丁梅

（梅河口市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，吉林梅河口 135000）

目前真空包裝的冷面、米線等加工食品因食用方便、特色美味而深受廣大消費(fèi)者的青睞，逐漸成為人們尤其是年輕人的主食之一。因?yàn)槔涿?、米線水分含量大且營養(yǎng)豐富，非常適合微生物生長(zhǎng)繁殖，容易引起發(fā)霉變質(zhì)，影響保質(zhì)期，所以冷面、米線保質(zhì)期短是阻礙其產(chǎn)業(yè)發(fā)展的最大瓶頸。GB 2760—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，乙二胺四乙酸二鈉食品添加劑可作為穩(wěn)定劑、凝固劑、抗氧化劑、防腐劑，在果醬、果脯、腌漬的蔬菜、堅(jiān)果與籽類罐頭、雜糧罐頭、復(fù)合調(diào)味料、飲料等食品中限量使用，但不允許在面粉制品和大米制品中使用[1]。然而，乙二胺四乙酸二鈉因具有良好的抗氧化和防腐作用，可有效延緩酶觸褐變，延長(zhǎng)保質(zhì)期，經(jīng)常被部分不法商販超范圍使用在面粉及其制品中，以提高產(chǎn)品的感官品質(zhì)[2-6]，因此，以小麥粉、大米粉為原料加工的冷面和米線存在較大的安全風(fēng)險(xiǎn)，需建立冷面、米線中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定方法，以便對(duì)其進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)控和評(píng)估。

乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定方法主要有液相色譜法[2-10]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11-13]，目前研究方向主要是針對(duì)番茄醬、腌漬蔬菜、各種罐頭等食品以及藥用注射液中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定。國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.278—2016[14]和 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)SN/T 3855—2014[15]的適用范圍也不包括于冷面和米線樣品測(cè)定。采用高效液相色譜法測(cè)定面粉及面粉制品中乙二胺四乙酸二鈉的含量雖然有文獻(xiàn)[2-6]報(bào)道，但其多采用三氯甲烷凈化或用陰離子(PXA)固相萃取柱凈化，前處理過程復(fù)雜。筆者根據(jù)冷面、米線樣品中含有大量淀粉，但其不含或少含色素和油脂的基質(zhì)特性，在國家標(biāo)準(zhǔn)方法和文獻(xiàn)[4,6]的基礎(chǔ)上，采用高速冷凍離心的凈化方式，建立了冷面、米線中乙二胺四乙酸二鈉的高效液相色譜測(cè)定方法。該方法操作簡(jiǎn)單快速，回收率、重復(fù)性均滿足GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》要求[16]，為冷面、米線中乙二胺四乙酸二鈉的檢測(cè)提供了技術(shù)參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

渦旋混合器：300～3 500 r/min，重載數(shù)顯型，上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

超聲波清洗器：KQ-500DE型，江蘇昆山市超聲儀器有限公司。

高速冷凍離心機(jī)：KH20R-Ⅱ型，湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司。

甲醇：色譜純，美國飛世爾科學(xué)世界公司。

四丁基溴化銨、乙酸鈉：優(yōu)級(jí)純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

磷酸、鹽酸：優(yōu)級(jí)純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

三氯化鐵：分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司。

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為99.96%，標(biāo)物編號(hào)為GBW(E) 060025，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

若記439nm、445nm、460nm…2209nm這45個(gè)指標(biāo)的值分別為X1、X2、X3… X45,兩個(gè)主成分PC1、PC2的得分記為y1、y2,綜合得分記作y綜。利用表達(dá)式y(tǒng)=ZX×t,得到兩個(gè)主成分各自的得分y1、y2,再將這兩個(gè)主成分的得分值以各自對(duì)應(yīng)特征值的方差貢獻(xiàn)率求和,既得到主成分的綜合得分,即

微孔濾膜： wwPTFE 膜，孔徑為0.2 μm，φ13 mm，美國頗爾公司。

冷面、米線樣品：市售。

1.2 儀器工作條件

色譜柱：Shimpack VP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，日本島津制作所)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL；流動(dòng)相：四丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液(pH 4.0)-甲醇(85∶15，體積比，下同)，流量為1.0 mL/min。

1.3 溶液配制

四丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液：稱取6.45 g四丁基溴化銨、2.46 g 乙酸鈉，加入1 000 mL 水，超聲溶解，加入磷酸調(diào)節(jié)pH 至4.0±0.1，經(jīng)0.22 μm 水相濾膜過濾后備用。

三氯化鐵溶液：稱取0.54 g 三氯化鐵，溶于90 mL 水中，加入0.10 mL 鹽酸，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，用水定容至標(biāo)線，混勻。

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：1 mg/mL，準(zhǔn)確稱取乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，用水溶解并定容至10 mL。

乙二胺四乙酸二鈉系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確吸取乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液25、100、250、500、2 500 μL 于50 mL 比色管中，加入水25 mL、三氯化鐵溶液1.0 mL，渦旋混勻1 min，超聲20 min，加水定容至標(biāo)線，配制成乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量濃度分別為0.5、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品處理

稱取冷面或米線樣品5.0 g 于50 mL 具塞離心管中，加入25 mL 水，渦旋1 min，超聲20 min，于4 ℃下以9 500 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液于50 mL 比色管中。剩余殘?jiān)貜?fù)提取一次，離心后合并上清液，加水定容至50 mL。吸取5 mL上清液于15 mL離心管中，加入0.5 mL三氯化鐵溶液，渦旋混勻1 min，超聲20 min，于4 ℃下以9 500 r/min 轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液過0.22 μm 濾膜，作為樣品溶液。

1.5 樣品測(cè)定

將乙二胺四乙酸二鈉系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。將樣品溶液注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到待測(cè)樣品溶液中乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量濃度，再根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)，計(jì)算樣品中乙二胺四乙酸二鈉的含量，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱與流動(dòng)相選擇

乙二胺四乙酸二鈉是極性很強(qiáng)的化合物，在普通C18色譜柱上基本無保留，若選擇使用普通C18色譜柱，必須使用含離子對(duì)試劑的流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，以增加乙二胺四乙酸二鈉在C18色譜柱上的保留時(shí)間；或者選擇使用SAX強(qiáng)陰離子交換色譜柱，以含磷酸二氫鉀緩沖液的流動(dòng)相洗脫。由于C18色譜柱的普及性和通用性均較好，同時(shí)考慮到配制離子對(duì)試劑流動(dòng)相和配制磷酸鹽緩沖液流動(dòng)相的難易程度相當(dāng)，所以選擇以Shimpack VP-ODS C18色譜柱分離。參考國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB 5009.278—2016，以四丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液-甲醇(體積比為85∶15)為流動(dòng)相等度洗脫，乙二胺四乙酸二鈉色譜保留時(shí)間、色譜峰形、響應(yīng)值均滿足檢測(cè)要求。乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖如圖1所示。

2.2 樣品處理方法優(yōu)化

GB 5009.278—2016 方法的適用檢測(cè)對(duì)象不包括冷面和米線樣品，若以該標(biāo)準(zhǔn)方法處理冷面和米線樣品，采用過混合陰離子(PXA)固相萃取柱凈化，很容易發(fā)生固相萃取柱堵塞。另外經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，采用過固相萃取柱的凈化方式，冷面、米線加標(biāo)樣品(加標(biāo)量為100 mg/kg)的回收率均小于20%。其主要原因是冷面、米線樣品中含大量淀粉基質(zhì)，在堵塞萃取小柱的同時(shí)，阻礙乙二胺四乙酸二鈉的洗脫，即用國標(biāo)方法規(guī)定的5%甲酸-甲醇水溶液5 mL 無法完全將乙二胺四乙酸二鈉洗脫下來，從而造成回收率偏低。根據(jù)冷面和米線樣品中不含或少含色素和油脂的基質(zhì)特性，樣品經(jīng)水提取，再用三氯化鐵絡(luò)合，采用在4 ℃下以9 500 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min的凈化方式，能有效去除樣品基質(zhì)干擾。采用該處理方法分別對(duì)冷面、米線加標(biāo)樣品(加標(biāo)量100 mg/kg)進(jìn)行測(cè)定，加標(biāo)回收率均在90%以上，滿足檢測(cè)要求?？瞻桌涿妗⒓訕?biāo)冷面樣品色譜圖分別如圖2、圖3所示。

圖3 加標(biāo)冷面色譜圖

2.3 線性方程與檢出限

在1.2儀器工作條件下，分別對(duì)乙二胺四乙酸二鈉系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量濃度在0.5～50 μg/mL 范圍內(nèi)與色譜峰面積有良好的線性關(guān)系，線性方程為y=33 620.783 29x-19 773.734 48，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。

在空白冷面和空白米線中加入低濃度的乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2儀器工作條件測(cè)定并計(jì)算信噪比，分別以3倍、10倍信噪比對(duì)應(yīng)的樣品中乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為方法檢出限、定量限，得冷面、米線樣品中乙二胺四乙酸二鈉檢出限均為1.5 mg/kg，定量限均為5 mg/kg。

2.4 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)

按三個(gè)濃度水平在空白冷面、米線樣品中加入乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.4方法制備成加標(biāo)樣品溶液，進(jìn)行樣品回收試驗(yàn)。對(duì)每個(gè)添加水平平行測(cè)定6 次，結(jié)果見表1。由表1 可知，乙二胺四乙酸二鈉的加標(biāo)回收率為90.7%～103.5%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～5.0% (n=6)，滿足GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》對(duì)精密度、回收率的要求。

表1 冷面、米線樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語

國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB 5009.278—2016 適用于果醬、果脯、腌漬的蔬菜罐頭、蔬菜泥(醬)、堅(jiān)果與籽類罐頭、八寶粥罐頭、復(fù)合調(diào)味料、飲料等基質(zhì)樣品中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定，在國標(biāo)方法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了樣品處理方法，建立了適合冷面、米線基質(zhì)樣品的乙二胺四乙酸二鈉分析方法，是國標(biāo)方法的有力補(bǔ)充。該方法操作簡(jiǎn)單、快速，準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性好，為冷面、米線中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定提供了方法依據(jù)和技術(shù)支持。