì)胞群。近年來(lái)的研究顯示,B細(xì)胞可通過(guò)結(jié)合T細(xì)胞并產(chǎn)生抑制性細(xì)胞因子對(duì)免疫反應(yīng)進(jìn)行負(fù)向調(diào)控,而這類細(xì)胞被稱之為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞[20]。本研究結(jié)果顯示,在治療半年后,觀察組患者外周血CD19+CD27+CD38++漿細(xì)胞和CD19+CD27-CD38-/+幼稚B細(xì)胞百分比顯著低于對(duì)照組。肝組織漿細(xì)胞浸潤(rùn)程度可作為AIH患者肝損傷判定的主要依據(jù),AIH患者漿細(xì)胞水平明顯上升。同時(shí),AIH患者記憶B細(xì)胞比例較正常人群明顯上升[20]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)在治療半年后,觀察組患者外周血CD19+CD24hiCD38hi調(diào)節(jié)性B細(xì)胞和CD19+CD24hiCD27+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞百分比顯著高于對(duì)照組,表明采用免疫抑制劑聯(lián)合異甘草酸鎂治療后,體內(nèi)具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞升高,提示外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可能參與了AIH的發(fā)生與發(fā)展。

綜上所述,應(yīng)用免疫抑制劑聯(lián)合異甘草酸鎂治療AIH患者可提高生化學(xué)應(yīng)答率,有助于改善肝功能指標(biāo),抑制免疫反應(yīng),同時(shí)能調(diào)節(jié)外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞功能。深入分析和研究調(diào)節(jié)性B細(xì)胞及其與其他免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞的關(guān)系,將為闡明AIH的發(fā)病機(jī)制和治療提供線索。