賈凱杰,韓翔宇,于慧,趙盼

山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250355

糖尿病是常見的以慢性高血糖為特征的代謝性疾病[1-2]。在所有糖尿病患者中,2型糖尿病患者高達(dá)95%左右,嚴(yán)重威脅人類健康[3]。隨著我國(guó)人民生活水平的不斷提高和人口老齡化的不斷加劇,糖尿病患者的人數(shù)不斷增加,預(yù)計(jì)到2030年,我國(guó)2型糖尿病患者人數(shù)將達(dá)到4 000多萬(wàn)[4]。α-淀粉酶是一種調(diào)節(jié)血糖的重點(diǎn)酶,市面上主要的α-淀粉酶抑制劑在臨床應(yīng)用中會(huì)產(chǎn)生消化不良、脹氣等不良反應(yīng),所以從天然藥物中挖掘α-淀粉酶抑制劑對(duì)于降血糖藥品的開發(fā)具有重要意義。

核桃楸皮為胡桃科植物核桃楸(juglansmandshurica)的枝皮或干皮,是一種傳統(tǒng)中藥材,富含黃酮類、醌類、多糖類以及苷類等活性成分[5-9],其性寒、味苦,具有良好的抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等功效[10-11]。近年來(lái),核桃楸皮提取物在降血糖[12-14]、抗氧化[15]等方面的作用受到廣泛關(guān)注。核桃楸皮總黃酮作為一類重要的藥物成分[16-17],對(duì)2型糖尿病具有良好的治療作用[18-19],但因其成分復(fù)雜,治療2型糖尿病的作用機(jī)理尚未明確。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是利用數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)成分和靶點(diǎn)進(jìn)行提取后,構(gòu)建藥物-活性成分-靶點(diǎn)以及蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò),并分析其作用機(jī)制的一種方法[20]。本研究采用酶抑制實(shí)驗(yàn)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接方法探討核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的主要活性成分和疾病靶點(diǎn),為核桃楸皮的開發(fā)和利用提供理論依據(jù),以期為天然降血糖藥物的開發(fā)和臨床治療提供嶄新視角。

1 基于酶抑制實(shí)驗(yàn)探討核桃楸皮總黃酮對(duì)2型糖尿病的作用

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑可溶性淀粉(北京索萊寶科技有限公司,批號(hào):G8300);α-淀粉酶、DNS試劑(NY-T法)、阿卡波糖(上海源葉生物科技有限公司,批號(hào):S31089、R23236、B20003)。

1.1.2 儀器X-5型UV-Vis分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司);DRHH-S4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);TGL-16C型臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 方法

1.2.1 核桃楸皮總黃酮的提取與純化稱取核桃楸皮粗粉適量,加入15倍量70%乙醇,80 ℃水浴回流1.5 h,提取兩次,抽濾,合并濾液,得核桃楸皮醇提液,60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),回收乙醇至核桃楸皮醇提液無(wú)醇味。HPD-750型大孔吸附樹脂預(yù)處理后,將上述核桃楸皮提取液的pH值調(diào)節(jié)至4后,以 2 BV·h-1的流速上樣,上樣量2 BV。上樣后,用蒸餾水沖洗大孔樹脂柱,直到流出液澄清透明,用70%乙醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為2 BV·h-1,洗脫體積為5～8 BV,收集體積分?jǐn)?shù)70%乙醇洗脫液。將洗脫液進(jìn)行減壓濃縮后,冷凍干燥,即得核桃楸皮總黃酮提取物。采用亞硝酸鋁比色法測(cè)定提取物中總黃酮的含量。

1.2.2 核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶的抑制作用α-淀粉酶是調(diào)節(jié)血糖的關(guān)鍵酶[21],抑制α-淀粉酶的活性可以阻礙糖類的分解、吸收和利用,避免餐后血糖迅速升高,而糖尿病及其并發(fā)癥的主要表現(xiàn)是餐后碳水化合物降解導(dǎo)致血糖升高,所以抑制α-淀粉酶的活性可以有效抑制血糖升高。本實(shí)驗(yàn)采用DNS法測(cè)定核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶的抑制作用[22-23]。將0.1 mL不同質(zhì)量濃度(0.1 g·L-1、0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、0.75 g·L-1、1.0 g·L-1、1.25 g·L-1、1.5 g·L-1)的核桃楸皮總黃酮溶液與0.1 mL 0.5 g·L-1的α-淀粉酶溶液在37 ℃下水浴10 min后,再將0.2 mL 1%淀粉溶液加入試管中,37 ℃水浴反應(yīng)10 min后,加入0.2 mL DNS試劑進(jìn)行顯色,并立即將其沸水浴 5 min 終止反應(yīng),迅速冷卻至室溫,蒸餾水稀釋,在540 nm處測(cè)量光密度值(optical density,OD),平行實(shí)驗(yàn)三次,以阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照,根據(jù)下式計(jì)算得出抑制率。

OD1為實(shí)驗(yàn)組光密度值;OD2為實(shí)驗(yàn)空白組光密度值;OD3為對(duì)照組光密度值;OD4為空白組光密度值。

1.3 結(jié)果

1.3.1 核桃楸皮總黃酮提取純化結(jié)果采用硝酸鋁比色法對(duì)所得總黃酮提取物進(jìn)行含量測(cè)定,以吸光度(absorbance,A)為縱坐標(biāo),對(duì)照溶液的濃度(C,mg·L-1)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,各對(duì)照品系列濃度在一定范圍內(nèi)均與吸光度呈良好的線性關(guān)系,得到回歸方程為A=0.025 1C+0.001 9,r=0.999,線性范圍為10.07～80.52 mg·L-1,經(jīng)計(jì)算得核桃楸皮總黃酮粉末純度(W)為93.85%,以用于后期核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶的抑制作用實(shí)驗(yàn)。

式中:W為核桃楸皮總黃酮粉末純度;C為待測(cè)樣品質(zhì)量濃度;V為待測(cè)樣品體積;m為待測(cè)樣品質(zhì)量。

1.3.2 核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶的抑制作用核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶的抑制作用以IC50值的大小作為評(píng)價(jià)依據(jù),IC50值為酶的活力被抑制一半時(shí)所需的抑制劑濃度[24]。圖1可得,隨著核桃楸皮總黃酮濃度的升高,α-淀粉酶被抑制的作用明顯提升(P<0.05),在核桃楸皮總黃酮濃度達(dá)到1.5 g·L-1時(shí),其對(duì)α-淀粉酶的抑制率達(dá)到85.25%。此外,通過(guò)GraphPad數(shù)據(jù)處理軟件計(jì)算得出IC50值為0.776 g·L-1,證明核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶具有良好的抑制作用,表明核桃楸皮總黃酮具有抑制2型糖尿病的潛力。陽(yáng)性對(duì)照藥阿卡波糖是常用的α-淀粉酶抑制劑,與核桃楸皮總黃酮的抑制率對(duì)比發(fā)現(xiàn),核桃楸皮總黃酮的抑制率不及阿卡波糖,其原因可能與提取純度有關(guān)。

圖1 核桃楸皮總黃酮對(duì)α-淀粉酶的抑制作用

2 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討核桃楸皮總黃酮對(duì)2型糖尿病的作用機(jī)制

2.1 資料與方法

2.1.1 活性成分相關(guān)靶點(diǎn)的篩選及“化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將文獻(xiàn)報(bào)道的核桃楸皮的27種黃酮類成分輸入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP,https://tcmsp-e.com/),以類藥性指數(shù)(drug-likeness,DL)>0.18和口服生物利用度(oral bioavailability,OB)>30%為篩選條件對(duì)27種黃酮類成分進(jìn)行篩選。將篩選后得到的化合物導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swisstargetprediction.ch/)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè),并通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org/)對(duì)靶點(diǎn)信息進(jìn)行校正。將核桃楸皮黃酮類活性成分與相關(guān)靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建 “化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò),并篩選出Degree值較高的化合物,作為核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的主要黃酮類活性成分[25]。

2.1.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選及交集靶點(diǎn)的獲取以“type Ⅱ diabetes mellitus(2型糖尿病)”為關(guān)鍵詞,在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)(http://db.idrblab.net/ttd/)、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.disgenet.org/)中搜集得到與2型糖尿病相關(guān)的靶點(diǎn),并將多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)所得靶點(diǎn)進(jìn)行整理去重,得到2型糖尿病的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)。利用在線工具Venny 2.1(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)得到化合物靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)的交集靶點(diǎn),并繪制Venn圖。

2.1.3 蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)(protein-protein interaction networks,PPI)的構(gòu)建在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(https://cn.string-db.org/)中輸入交集靶點(diǎn),將物種設(shè)定為 “Homo Sapiens”,得到網(wǎng)絡(luò)關(guān)系,利用Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行拓?fù)浞治?以度值為評(píng)價(jià)參數(shù)進(jìn)行拓?fù)浞治?度值越大,所示靶點(diǎn)顏色越深,面積越大。

2.1.4 富集分析將上述存在相互作用的藥物靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)輸入Metascape分析平臺(tái)(https://metascape.org/gp/index.htmL#/main/step1)分別進(jìn)行基因本體(gene ontology,GO)富集分析和京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信號(hào)通路富集分析,其中GO富集分析包括分子功能(molecular function,MF)、細(xì)胞組分(cellular component,CC)、生物學(xué)過(guò)程(biological process,BP)三個(gè)方面。使用微生信在線作圖平臺(tái)(http://www.bioinformatics.com.cn/)對(duì)所得富集數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化處理。

2.1.5 分子對(duì)接將上述分析所得的主要活性成分同PPI網(wǎng)絡(luò)中度值排名較高的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。首先利用PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www1.rcsb.org/)獲得疾病靶點(diǎn)的三維結(jié)構(gòu)圖,利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得主要活性成分的結(jié)構(gòu)圖,再通過(guò)PyMol軟件對(duì)疾病靶點(diǎn)進(jìn)行去水、加全氫操作,對(duì)活性成分進(jìn)行去水、加全氫和扭轉(zhuǎn)鍵設(shè)置系列操作,將所得的pbdqt文件導(dǎo)入AutoDock Vina 1.2.0中進(jìn)行半柔性對(duì)接,以結(jié)合能作為評(píng)判對(duì)接結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn),一般認(rèn)為,結(jié)合能<-7 kcal·mol-1的對(duì)接情況可以證明兩者之間具有較強(qiáng)的結(jié)合能力[26],將結(jié)合能最低的對(duì)接結(jié)果導(dǎo)入PyMol中進(jìn)行對(duì)接結(jié)果的可視化。

2.2 結(jié)果

2.2.1 核桃楸皮總黃酮類活性成分、潛在靶點(diǎn)及“化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)將查閱文獻(xiàn)獲得的27種黃酮類成分在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中以DL>0.18和OB>30%為篩選條件進(jìn)行篩選后得到9種化合物,分別為落新婦苷、兒茶素、刺芒柄花素、橙皮素、山柰酚、木犀草素、柚皮素、槲皮素、花旗松素,其具體參數(shù)可見表2。通過(guò)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)檢索獲得223個(gè)活性成分相關(guān)靶點(diǎn)。將所得化合物和藥物靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape軟件中進(jìn)行可視化,見圖2,圖中菱形為化合物,方形為靶點(diǎn),該網(wǎng)絡(luò)包含250個(gè)節(jié)點(diǎn)和987條邊,以度值排名前5位的成分為核心靶點(diǎn),分別是山柰酚、木犀草素、楊梅素、柚皮素、槲皮素。

圖2 “化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

表2 核桃楸皮總黃酮類活性成分及其參數(shù)

2.2.2 2型糖尿病疾病靶點(diǎn)及交集靶點(diǎn)在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)中以“type Ⅱ diabetes mellitus”為關(guān)鍵詞進(jìn)行疾病靶點(diǎn)的預(yù)測(cè),將多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)所得的靶點(diǎn)進(jìn)行去重后共得到疾病靶點(diǎn)1 360個(gè)。利用在線工具Venny 2.1對(duì)活性成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)進(jìn)行取交集處理,得到交集靶點(diǎn)99個(gè),并繪制Venn圖,如圖3。

圖3 核桃楸皮黃酮類活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)Venn圖

2.2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)將99個(gè)交集靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行分析,并采用Cytoscape軟件進(jìn)行可視化,繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖,見圖4,該網(wǎng)絡(luò)圖中共有99個(gè)節(jié)點(diǎn)和991條邊,拓?fù)浞治龊笠远戎禐闃?biāo)準(zhǔn),篩選得到度值前10位的靶點(diǎn)分別為:蛋白激酶B1(protein kinase B1,PKB1,AKT1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)、SRC、缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1α)、雌激素受體α(estrogen receptor alpha,ESR1)、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARG)。

圖4 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.2.4 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析將交集靶點(diǎn)輸入Metascape分析平臺(tái)中,共富集得到GO條目5 706個(gè),其中BP條目4 562個(gè),MF條目724個(gè),CC條目420個(gè),BP主要涉及細(xì)胞對(duì)含氮化合物、荷爾蒙、肽激素、胰島素刺激的反應(yīng);CC主要涉及細(xì)胞體、細(xì)胞器、神經(jīng)元等;MF主要涉及蛋白質(zhì)激酶、磷酸轉(zhuǎn)移酶、蛋白酪氨酸激酶、蛋白絲氨酸激酶等酶的催化活性等,在微生信在線作圖網(wǎng)站中進(jìn)行可視化,具體條目見圖5。以P<0.05為標(biāo)準(zhǔn),篩選出KEGG分析中排名前20位的通路進(jìn)行可視化,見圖6,分析可知,磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)-AKT信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路、Rap1信號(hào)通路等可能是核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的主要通路。

圖5 核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的GO富集分析柱狀圖

圖6 核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的KEGG信號(hào)通路富集分析圖

2.2.5 分子對(duì)接結(jié)果利用AutoDock軟件進(jìn)行分子對(duì)接以驗(yàn)證核桃楸皮黃酮類主要活性成分對(duì)2型糖尿病的治療作用,將活性成分山柰酚、木犀草素、楊梅素、柚皮素、槲皮素與SRC、ESR1、VEGFA、PPARG、MMP9、HIF1α、EGFR、AKT1、TNF、PTGS2進(jìn)行對(duì)接,對(duì)接結(jié)合能見表3,由對(duì)接結(jié)果可知,核桃楸皮黃酮類主要活性成分均與2型糖尿病靶點(diǎn)有一定相互作用,由此推測(cè)楊梅素、山柰酚、木犀草素可能為核桃楸皮總黃酮降糖的主要活性成分。將結(jié)合能最低的楊梅素與TNF、楊梅素與PTGS2導(dǎo)入PyMol軟件中進(jìn)行可視化處理,見圖7。

注:A:楊梅素與TNF;B:楊梅素與PTGS2。圖7 分子對(duì)接可視化示意圖

表3 分子對(duì)接結(jié)果 kcal·mol-1

3 討論

2型糖尿病在中醫(yī)中屬 “脾癉”“消渴”范疇,由于飲食不當(dāng),傷及腸胃,導(dǎo)致食物聚積,脾難行津。濕阻中焦,化生濕熱,腑氣不通,食積、痰濕、濕熱等產(chǎn)物堆積體內(nèi),使人體產(chǎn)生濕熱證、實(shí)熱證[27]。核桃楸皮為傳統(tǒng)中醫(yī)藥,系胡桃科胡桃屬核桃楸的干燥樹皮[28],經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)核桃楸煎劑具有降糖功效[29]。核桃楸皮總黃酮為核桃楸皮中的一類重要成分,通過(guò)DNS法實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),核桃楸皮總黃酮對(duì) α-淀粉酶具有良好的體外抑制作用,其IC50值為0.776 g·L-1,證明核桃楸皮在治療2型糖尿病中具有較高藥用價(jià)值,但目前對(duì)于核桃楸皮資源的利用與開發(fā)尚不完全,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,核桃楸皮黃酮成分具有降糖潛力,可作為未來(lái)新型的淀粉酶抑制劑來(lái)治療2型糖尿病。

根據(jù)“化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)可知,山柰酚、木犀草素、楊梅素等Degree值較高,提示這些黃酮類成分可能是治療2型糖尿病的關(guān)鍵化合物。山柰酚可改善大鼠3T3-L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖吸收能力,使醛糖還原酶途徑受到抑制,并改善胰島素的靈敏度,同時(shí)與抗炎抗氧化具有一定關(guān)聯(lián)[30]。木犀草素可以通過(guò)蛋白激酶C途徑降低脂肪組織中促炎性細(xì)胞因子TNF-α、MCP1等的mRNA水平,并且在體內(nèi)可以抑制高脂飲食所導(dǎo)致的脂肪組織炎癥的產(chǎn)生[31],同時(shí)木犀草素能使AR顯著降低,使一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)系統(tǒng)和Na+-K+-ATPase活性明顯提高,增加NO合成,減少氧化物破壞[32]。主要活性成分中楊梅素與疾病靶點(diǎn)的結(jié)合能最低,表明楊梅素與2型糖尿病的疾病靶點(diǎn)具有最優(yōu)的結(jié)合能力。研究表明,楊梅素可以有效抑制PPARγ273位點(diǎn)絲氨酸的磷酸化,從而提高胰島素的敏感性,達(dá)到降低血糖的功效[33-34],同時(shí)楊梅素還可以降低四氧嘧啶誘導(dǎo)的血糖升高,上調(diào)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)的表達(dá),活化AMP依賴的蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated proten kinase,AMPK)信號(hào)通路從而改善胰島素的抵抗能力[35]。

由PPI網(wǎng)絡(luò)圖可得,Degree值排名靠前的疾病靶點(diǎn)為TNF、PTGS2等,其中TNF可減少胰島素受體底物1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的相關(guān)表達(dá),抑制其與胰島素之間的結(jié)合,同時(shí)降低葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(glucose transporter 4,GLUT4)的表達(dá),促進(jìn)脂肪降解,促進(jìn)肝糖原合成,抑制炎癥信號(hào)通路傳導(dǎo),引起胰島素抵抗反應(yīng)[36-37]。PTGS2可編碼環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2),而促炎細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子可以在各種細(xì)胞中高度誘導(dǎo)PTGS2的表達(dá),從而參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等多種病理過(guò)程[38-39]。

GO與KEGG富集分析顯示,核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的潛在通路集中于PI3K-AKT信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路、Rap1信號(hào)通路。研究表明,PI3K-AKT信號(hào)通路可以抑制NF-κB磷酸化,有效降低體內(nèi)炎癥因子IL-6、細(xì)胞間黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule-1,ICAM-1)和 TNF-α 水平,促進(jìn)糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)磷酸化,抑制H9C2心肌細(xì)胞凋亡[40-44]。Ras信號(hào)通路通過(guò)提高核轉(zhuǎn)尋因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)水平改善脂代謝和胰島功能,降低NT-Pro BNP,對(duì)心血管起到保護(hù)作用[45]。以上結(jié)果提示核桃楸皮總黃酮具有潛在治療2型糖尿病的作用,并通過(guò)多條通路發(fā)揮作用。

綜上所述,本研究借助酶抑制實(shí)驗(yàn)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析探究核桃楸皮總黃酮治療2型糖尿病的作用機(jī)制,結(jié)果發(fā)現(xiàn)山柰酚、木犀草素、楊梅素、柚皮素、槲皮素等活性成分可通過(guò)調(diào)控AKT1、TNF、VEGFA、EGFR、SRC、HIF1A、ESR1、PTGS2、MMP9、PPARG等疾病靶點(diǎn),通過(guò)PI3K-AKT、Ras、Rap1等信號(hào)通路發(fā)揮治療作用,體現(xiàn)了中藥治療疾病的多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn),揭示了核桃楸皮總黃酮具有潛在的降糖作用,為核桃楸皮的有效利用和相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)提供理論依據(jù),同時(shí)為2型糖尿病的治療提供了嶄新視角。