鄧錦秀

（廣西融安縣疾病預防控制中心，廣西柳州 545400）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄球狀排列，無芽孢、無莢膜，廣泛分布于自然界，能引起各種感染和疾病，如皮膚感染、呼吸道感染、食物中毒、敗血癥等[1-2]。金黃色葡萄球菌具有廣泛的多重耐藥性和毒力因子，已成為公共衛(wèi)生領域備受關注的問題之一，可通過細菌培養(yǎng)和鑒定、分子生物學技術、免疫學檢測等對其進行檢測和診斷。在臨床和食品安全等領域，對金黃色葡萄球菌的快速檢測和準確診斷具有重要意義，可幫助預防和控制其感染和傳播[3]。

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）為革蘭氏陰性菌，呈弧狀、棒狀等多形態(tài)，無芽孢，有鞭毛，常存在于海水和海產(chǎn)品中，可引起腸胃感染，癥狀包括腹瀉、腹部絞痛、嘔吐、惡心等[4]。人們主要通過進食受污染的海產(chǎn)品感染副溶血性弧菌，潛伏期一般為4～96 h，嚴重感染者可能導致腸穿孔和敗血癥，甚至危及生命[5]。副溶血性弧菌是我國東南沿海地區(qū)引起食物中毒的重要病原體之一，目前食物中毒已成為主要的突發(fā)公共事件之一[6-7]。

能力驗證是指通過對已知樣品的測試評估實驗室在特定領域檢測能力的精確度、準確度和可靠性。能力驗證不僅可以評估實驗室的技術水平和能力，還能幫助實驗室制定和改進質量管理體系、提高檢驗人員的素質和意識、推動技術創(chuàng)新和學術交流，促進實驗室良性循環(huán)和發(fā)展。因此，能力驗證在現(xiàn)代實驗室管理中具有廣泛的應用價值和社會意義。

本文通過分析本實驗室2022年參加由中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心組織和實施的食品中金黃色葡萄球菌（定量）[ACAS-PT1328（2022）]、副溶血性弧菌（定性）[ACAS-PT1329（2022）]的檢測能力驗證的檢測結果，提升本實驗室對食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測能力。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

樣品來源于中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心，共檢測2個項目，每個項目2個樣品，樣品為白色凍干塊狀，為人工污染的食品樣品，西林瓶真空包裝。

1.2 試劑與儀器

Baird-Parker瓊脂（北京陸橋）；凍干血漿（北京陸橋）；腦心浸出液肉湯（北京陸橋）；血瓊脂平板（北京陸橋）；TCBS培養(yǎng)基（北京陸橋）；3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂（北京陸橋）；副溶血性弧菌干制生化鑒定試劑盒（北京陸橋）；科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基（科瑪嘉）；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱；XDD-84立式電熱壓力蒸汽消毒器；HR40-ⅡA2生物安全柜等。

1.3 檢驗依據(jù)

依據(jù)能力驗證參試指導書、《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》（GB 4789.10—2016）[8]第二法 金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法、《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗》（GB 4789.7—2013）[9]對樣品進行檢測。

1.4 檢驗方法

1.4.1 樣品制備

（1）金黃色葡萄球菌樣品（22-K795、22-Y967）用60 mL稀釋液再水化。樣品開啟后，立即加入5 mL稀釋液再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復用余下的稀釋液清洗西林瓶內壁2～3次，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液為待測樣品原液。

（2）副溶血性弧菌樣品（22-L696、22-E161）用60 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水再水化。樣品開啟后，立即加入5 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復用余下的3%氯化鈉堿性蛋白胨水清洗西林瓶內壁2～3次，回收清洗液置于上述無菌瓶中，此溶液為待測樣品原液。

1.4.2 接種、增菌及分離培養(yǎng)

（1）金黃色葡萄球菌樣品。以無菌吸管吸取25 mL金黃色葡萄球菌待測樣品原液置于盛有225 mL稀釋液的無菌瓶中，充分混勻，制成1∶10的樣品勻液；用微量移液器吸取1∶10樣品勻液1 mL注于盛有9 mL生理鹽水的無菌試管中，充分混勻，制成1∶100的樣品勻液。選擇3個稀釋度（100、10-1、10-2）的樣品勻液，每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL的接種量分別加入3個Baird-Parker平板，用無菌涂布棒涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣。平板涂布后靜置10 min，倒置后于36 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。同時以標準菌株金黃色葡萄球菌作陽性對照。典型的金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤，顏色呈灰黑色或黑色，有光澤，周圍繞以不透明圈，其外常有一清晰帶。

（2）副溶血性弧菌樣品。以無菌操作取25 mL副溶血性弧菌待測樣品原液置于盛有225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的無菌瓶中，充分混勻，制成1∶10樣品勻液。將樣品勻液于36 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h。22-L696、22-E161增菌液均渾濁生長，取增菌液各一環(huán)分別劃線接種于科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基和TCBS培養(yǎng)基，36 ℃培養(yǎng)24 h。同時以標準菌株副溶血性弧菌作陽性對照。

1.4.3 鑒定試驗

（1）金黃色葡萄球菌鑒定試驗。選擇有典型金黃色葡萄球菌菌落且同一稀釋度3個平板菌落數(shù)合計在20～200 CFU的平板，計數(shù)典型菌落數(shù)。從典型菌落中挑取5個可疑菌落進行鑒定試驗，分別做染色鏡檢、血漿凝固酶試驗（36 ℃培養(yǎng)6 h），同時劃線接種到血平板36 ℃培養(yǎng)24 h。

（2）副溶血性弧菌鑒定試驗。挑取3個可疑菌落接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板進行純培養(yǎng)，于36 ℃培養(yǎng)24 h后進行染色鏡檢、生化鑒定。

2 結果與分析

2.1 鑒定試驗結果

2.1.1 金黃色葡萄球菌鑒定試驗結果

金黃色葡萄球菌樣品22-K795、22-Y967在血平板上的菌落形態(tài)均為圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色，菌落周圍可見完全透明溶血圈，鑒定試驗結果見表1。

表1 金黃色葡萄球菌鑒定試驗結果

2.1.2 副溶血性弧菌鑒定試驗結果

副溶血性弧菌樣品22-L696、22-E161在科瑪嘉弧菌顯色平板上均為淡紫色菌落，在TCBS平板上均為圓形、半透明、表面光滑、綠色菌落，其鑒定試驗結果見表2。樣品22-L696、22-E161均檢出副溶血性弧菌。

表2 鑒定試驗結果

2.2 能力驗證實驗結果

2.2.1 金黃色葡萄球菌（定量）能力驗證結果

能力驗證結果判定|Z|≤2.0為滿意結果；2.0＜|Z|＜3.0為可疑結果；|Z|≥3.0為不滿意（離群）結果[10]。22-K795、22-Y967樣品的Z值分別為-1.5、0.4，|Z|≤2.0，說明本實驗室檢測均獲得滿意結果。

2.2.2 副溶血性弧菌（定性）能力驗證結果

能力驗證結果判定實驗室檢測結果與指定值一致時，評價為滿意，否則為不滿意（假陰性或假陽性）[11]。22-L696、22-E161樣品均檢出副溶血性弧菌，均與指定值一致，說明本實驗室檢測均獲得滿意結果。

3 結論與討論

能力驗證是檢測實驗室、認可機構和實驗室管理部門判定實驗室檢測能力的重要技術手段之一，也是實驗室內部質量控制的有效補充。能力驗證活動是判定實驗室能力的國際通行做法，其結果得到廣泛承認，對實驗室了解、提高和證實自身能力都具有積極作用。疾控機構的微生物檢驗室是為衛(wèi)生行政部門制定疾病預防與控制策略及采取措施、為衛(wèi)生監(jiān)督提供實驗室技術支持、為社會日益增長的衛(wèi)生需要提供衛(wèi)生技術服務的檢測機構，為保證所提供數(shù)據(jù)的公正、準確和科學，檢測實驗室需保證測定結果達到確定的檢驗質量標準。

本實驗室檢測結果（實驗室代碼ACAS-PT1328-056、ACAS-PT1329-056）均與ACAS-PT1328食品中金黃色葡萄球菌（定量）、ACAS-PT1329副溶血性弧菌（定性）的檢測能力驗證計劃指定值一致，能力評價均為“滿意”結果，說明本實驗室具有食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測能力。通過本次能力驗證，極大提高了本實驗室的檢測能力水平，同時在檢測過程中發(fā)現(xiàn)一些需要注意的事項。①樣品處理時要完全溶解、混勻，無菌操作。②Baird-Parker平板在使用前要確認無水珠，如果有水珠可放置于25～30 ℃培養(yǎng)箱中干燥，直到平板表面水珠消失，否則會出現(xiàn)菌落成片生長而無法計數(shù)的情況。③在Baird-Parker平板培養(yǎng)至24 h后可進行一次預計數(shù)，對發(fā)現(xiàn)的特征菌落用記號筆進行描點標記，避免在48 h后出現(xiàn)雜菌干擾結果判定[12]。④要嚴格控制培養(yǎng)基的溫度、濕度和通風等條件，以確保菌落的正常生長，并防止外界細菌污染。⑤在選擇培養(yǎng)基和試劑盒等試劑時，應注意其質量和有效期，避免使用過期或受污染的試劑，影響檢測結果的準確性和可靠性[13]。⑥在實驗過程中要按照規(guī)范的操作程序和實驗室管理要求進行，做好記錄和報告工作，及時處理發(fā)現(xiàn)的問題和異常情況，并根據(jù)檢測結果進行相應的數(shù)據(jù)分析和結論推斷，提高實驗室的整體技術水平和科學研究能力[14]。