王愛霞 張東鋒

肝癌(HCC)是臨床常見惡性腫瘤之一,在我國致死率較高,具有起病隱匿、惡性程度較高、腫瘤易發(fā)生轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),嚴(yán)重威脅人類身體健康。目前HCC仍以手術(shù)治療為主,近年來隨著化療、放療等手段的涌現(xiàn),HCC治愈率逐步上升,但復(fù)發(fā)率仍然較高[1]。微血管侵犯(MVI)是HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險因素,可增加HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險,近年來逐漸關(guān)注MVI的發(fā)病原因。由此可見,早期精準(zhǔn)診斷MVI對治療方案的制定及HCC的發(fā)展情況意義重大。miR-378a-5p是一類微小RNA分子,研究發(fā)現(xiàn)[2-3],miR-378a-5p在正常組織中發(fā)揮保護(hù)作用,且可在HCC中抑制肝干細(xì)胞活化,促進(jìn)肝損傷和纖維化強(qiáng)啟動因子,編碼活化蛋白質(zhì),在肝臟疾病中起到保護(hù)作用。超聲多模擬態(tài)是診斷HCC最常見的檢測方式,但臨床關(guān)于預(yù)測MVI的價值鮮有報道,基于此,本研究選取HCC患者100例作為本次研究對象,探討血清miR-378a-5p水平聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查對HCC進(jìn)展與MVI的評估價值,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年5月至2021年5月本院收治的HCC患者100例作為研究對象,根據(jù)診斷結(jié)果分為MVI組、非MVI組,其中MVI組60例,男性28例,女性32例;年齡52～76歲,平均(68.23±6.13)歲;體質(zhì)量45～74 kg,平均(59.14±5.78)kg;臨床分期:Ⅰ期25例,Ⅱ期19例,Ⅲ期16例。非MVI組40例,男性21例,女性19例;年齡50～77歲,平均(67.49±6.21)歲;體質(zhì)量46～72 kg,平均(58.34±5.49)kg;臨床分期:Ⅰ期23例,Ⅱ期9例,Ⅲ期8例。兩組患者一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①符合《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理指南(2015版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[4],并通過臨床癥狀及相關(guān)檢查確診。②患者依從性好,配合臨床檢查。③臨床資料完整。④符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求,且患者家屬均知曉情況并簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①合并急性或慢性感染性疾病。②長期服用抗抑郁藥物、鎮(zhèn)靜藥物。③合并其他重大疾病或精神病。④合并其他惡性腫瘤或存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。⑤合并嚴(yán)重自身免疫性疾病。

1.4 方法

臨床和生化檢查:取坐位于清晨測量收縮壓(SBP)和舒張壓(DBP)3次,取其平均值。取空腹靜脈血測定甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)。MVI診斷方式:觀察患者病理學(xué)切片,若發(fā)現(xiàn)癌栓聚集在癌旁肝組織中央靜脈、門靜脈分支、包膜小靜脈等微小靜脈內(nèi)或位于內(nèi)皮細(xì)胞襯覆的血管腔內(nèi)則判定為MVI。

血清miR-378a-5p水平檢測:所有受試者均于入院即刻采集空腹外周靜脈血3 mL分別保存于抗凝試管中,常溫靜置血液30 min后采取離心處理,于10 min后分離上清液,-70 ℃保存,以待使用。采用實(shí)時熒光定量PCR法檢測血清miR-378a-5p mRNA相對表達(dá)量[5]。應(yīng)用miRNA提取試劑盒(美國普洛麥格生物技術(shù)有限公司)提取血清中miRNA,采用加尾法在15 ℃ 30 min條件下對樣本進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄;需要合成的miR-378a-5p目的基因上游:5′-CUCCUGACUCCAGGUCCUGUGU-3′;下游:5′-ACUGGACUUGGAGUCAGAAGAG-3′。采用實(shí)時熒光定量PCR儀(杭州安杰思生物科技有限公司,型號:AGS9600)分析經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后的樣本,條件為95 ℃反應(yīng)10 min、93 ℃反應(yīng)20 s、75 ℃反應(yīng)30 s、60 ℃反應(yīng)20 s,共循環(huán)45次。

微血流成像的超聲多模態(tài)檢查方法:取患者仰臥位,應(yīng)用配備微血流成像的Philips彩超診斷儀(飛利浦(中國)投資有限公司,型號:EPIQ7)常規(guī)超聲檢查肝腫瘤數(shù)目、位置、大小、邊界、形態(tài)及內(nèi)部回聲情況。設(shè)置超聲造影成像機(jī)械指數(shù)<0.1,動態(tài)范圍50～60 dB,使用微血流成像技術(shù)檢查肝腫瘤最大切面,注射造影劑,儲存靜態(tài)、動態(tài)圖像。

1.5 觀察指標(biāo)

①HCC不同分期血清指標(biāo)和超聲表現(xiàn)差異。②MVI單因素分析。③MVI多因素分析。④血清miR-378a-5p水平聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查對MVI的診斷價值分析。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 HCC不同分期血清指標(biāo)和超聲表現(xiàn)比較

HCC Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期動脈相、門脈相造影及血清miR-378a-5p水平比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HCC患者動脈相造影表現(xiàn)為高增強(qiáng),門脈相表現(xiàn)為低增強(qiáng),見表1。

表1 HCC不同分期血清指標(biāo)和超聲表現(xiàn)比較

2.2 MVI單因素分析

單因素分析顯示,兩組性別、年齡、體質(zhì)量、腫瘤位置比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);MVI組包膜破損、無包膜、微血流Ⅱ級、Ⅲ級、門脈相高增強(qiáng)、腫瘤不光滑邊緣、AFP、CEA、miR-378a-5p、SBP、DBP高于非MVI組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 MVI單因素分析

2.3 MVI多因素Logistic回歸分析

以HCC發(fā)展情況作為因變量Y,以血清CEA、微血流分級、miR-378a-5p作為自變量X,進(jìn)行賦值。見表3。將X和Y納入Logistic回歸模型中,分析發(fā)現(xiàn)血清CEA、微血流分級、miR-378a-5p為發(fā)生MVI的獨(dú)立危險因素(P<0.05),見表4。

表3 賦值

表4 MVI多因素Logistic回歸分析

2.4 血清miR-378a-5p、聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查對MVI的診斷價值分析

ROC結(jié)果顯示,血清miR-378a-5p、血流成像的超聲多模態(tài)檢查單獨(dú)預(yù)測MVI的最佳截斷點(diǎn)分別為2.655 ng/mL、44.35 μg/mL,單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測MVI預(yù)后不良的AUC分別為0.731、0.697、0.852。見表5、圖1。

圖1 血清miR-378a-5p、微血流成像的超聲多模態(tài)檢查單獨(dú)及聯(lián)合檢測診斷早期MVI的ROC曲線

表5 血清miR-378a-5p、聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查單獨(dú)及聯(lián)合檢測對MVI預(yù)后不良的預(yù)測價值

3 討論

HCC早期表現(xiàn)不夠典型,通常在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)到達(dá)晚期,目前臨床采用手術(shù)治療HCC,但其術(shù)后進(jìn)展是一種較為復(fù)雜的病理過程,屬于多種因素參與之后的結(jié)果,研究證明[6]MVI是參與HCC術(shù)后進(jìn)展的重要機(jī)制,MVI是HCC發(fā)生轉(zhuǎn)移的第一步,因此,術(shù)前精準(zhǔn)預(yù)測MVI,進(jìn)而有效預(yù)測HCC患者術(shù)后進(jìn)展的風(fēng)險對于臨床治療方案的制定預(yù)后判斷意義重大。迄今為止,MVI主要通過術(shù)前影像學(xué)檢查預(yù)測,大量文獻(xiàn)證實(shí)[7-8],CT或核磁共振檢查可預(yù)測肝腫瘤MVI,但關(guān)于超聲應(yīng)用于MVI的研究很少見。相關(guān)研究[9]提示miR-378a-5p與MVI存在聯(lián)系,其不僅可存在于細(xì)胞組織中,還可存在于血液中,與癌細(xì)胞的增殖分化密切相關(guān)。因此了解血清miR-378a-5p及超聲表現(xiàn)在HCC的發(fā)展及MVI的診斷、預(yù)測價值,對指導(dǎo)臨床治療及改善預(yù)后具有積極意義。

本研究中,HCC患者動脈相造影表現(xiàn)為高增強(qiáng),門脈相表現(xiàn)為低增強(qiáng),而HCC不同分期患者miR-378a-5p水平呈下降趨勢,提示HCC患者的腫瘤分化程度與動脈相、門脈相密切相關(guān),且機(jī)體內(nèi)miR-378a-5p水平出現(xiàn)異常。與Wang等[10]研究結(jié)果一致,說明血清miR-378a-5p水平與微血流成像的超聲多模態(tài)檢查對于HCC進(jìn)展鑒別具有一定意義。本研究結(jié)果顯示,MVI組包膜破損、無包膜、單結(jié)節(jié)型、多結(jié)節(jié)型、腫瘤最大直徑、腫瘤不光滑邊緣、AFP、CEA、miR-378a-5p、SBP、DBP高于非MVI組,提示miR-378a-5p為MVI的不良因素,經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)微血流分級、miR-378a-5p為發(fā)生MVI的獨(dú)立危險因素,表明患者病程中血清miR-378a-5p、微血流成像的超聲多模態(tài)檢測對評估病情及患者預(yù)后意義重大。微血流成像超聲是近年來最新研發(fā)的成像技術(shù),可在低量范圍內(nèi)顯示更加豐富的血流信號,微血流成像的超聲檢測中血流分級數(shù)增加可能與MVI的HCC血供存在聯(lián)系[11],區(qū)分由于組織運(yùn)動產(chǎn)生的多普勒信號和血流多普勒信號,與既往臨床使用成像技術(shù)比較,其更能敏感地檢測出微小血流。miR-378a-5p作為重要轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子在臨床上備受關(guān)注,其與多種疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),故在其檢測到miR-378a-5p低表達(dá)可能與肝臟疾病發(fā)生有關(guān)[12]。

近年來,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)趨向于多種方式聯(lián)合應(yīng)用于臨床檢測。本研究ROC結(jié)果顯示,血清miR-378a-5p、聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測MVI預(yù)后不良的AUC分別為0.731、0.697、0.852。提示血清miR-378a-5p、聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查聯(lián)合檢測對評估MVI患者預(yù)后的價值優(yōu)于兩者單獨(dú)檢測,提高評估效能。血清miR-378a-5p、聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查聯(lián)合檢測的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度較高,對該病診斷有臨床指導(dǎo)意義,可為患者的早期診斷篩查提供一定的參考數(shù)據(jù)。微血流成像的超聲檢測作為一種新型技術(shù)可更加敏感地檢測到肝腫瘤微血管,有望成為HCC術(shù)后新生血管的評估標(biāo)準(zhǔn)。有學(xué)者證實(shí)[13-14],下調(diào)肝臟細(xì)胞中miR-378a-5p的表達(dá)可明顯促進(jìn)該疾病的發(fā)生,減弱肝臟功能,由此可見,臨床在治療HCC時需加強(qiáng)對血清miR-155、水平的動態(tài)監(jiān)測,并及時采取干預(yù)措施,維持兩者正常水平,提升預(yù)后效果。

綜上所述,miR-378a-5p在MVI患者中異常表達(dá),且血清miR-378a-5p、聯(lián)合微血流成像的超聲多模態(tài)檢查聯(lián)合檢測可作為早期MVI診斷及預(yù)后不良預(yù)測的有效參考依據(jù),同時miR-378a-5p的低表達(dá)可能與HCC的進(jìn)展程度相關(guān)。當(dāng)然本研究仍存在一定不足,例如樣本數(shù)量有待拓寬及隨訪時間較短等,在今后研究中需針對性改進(jìn),進(jìn)一步提升研究可信度。