亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定天王補心丸中山麥冬

        2023-11-09 02:49:24李麗莉呂軼峰寧崇良覃麗酈白桂昌何頌華
        化學(xué)分析計量 2023年10期
        關(guān)鍵詞:方法質(zhì)量

        李麗莉,呂軼峰,寧崇良,覃麗酈,白桂昌,何頌華

        (廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所,國家藥品監(jiān)督管理局中藥材質(zhì)量監(jiān)測與評價重點實驗室,南寧 530021)

        天王補心丸來源于明代洪基《攝生秘剖》天王補心丹,最早被《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)1977年版收載,現(xiàn)收載于中國藥典2020年版一部[1],有大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸等劑型。天王補心丸由丹參、當(dāng)歸、石菖蒲、黨參、茯苓、五味子、麥冬、天冬、地黃、玄參、制遠(yuǎn)志、炒酸棗仁、柏子仁、桔梗、甘草、朱砂16 味藥材組成,具有滋陰養(yǎng)血,補心安神的功效。其中麥冬滋陰清熱,為方中臣藥。《中國藥典》中規(guī)定麥冬的來源為百合科植物麥冬的干燥塊根[1],山麥冬為百合科植物湖北麥冬或短葶山麥冬的干燥塊根。目前市場上由于麥冬需求量大,而山麥冬市場需求較少、產(chǎn)量大且與麥冬形態(tài)相近,有部分廠家以山麥冬代替麥冬或在麥冬中混入山麥冬為原料生產(chǎn)中成藥。雖然麥冬和山麥冬性狀相近,療效類似[2],但現(xiàn)代研究表明兩者的化學(xué)成分和藥理作用具有一定區(qū)別[3-7]。鑒于古今麥冬藥用習(xí)慣、現(xiàn)代化學(xué)與藥理研究基礎(chǔ)和中醫(yī)臨床實際,《中國藥典》將麥冬和山麥冬歸屬為兩個不同的藥味,不允許二者混用。

        根據(jù)文獻[8-11]記載,山麥冬皂苷B為湖北麥冬的特征性成分,短葶山麥冬皂苷C 為短葶山麥冬的特征性成分,而麥冬幾乎不含以上兩種成分。筆者以山麥冬皂苷B 和短葶山麥冬皂苷C 為指標(biāo)性成分,建立天王補心丸中山麥冬皂苷B和短葶山麥冬皂苷C的HPLC-MS/MS檢查方法,若樣品中檢出一定量的山麥冬皂苷B 或短葶山麥冬皂苷C,則認(rèn)為存在以山麥冬替代麥冬投料的摻偽情況。該方法對于天王補心丸的規(guī)范生產(chǎn)以及質(zhì)量安全具有重要意義。

        1 實驗部分

        1.1 主要儀器與試劑

        液相色譜-串連三重四級桿質(zhì)譜儀:Agilent 1290-6490型,美國安捷倫科技有限公司。

        分析天平:(1) ML204 型,感量為0.1 mg,梅特勒-托利多儀器上海有限公司;(2) XS205型,感量為0.01 mg,梅特勒-托利多儀器上海有限公司。

        數(shù)控超聲波清洗器:KQ-250DU 型,昆山超聲儀器有限公司。

        超純水儀:Milli-Q型,美國密理博公司。

        天王補心丸樣品:大蜜丸,市售。

        山麥冬皂苷B 對照品:批號為111907-201103,中國食品藥品檢定研究院。

        短葶山麥冬皂苷C 對照品:批號為111908-201102,中國食品藥品檢定研究院。

        乙腈:色譜純,美國費希爾公司。

        實驗所用其它試劑均為分析純。

        實驗用水為去離子水。

        1.2 儀器工作條件

        1.2.1 液相色譜儀

        色譜柱:Waters CORTECS?C18柱(2.1 mm×100 mm,2.7 μm,美國沃特世公司);柱溫:35 ℃;進樣體積:1 μL;流動相:A相為0.1% (體積分?jǐn)?shù),下同)的甲酸溶液,B相為乙腈,流量為0.2 mL/min;洗脫方式:梯度洗脫,洗脫程序見表1。

        表1 梯度洗脫程序

        1.2.1 質(zhì)譜儀

        離子源:電噴霧電離源;掃描模式:正負(fù)離子同時掃描(ESI+/ESI-);檢測方式:多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式;干燥氣:氮氣,流量為12 L/min,溫度為350 ℃;霧化氣壓力:1.379×105Pa;鞘氣:氮氣,流量為11 L/min,溫度為350 ℃;毛細(xì)管電壓:4 kV;噴嘴電壓:500 V。山麥冬皂苷B和短亭山麥冬皂苷C質(zhì)譜參數(shù)見表2。

        表2 山麥冬皂苷B和短亭山麥冬皂苷C的質(zhì)譜參數(shù)

        1.3 實驗方法

        1.3.1 樣品溶液制備

        取大蜜丸樣品,剪碎,混勻,取適量,精密稱定,加入兩倍量的硅藻土,研勻,取約4.5 g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,加入甲醇20 mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲處理(功率為180 W,頻率為50 kHz) 30 min,放冷,再次稱定質(zhì)量,用甲醇補足減失的質(zhì)量,搖勻。精密吸取續(xù)濾液1 mL,置于5 mL容量瓶中,加入甲醇稀釋至標(biāo)線,搖勻,濾過,濾液作為樣品溶液。

        1.3.2 陰性樣品溶液制備

        按《中國藥典》2020年版一部天王補心丸處方,取除麥冬以外的15味藥材,按大蜜丸的配比和制備方法制成45 g不含麥冬成分的陰性對照制劑。取陰性對照制劑1 g,按1.3.1 樣品溶液制備方法制成不含麥冬成分的陰性樣品溶液。

        1.3.3 對照制劑溶液制備

        按《中國藥典》2020年版一部天王補心丸處方,以正品麥冬為原料,按大蜜丸的配比和制備方法制成45 g 對照制劑。取對照制劑1 g,按1.3.1 方法制成對照制劑溶液。

        1.3.4 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

        (1) 定量用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。取山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C對照品適量,精密稱定,加入甲醇制成含山麥冬皂苷B 9 ng/mL、短葶山麥冬皂苷C 120 ng/mL的混合溶液,作為定量用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        (2) 系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別稱取山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C 對照品適量,精密稱定,以甲醇為溶劑,配制成山麥冬皂苷B 質(zhì)量濃度分別為5.18、10.37、20.74、51.85、103.70、207.40 ng/mL,短葶山麥冬皂苷C 質(zhì)量濃度分別為5.20、20.80、52.00、208.00、1040.00、2 080.00 ng/mL 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

        1.3.5 定量方法

        按1.2儀器工作條件測定,以定量用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為對照,以外標(biāo)單點法定量。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 樣品提取方法優(yōu)化

        根據(jù)處方,樣品中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為33.3%~47.2%的煉蜜,采用硅藻土與樣品混勻,可以達到去除蜂蜜干擾的目的。采用甲醇提取,與采用不同濃度的甲醇水溶液提取相比,可大幅度減少強極性雜質(zhì)的提取量,且有利于樣品溶液在質(zhì)譜中的霧化與離子化,使得靈敏度得到進一步的提高。

        2.2 色譜條件與質(zhì)譜條件優(yōu)化

        比較了乙腈-水、乙腈-10 mmol/L乙酸銨溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液3 種流動相體系,分別采用正、負(fù)離子模式進行掃描,發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用乙腈-0.1%甲酸溶液為流動相時,電離模式為正離子模式時,山麥冬皂苷B 有較強的響應(yīng),母離子為m/z723.4,為[M+H]+;電離模式為負(fù)離子模式時,短葶山麥冬皂苷C 有較強的響應(yīng),母離子為m/z915.5,為[M+COOH]-。故采用0.1%甲酸溶液為流動相A,以乙腈為流動相B,采用正、負(fù)離子模式同時測定,在保證靈敏度的同時,減少了流動相的用量。山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C 和天王補心丸樣品檢測離子色譜圖如圖1所示。

        圖1 山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C對照品及天王補心丸樣品檢測離子色譜圖

        2.3 專屬性試驗

        在1.2 儀器工作條件下,分別取陰性樣品溶液、對照制劑溶液進行測定,色譜圖如圖2和圖3所示。由圖2和圖3可以看出,陰性樣品和對照制劑色譜圖中均未出現(xiàn)與山麥冬皂苷B、短葶山麥冬C 對照品色譜保留時間相同的色譜峰,表明陰性樣品和對照制劑中共存成分對方法無干擾。

        圖2 陰性樣品溶液監(jiān)測離子色譜圖

        圖3 對照制劑溶液監(jiān)測離子色譜圖

        2.4 線性關(guān)系考察

        2.4.1 對照品線性

        取1.3.4.中的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,在1.2 儀器工作條件下,分別進樣1 μL 進行測定,以目標(biāo)物質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo),色譜峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,計算線性方程和相關(guān)系數(shù),結(jié)果見表3。由表3可知,山麥冬皂苷B和短葶山麥冬皂苷C的質(zhì)量濃度分別在5.18~207.4、5.2~2 080 ng/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均為0.999 3。

        表3 質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)

        2.4.2 摻偽線性

        在1.2儀器工作條件下,按天王補心丸(大蜜丸)的處方和制備方法,分別制備處方含量的5%、10%、20%、50%、80%、100%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))摻湖北麥冬、短葶山麥冬樣品,按1.3.1方法配制成不同摻偽比例的樣品溶液,測定并計算色譜峰面積,以目標(biāo)物摻偽質(zhì)量分?jǐn)?shù)(x)為橫坐標(biāo),以色譜峰面積(y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算線性方程和相關(guān)系數(shù),結(jié)果見表4。由表4 數(shù)據(jù)可知,麥冬摻偽(湖北麥冬、短葶山麥冬)質(zhì)量分?jǐn)?shù)在5%~100%范圍內(nèi)與色譜峰峰面積線性關(guān)系良好,可以準(zhǔn)確定量。

        表4 天王補心丸中湖北麥冬和短葶山麥冬摻入質(zhì)量分?jǐn)?shù)線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)

        2.5 方法檢出限

        取摻偽樣品溶液,不斷稀釋并測定,以信噪比為3 對應(yīng)的樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為方法檢出限,得山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C的檢出限分別為56、134 ng/g。

        2.6 精密度試驗

        取6份不含山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C的樣品,各4.5 g,分別精密加入山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C 的質(zhì)量濃度分別為4.14、4.16 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL,按1.3.1方法制備成同時含有山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C的樣品溶液,分別測定,結(jié)果列于表5。由表5可知,山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C 6次測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.57%、5.27%,表明該方法精密度良好。

        表5 精密度試驗結(jié)果

        2.7 穩(wěn)定性試驗

        取摻偽樣品溶液1 份,分別于溶液配制后第0、4、8、12、16、20、24 h進樣測定,色譜峰面積測定結(jié)果列于表6。由表6 可知,24 h 內(nèi)山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C色譜峰峰面積測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.67%、3.93%,表明樣品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        表6 不同放置時間時色譜峰面積測定結(jié)果

        2.8 加標(biāo)回收試驗

        精密稱取陰性對照制劑約4.5 g,平行稱取9份,分別精密加入高、中、低不同質(zhì)量濃度水平的山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各0 mL,按1.3.1 方法制備加標(biāo)樣品溶液,每種溶液分別測定3次,結(jié)果列于表7。由表7數(shù)據(jù)可知,山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C 的平均回收率分別為99.16%、101.54%,表明該方法準(zhǔn)確度較高。

        3 結(jié)語

        中藥材是中成藥生產(chǎn)的基礎(chǔ)物質(zhì),其質(zhì)量狀況將會直接影響藥品質(zhì)量,隨著中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展及中藥材資源的短缺,中藥的質(zhì)量問題屢屢發(fā)生。中藥制劑中,以山麥冬代替麥冬作為料的現(xiàn)象常見報道[12-17],說明藥品生產(chǎn)企業(yè)對中藥制劑的原料把控缺失,企業(yè)質(zhì)檢人員缺乏一定的鑒別能力或企業(yè)存在失信的行為,需引起相關(guān)技術(shù)部門和監(jiān)管部門的注意。采用HPLC-MS/MS 法測定天王補心丸中山麥冬專屬性強,靈敏度高,可以簡化樣品處理過程,提高檢測準(zhǔn)確性。通過優(yōu)化梯度洗脫程序與質(zhì)譜條件,采用MRM 模式,正負(fù)離子同時測定,節(jié)省了測定時間,為藥品質(zhì)量監(jiān)督提供了技術(shù)支持。

        猜你喜歡
        方法質(zhì)量
        “質(zhì)量”知識鞏固
        質(zhì)量守恒定律考什么
        做夢導(dǎo)致睡眠質(zhì)量差嗎
        學(xué)習(xí)方法
        關(guān)于質(zhì)量的快速Q(mào)&A
        可能是方法不對
        用對方法才能瘦
        Coco薇(2016年2期)2016-03-22 02:42:52
        質(zhì)量投訴超六成
        汽車觀察(2016年3期)2016-02-28 13:16:26
        四大方法 教你不再“坐以待病”!
        Coco薇(2015年1期)2015-08-13 02:47:34
        賺錢方法
        在线国产丝袜自拍观看| 国产精品综合日韩精品第一页| 中文无码日韩欧免费视频 | 亚洲人成电影在线无码| 日本一区二区三区四区在线看| 精品人妻久久一日二个| 99精品国产在热久久无码| 国产一区二区三区四区五区vm| 国产午夜精品久久久久| 草逼视频免费观看网站| 亚洲乱码一区av春药高潮| 无码毛片aaa在线| 日本最新一区二区三区免费看| 国产不卡在线观看视频| 精品视频无码一区二区三区| 精品久久久久久久久久久aⅴ| 人妻少妇av中文字幕乱码免费| 人妻少妇精品视中文字幕免费| 欧美video性欧美熟妇| 91国视频| 国产精品毛片av一区二区三区| 国产精品黑丝美女啪啪啪| 国产无人区码一码二码三mba| 九色91精品国产网站| 白白色日韩免费在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久不卡| 少妇被躁爽到高潮无码文| 色偷偷女人的天堂亚洲网| 加勒比东京热一区二区| 亚洲av高清在线一区二区三区| 国产一区二区三区小说| 中文片内射在线视频播放| 国产精品 无码专区| 欧美午夜精品久久久久久浪潮| 亚洲视频在线播放免费视频| 精品久久久少妇一区二区| 亚洲av无码成人专区片在线观看 | 丰满岳妇乱一区二区三区| 免费国产黄片视频在线观看| av中文字幕在线直播| 婷婷色香五月综合激激情|