趙曉飛 毛曉燕

作者單位：450000 鄭州大學附屬兒童醫(yī)院,河南省兒童醫(yī)院,鄭州兒童醫(yī)院(趙曉飛);450006 河南省直第三人民醫(yī)院(毛曉燕)

神經(jīng)母細胞瘤(NB)是源于交感神經(jīng)系統(tǒng)的惡胚胎瘤,多發(fā)于兒童群體,占嬰幼兒期惡性腫瘤的8%～12%,在兒童腫瘤性死亡中高達15%[1-2]。近些年隨著放化療、骨髓移植等的發(fā)展,NB的治療取得實質(zhì)性進展,低、中危的NB存活率得以提高[3-4]。但約有一半的NB患兒在確診時即為高危,高?；純杭幢憬?jīng)過多元化治療,仍有較高的復發(fā)風險,生存率較低,而初診時不精準的危險度分層與NB復發(fā)密切相關[5]。高危NB的生物學行為變異較大,故治療前對NB患兒進行危險度分層及預后評估意義重大?；诖?本研究以本院收治的106例高危NB患兒為研究對象,探究MYCN基因與PHOX2B基因聯(lián)合檢測在高危NB患兒危險度與預后評估中的臨床價值。信息如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2021年5月本院收治的106例高危NB患兒,研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。(1)納入標準:①符合《兒童神經(jīng)母細胞瘤診療專家共識》[6]中NB有關標準;②年齡≤14歲;③患兒意識、精神正常,可積極的配合本次研究;④患兒依從性較高;⑤患兒病歷有關資料齊全;⑥患兒家屬對本研究知情,且自愿簽訂知情同意書。(2)排除標準:①存在神經(jīng)疾患者;②伴有其他腫瘤疾病者;③合并自身免疫性疾病者;④存在凝血功能異常者;⑤合并藥物依賴史者;⑥存有嚴重的腦器質(zhì)性疾病者;⑦合并血液系統(tǒng)疾病者。所有患兒中男性58例,女性48例;年齡2～13歲,平均年齡(8.25±1.03)歲;骨髓轉(zhuǎn)移:68例有,38例無;病灶長徑:59例≥10 cm,47例<10 cm;體重9.2～56.2 kg,平均體重(33.29±10.17)kg;身高77～167 cm,平均身高(117.09±15.29)cm。

1.2 方法

MYCN基因檢測:運用熒光原位雜交(FISH)檢測,MYCN(2p24)探針購買自廣州安必平試劑公司,檢測時嚴格依據(jù)本實驗室的FISH操作規(guī)程與判讀標準進行操作與結(jié)果判讀。PHOX2B基因檢測:運用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(FQ-PCR)檢測PHOX2B基因表達水平,根據(jù)標準曲線定量分析,計算PHOX2B基因檢測濃度和內(nèi)參基因檢測濃度的比值。

1.3 觀察指標

(1)MYCN基因與高危NB患兒初診臨床特征[年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、乳酸脫氫酶(LDH)水平、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)水平、腫瘤轉(zhuǎn)移部位]關系。(2)PHOX2B基因與高危NB患兒初診臨床特征(年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、LDH水平、NSE、腫瘤轉(zhuǎn)移部位)關系。(3)MYCN基因、PHOX2B基因與高危NB患兒預后的關系:在化療6個療程后隨訪1年,以Kaplan-Meier法分析MYCN基因與PHOX2B基因與患兒預后的關系。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 高危NB患兒MYCN及PHOX2B基因表達情況

106例患兒中MYCN基因擴增60例(56.60%),PHOX2B基因陽性45例(42.45%)。

2.2 MYCN基因與高危NB患兒初診臨床特征關系

MYCN基因擴增患兒初診時LDH≥1500 U/L占比高于基因正常患兒,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2組年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、NSE水平、腫瘤轉(zhuǎn)移部位等初診臨床特征占比相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 MYCN基因與高危NB患兒初診臨床特征關系(例,%)

2.3 PHOX2B基因與高危NB患兒初診臨床特征關系

PHOX2B基因陽性患兒中腫瘤轉(zhuǎn)移部位≥3個與NSE≥370 μg/L占比高于基因陰性患兒,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2組年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、LDH水平等臨床特征占比相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 PHOX2B基因與高危NB患兒初診臨床特征關系(例,%)

2.4 MYCN基因、PHOX2B基因與高危NB患兒預后的關系

Kaplan-Meier結(jié)果顯示:MYCN基因擴增患兒與PHOX2B基因陽性患兒的1年生存率分別為48.33%(29/60)、44.44%(20/45),明顯低于MYCN基因正?；純?5.22%(30/46)與PHOX2B基因陰性患兒63.93%(39/61),差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.285、3.986,P=0.012、0.046)。見圖1-2。

圖1 MYCN基因與高危NB患兒預后關系的Kaplan-Meier圖

圖2 PHOX2B基因與高危NB患兒預后關系的Kaplan-Meier圖

3 討論

NB是兒童最為常見的顱外實體腫瘤,是由身體多個部位的未成熟神經(jīng)細胞發(fā)展所致的一種癌癥,通常來源于腹部或胸部的交感神經(jīng),最常起源于腎上腺,疾病起源與擴散部位不同的患兒其臨床表現(xiàn)亦不盡相同[7-8]。由于NB生物學行為變異很大,少數(shù)可自發(fā)性消退,或分化成熟為神經(jīng)節(jié)細胞瘤,而多數(shù)患兒病情會急速進展,致死風險較高[9-10]。臨床針對NB多采用綜合療法,但該病惡性程度較高,經(jīng)有效的治療后仍會有復發(fā)的情況發(fā)生。NB復發(fā)后病情更為嚴重、復雜,治療難度大,極大程度降低了患兒生存率,而在初診時未施行精準的危險度分層或治療期間骨髓或外周血內(nèi)微小殘留病(MRD)的存在,是造成復發(fā)的重要原因,故在疾病早期進行精準的危險度分層尤為重要。

臨床研究表明,初診時精確的危險度分層和在治療過程中密切監(jiān)測腫瘤細胞內(nèi)的MRD水平,有利于評估腫瘤負荷及藥物反應,適時調(diào)節(jié)危險度,繼而降低腫瘤復發(fā)與轉(zhuǎn)移風險,改善高危NB患兒預后[11]?，F(xiàn)階段,臨床主要運用影像學、形態(tài)學等對MRD予以評估,但均存在不同程度局限性。MYCN基因擴增為影響NB患兒預后的獨立因素,可用于NB危險度的判定。MYCN基因是一種細胞核轉(zhuǎn)錄因子,在正常情況下MYCN基因僅在胚胎組織及發(fā)育中的神經(jīng)組織內(nèi)表達,具有促使細胞生長周期縮短、加快細胞增殖等作用[12-13]。本研究結(jié)果顯示,106例患兒中MYCN基因擴增60例(56.60%),MYCN基因擴增患兒初診時LDH≥1500 U/L占比高于基因正?；純?表明MYCN基因擴增在病初的危險度分層方面原因價值較高。qPCR法檢測腫瘤細胞具有高度的敏感性,且該方式操作簡便,為監(jiān)測高危NB患兒的MRD的重要措施。PHOX2B基因是參與腎上腺髓質(zhì)與交感神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子,在NB腫瘤細胞內(nèi)特異性的表達而在正常細胞內(nèi)不表達[14-15]。本研究結(jié)果顯示,PHOX2B基因陽性45例(42.45%),PHOX2B基因陽性患兒多部位轉(zhuǎn)移≥3個與NSE≥370 μg/L占比高于基因陰性患兒,提示PHOX2B基因可用于高危NB患兒的危險度分層。本研究Kaplan-Meier結(jié)果顯示:MYCN基因擴增患兒與PHOX2B基因陽性患兒的1年生存率低于基因正?；純号c基因陰性患兒,表明MYCN基因擴增與PHOX2B基因陽性患兒的生存率更低,預后更差,兩項指標聯(lián)合檢測可有效評估高危NB患兒的預后。但仍需注意的是,本次研究尚存在納入樣本量較少等不足,可能會對本次試驗結(jié)果構(gòu)成一定的影響,后續(xù)臨床還需不斷的完善試驗設計,繼續(xù)擴大樣本量的納入,以進行更深層次的研究。

綜上所述,MYCN基因與PHOX2B基因可用于高危NB患兒的危險度分層,聯(lián)合檢測可有效評估高危NB患兒預后,臨床應用價值較高,可進行大力推廣。