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        銀青抗感口服液指紋圖譜及解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥效研究

        2023-10-29 06:50:44王雅璐張淑雅汪晶舒孌王小莉蘇克雷
        中醫(yī)藥信息 2023年10期
        關(guān)鍵詞:號(hào)峰綠原口服液

        王雅璐,張淑雅,汪晶,舒孌,王小莉,蘇克雷?

        (1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,江蘇 南京 210028;2.江蘇省中醫(yī)藥研究院,國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥口服制劑釋藥系統(tǒng)重點(diǎn)研究室,江蘇 南京 210028)

        銀青抗感口服液是江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑,是江蘇省名老中醫(yī)朱啟勇主任醫(yī)師在銀翹散和桑菊飲的基礎(chǔ)上加減化裁而成,由金銀花、大青葉、板藍(lán)根、野菊花、荊芥、連翹、炙甘草等共10味藥組成;具有疏散風(fēng)熱、清熱解毒等功效,主治伴有發(fā)熱、頭脹痛、咽喉紅腫疼痛、咳嗽、痰黏或黃、鼻塞黃涕等癥狀的感冒(風(fēng)熱證)[1]。風(fēng)熱感冒是風(fēng)熱之邪犯表、肺氣失和所致,是感受風(fēng)熱之邪所致的表證。“風(fēng)熱感冒”一詞最早出現(xiàn)在《諸病源候論·風(fēng)熱候》,載其:“風(fēng)熱病者,風(fēng)熱之氣,先從皮毛入于肺也。肺為五臟上蓋,候身之皮毛,若膚腠虛,則風(fēng)熱之氣,先傷皮毛,乃入肺也。其狀使人惡風(fēng)寒戰(zhàn),目欲脫,涕唾出?!敝委熞诵翛鼋獗?、發(fā)散風(fēng)熱,常用銀翹散、桑菊飲等[2]。處方中的金銀花與連翹是治療新型冠狀病毒感染的“三方三藥”中連花清瘟顆粒、金花清感顆粒的共同藥材[3]。在新型冠狀病毒流行期間,銀青抗感方亦在臨床發(fā)揮了重要的作用,可以有效應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒引起的體溫升高、流涕、咽喉疼痛等癥狀。

        中藥指紋圖譜能全面、定量地反映中藥所包含的化學(xué)信息,被廣泛應(yīng)用于中藥和中藥制劑的質(zhì)量控制研究工作[4-11]。銀青抗感口服液藥理作用及質(zhì)量控制的研究較少,故本研究建立了銀青抗感口服液高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜,并結(jié)合動(dòng)物模型評(píng)價(jià)其解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的功效,為全面控制和評(píng)價(jià)銀青抗感口服液的質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。

        1 材料

        1.1 儀器

        高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent 公司,型號(hào):Agilent 1260);微量分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司,型號(hào):XP-6);離心機(jī)(上海安亭科技儀器廠,型號(hào):TGL-16B);高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf 公司,型號(hào):AG-22331);細(xì)胞分析儀(賽默飛世爾科技有限公司,型號(hào):Attune NxT);倒置光學(xué)顯微鏡(日本奧林巴斯有限公司,型號(hào):Ⅸ-73);電子溫度計(jì)(德特寵物有限公司,型號(hào):D-10);酶標(biāo)儀(Thermo,型號(hào):Multiskan FC);洗板機(jī)(HEALES,型號(hào):PW-812)。

        1.2 試劑及藥品

        阿司匹林維生素C 泡騰片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字J20140076);干酵母(安琪酵母有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H51023524);地塞米松(信宜有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H31020793);二甲苯(南京化學(xué)試劑,批號(hào):C0650110223);乙酸(南京化學(xué)試劑,批號(hào):A116166);綠原酸(含量96.8%)、蒙花苷(含量 ≥ 98%)、連翹苷(含量98.9%)(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110753-201817、111528-202112、110821-200711);新綠原酸(含量99.67%)、隱綠原酸(含量99.07%)、異綠原酸A(含量98.66%)、異綠原酸B(含量99.05%)、異綠原酸C(含量99.84%)、連翹酯苷A(含量98.33%)(成都曼思特生物技術(shù)有限公司,批號(hào):MUST-20031002、MUST-20042403、MUST-21011110、MUST-20031602、MUST-20031603、MUST-21031105);表告伊春(含量 ≥ 98%)(成都普菲德生物技術(shù)有限公司,批號(hào):150715);大鼠TNF-α、IL-1β 及IL-6 ELISA 試劑盒(武漢伊萊瑞特有限公司,貨號(hào):EL-R0012c、EL-R2856c、EL-R0015c);銀青抗感口服液[江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥制劑室研制,批號(hào):20210820(S1)、20210827(S2)、20210903(S3)、20210910(S4)、20210917(S5)、20210924(S6)、20210930(S7)、20211008(S8)、202101015(S9)、20211022(S10)]。

        1.3 動(dòng)物

        SD 大鼠(SPF 級(jí))62 只,江蘇中醫(yī)藥研究院動(dòng)物中心提供,體質(zhì)量180~200 g,雌雄各半,動(dòng)物許可證號(hào):SYXK(蘇)2021-0025,批號(hào):202127438;KM 小鼠(SPF 級(jí))48 只(江蘇中醫(yī)藥研究院動(dòng)物中心),體質(zhì)量(20±5)g,雌雄各半,動(dòng)物許可證號(hào):SYXK(蘇)2021-0025,批號(hào):202120812、202120813。

        2 方法

        2.1 指紋圖譜的建立與評(píng)價(jià)

        2.1.1 色譜條件

        色譜柱采用SunfireTM-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)為流動(dòng)相,進(jìn)行梯度洗脫(0~22 min:10%A;22~27 min:10%~15%A;27~60 min:15%A;60~95 min:15%~20%A;95~120 min :20%~32%A);流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):327、245、202 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

        2.1.2 混合對(duì)照品溶液

        分別精密稱定新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、連翹酯苷A、蒙花苷、連翹苷、表告伊春對(duì)照品于容量瓶中,加75%甲醇制備成質(zhì)量濃度分別為58.210、170.720、61.400、67.290、69.480、73.480、46.140、23.350、87.560、58.360 μg/mL的混合溶液,即得。

        2.1.3 供試品溶液

        精密量取銀青抗感口服液5 mL,置250 mL容量瓶中,加超純水定容,混勻。取稀釋液5 mL,精密量取,置于10 mL 容量瓶中,加甲醇定容,混勻,離心,上清液經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

        2.1.4 精密度考察

        精密量取編號(hào)為S1 的銀青抗感口服液(批號(hào):20210820)5 mL,按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次,記錄各共有峰的保留時(shí)間及峰面積[12]。以9 號(hào)峰異綠原酸B 為參照峰,計(jì)算可知各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均≤ 0.37%,相對(duì)峰面積的RSD 均 ≤ 3.7%,表明儀器精密度良好。

        2.1.5 穩(wěn)定性考察

        精密量取編號(hào)為S1 的銀青抗感口服液(批號(hào):20210820)5 mL,按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件,分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定,記錄各共有峰的保留時(shí)間及峰面積[12]。以9號(hào)峰異綠原酸B為參照峰,計(jì)算可知各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD 均 ≤ 0.37%,相對(duì)峰面積的RSD 均 ≤4.0%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.1.6 重復(fù)性考察

        精密量取編號(hào)為S1 的銀青抗感口服液(批號(hào):20210820)5 mL,平行6 份,按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄各共有峰的保留時(shí)間及峰面積[12]。以9 號(hào)峰異綠原酸B為參照峰,計(jì)算可知各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均 ≤ 0.39%,相對(duì)峰面積的RSD 均 ≤ 2.48%,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.1.7 特征指紋圖譜的生成與相似度評(píng)價(jià)

        按“2.1.3”項(xiàng)下制備編號(hào)為S1~S10 的10 批銀青抗感口服液的供試品溶液,按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣并記錄各樣品色譜圖,導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件(2012版)[13]。以S1為參照?qǐng)D譜,時(shí)間窗寬度設(shè)置為0.3 min,生成銀青抗感口服液的對(duì)照特征指紋圖譜和10批銀青抗感口服液的HPLC特征圖譜匹配圖[12],結(jié)果見圖1 和圖2。其中,共確認(rèn)保留時(shí)間穩(wěn)定的共有峰16個(gè),以9號(hào)峰異綠原酸B為參照峰,指認(rèn)出10個(gè)化合物結(jié)果,分別是1號(hào)峰(新綠原酸)、2號(hào)峰(綠原酸)、3 號(hào)峰(隱綠原酸)、8 號(hào)峰(連翹酯苷A)、9 號(hào)峰(異綠原酸B)、10 號(hào)峰(異綠原酸A)、11 號(hào)峰(異綠原酸C)、13 號(hào)峰(蒙花苷)、14 號(hào)峰(表告伊春)以及16 號(hào)峰(連翹苷),結(jié)果見圖3。

        圖1 銀青抗感口服液的對(duì)照特征圖譜

        圖2 10 批銀青抗感口服液樣品特征圖譜

        圖3 銀青抗感口服液的對(duì)照特征指紋圖譜(R)及混合對(duì)照品的 HPLC 圖譜

        以9 號(hào)峰異綠原酸B 為參照峰,計(jì)算S1~S10 號(hào)樣品的特征指紋圖譜與對(duì)照特征指紋圖譜的相似度,分別為0.912、0.926、0.950、0.948、0.940、0.950、0.953、0.956、0.946,均>0.9,說(shuō)明樣品穩(wěn)定性、均一性較好。

        2.2 銀青抗感口服液藥效學(xué)評(píng)價(jià)

        2.2.1 給藥溶液的制備

        不同濃度銀青抗感口服液的制備:取銀青抗感口服液(生藥量為1.373 g/mL)分別減壓濃縮至生藥量為2.162、2.343 g/mL備用。

        陽(yáng)性藥物的制備:取0.8 g阿司匹林維生素C 泡騰片用水分別配制成濃度為0.008 4 g/mL和0.014 1 g/mL的藥液備用;取0.75 mg 地塞米松用水配制成濃度為0.011 4 mg/mL的藥液備用。

        2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥

        解熱實(shí)驗(yàn):取SD 大鼠62 只,每天測(cè)量肛溫2 次(間隔60 min),連續(xù)3 d,選取溫度差小于0.3 ℃,且在36.6~38.8 ℃范圍內(nèi)的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[14]。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性藥物組和銀青抗感口服液高劑量、中、低劑量組(簡(jiǎn)稱高、中、低劑量組)。除空白組外,其余各組大鼠背部皮下注射15%干酵母(10 mL/kg)致熱。陽(yáng)性藥物組按阿司匹林10 mL/kg(濃度為0.008 4 g/mL),高劑量組按20 mL/kg(濃度為2.162 g/mL)、中劑量組按15 mL/kg(濃度為1.373 g/mL)、低劑量組按7.86 mL/kg(濃度為1.373 g/mL)分別灌胃藥液,空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水。

        抗炎實(shí)驗(yàn):取KM小鼠48只,依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性藥物組和銀青抗感口服液高、中、低劑量組(簡(jiǎn)稱高、中、低劑量組)。陽(yáng)性藥物組按地塞米松0.1 mL/10 g,高劑量組按0.27 mL/10 g(濃度為2.343 g/mL)、中劑量組按0.14 mL/10 g(濃度為2.162 g/mL)、低劑量按0.11 mL/10 g(濃度為1.373 g/mL)分別灌胃藥液,空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水,每日1次,連續(xù)7 d。

        鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn):取KM小鼠48只,依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為空白組(等劑量生理鹽水)、模型組、陽(yáng)性藥物組和銀青抗感口服液高、中、低劑量組(簡(jiǎn)稱高、中、低劑量組)。陽(yáng)性藥物組按0.1 mL/10 g(濃度為0.0141 g/mL),高、中、低劑量組按“2.2.3”項(xiàng)下劑量灌胃,每日1 次,連續(xù)7 d。

        2.2.3 標(biāo)本收集

        解熱實(shí)驗(yàn)中于初次給藥后0.5、1、2、3、4 h 分別測(cè)定大鼠體溫,腹主動(dòng)脈取血并分離血清,保存于-80 ℃冰箱,備用。

        抗炎實(shí)驗(yàn)中第7 天給藥結(jié)束1 h 后,除空白組外,其他各組小鼠右耳正反面均勻涂抹40 μL 二甲苯溶液,誘導(dǎo)小鼠耳組織發(fā)炎腫脹,左耳不涂抹作為自體對(duì)照(對(duì)照組不處理)。0.5 h后眼眶取血,記錄血常規(guī)指標(biāo);頸椎脫臼處死小鼠,沿耳廓基線剪下雙耳,用6 mm打孔器在兩只耳朵相同部位打耳片,稱重[15]。稱重后的耳組織一部分置于10%甲醛中固定,另一部分存入-80 ℃冰箱備用。

        鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中第7天給藥結(jié)束1 h后,除空白組外,其他各組小鼠按0.1 mL/10 g腹腔注射0.6%醋酸溶液,引起小鼠疼痛[16-18]。觀察并記錄20 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)(以腹部?jī)?nèi)凹,軀干與后腿伸展,臀部高起為陽(yáng)性反應(yīng))。

        2.3 觀察指標(biāo)

        ELISA 試劑盒測(cè)定血清中的內(nèi)源性致熱因子TNF-α 和IL-1β、IL-6 水平,具體操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。取耳組織置于4%的甲醛固定,按常規(guī)步驟進(jìn)行HE 染色,置光學(xué)顯微鏡下觀察耳組織病理形態(tài)的變化。記錄小鼠扭體次數(shù),計(jì)算鎮(zhèn)痛抑制率。

        鎮(zhèn)痛抑制率(%)=(模型組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))×100%

        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用 SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,數(shù)據(jù)以±s表示,采用單因素方差進(jìn)行分析。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 結(jié)果

        3.1 各組大鼠造模后不同時(shí)間點(diǎn)體溫差比較

        給藥1 h 后,各給藥組的體溫差與模型組相比均降低,表明藥物開始發(fā)揮療效。給藥2 h 后,各給藥組與模型組相比,P<0.01。結(jié)果顯示,陽(yáng)性藥物組療效最佳,高、中、低劑量組均具有降低體溫的作用,且體溫隨著劑量的增加而降低。結(jié)果見表1。

        表1 各組大鼠造模后不同時(shí)間點(diǎn)體溫差比較(±s,℃)

        表1 各組大鼠造模后不同時(shí)間點(diǎn)體溫差比較(±s,℃)

        注:與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,**P<0.01。

        組別空白組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組4 h 0.08±0.09 1.01±0.17##0.24±0.28**0.33±0.17**0.41±0.10**0.49±0.07**n 10 10 10 10 10 10給藥劑量/(mL/kg)10 10 10 20 15.75 7.88 0 h 0.11±0.17 0.94±0.19##0.92±0.15##0.93±0.16##0.94±0.21##0.95±0.27##0.5 h 0.08±0.13 1.02±0.23##0.94±0.14 0.96±0.15 1.06±0.20 1.05±0.26 1 h 0.11±0.14 0.98±0.18##0.35±0.22**0.48±0.36**0.64±0.24**0.88±0.38 2 h 0.06±0.16 1.04±0.26##0.30±0.22**0.41±0.49**0.49±0.46**0.74±0.28**3 h 0.11±0.17 1.24±0.38##0.27±0.28**0.37±0.17**0.47±0.26**0.56±0.18**

        3.2 各組大鼠血清中TNF-α、IL-1β及IL-6含量比較

        ELISA 結(jié)果顯示,與模型組相比,各給藥組中內(nèi)源性致熱源TNF-α、IL-1β 及IL-6 的含量均有明顯的降低(P<0.01),表明銀青抗感口服液的高、中、低劑量組均有解熱作用。同時(shí)這3 種因子也是重要的促炎因子,進(jìn)一步說(shuō)明銀青抗感口服液還具有一定的抗炎作用。結(jié)果見表2。

        表2 各組大鼠血清中TNF-α、IL-1β及IL-6含量比較(±s,pg/mL)

        表2 各組大鼠血清中TNF-α、IL-1β及IL-6含量比較(±s,pg/mL)

        注:與空白組比較,##P <0.01;與模型組比較,**P<0.01。

        組別空白組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組IL-6 28.76±3.16 57.51±4.50##35.75±2.81**37.63±3.12**43.33±2.94**50.15±3.41**n8 8 8 8 8 8 TNF-α 43.43±4.43 96.76±4.71##54.12±3.91**52.47±3.95**69.71±4.84**83.11±6.46**IL-1β 92.06±5.56 144.01±5.47##103.80±7.21**100.90±5.63**117.85±5.65**129.12±5.99**

        3.3 各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)水平比較

        抗炎實(shí)驗(yàn)觀察到,與模型組相比,陽(yáng)性藥物組和高劑量組均可明顯降低白細(xì)胞計(jì)數(shù)(P<0.01);中劑量組有降低白細(xì)胞計(jì)數(shù)的作用(P<0.05);低劑量組不明顯。結(jié)果見表3。

        表3 各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)水平比較(±s)

        表3 各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)水平比較(±s)

        注:與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        白細(xì)胞計(jì)數(shù)/(109/L)2.32±0.90 4.97±0.87##2.97±0.62**2.97±0.97**3.90±0.56*4.87±1.01組別空白組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組n 6 6 6 6 6 6

        3.4 HE染色結(jié)果

        空白組小鼠耳組織較為狹窄,血管及周圍纖維組織細(xì)胞分層明顯;模型組小鼠耳組織明顯腫脹,血管及周圍纖維組織細(xì)胞分層模糊,出現(xiàn)明顯充血和水腫現(xiàn)象,橫紋肌纖維排列紊亂。不同劑量的銀青抗感合劑對(duì)耳組織腫脹程度有不同的改善。陽(yáng)性藥物組與高劑量組僅存在部分水腫、充血和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象,低劑量組的充血和水腫現(xiàn)象仍十分明顯。結(jié)果見圖4。

        圖4 各組小鼠耳組織HE染色結(jié)果圖(×200)

        3.5 各組小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

        與模型組比較,陽(yáng)性藥物組和高劑量組有明顯鎮(zhèn)痛作用(P<0.01);中劑量組小鼠的扭體次數(shù)減少(P<0.05);低劑量組無(wú)明顯的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果見表4。

        表4 各組小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(±s)

        表4 各組小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(±s)

        注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        組別模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組鎮(zhèn)痛抑制率/%—49.58 48.77 29.75 11.86 n8 8 8 8 8劑量/(mL/10 g)0.10 0.10 0.27 0.14 0.11扭體次數(shù)/次45.38±8.81 22.88±7.10**23.25±6.78**31.88±7.45*40.00±6.07

        4 討論

        感冒是一種急性感染性呼吸系統(tǒng)疾病,主要由流感病毒導(dǎo)致[19]。臨床用于治療感冒的抗病毒等藥物對(duì)患者的肝、腎功能具有一定的損害,而中醫(yī)藥防治該病具有安全性高、全面調(diào)節(jié)的優(yōu)勢(shì)[20]。

        感冒中最常見的是“風(fēng)熱型”感冒,古籍《風(fēng)熱候》中對(duì)感冒屬風(fēng)熱癥的病因病機(jī)、表征和治愈過(guò)程都有較為詳細(xì)的描述[2]。認(rèn)為風(fēng)邪入侵是風(fēng)熱感冒的主要病因,其病程與個(gè)人的正氣盛衰有關(guān),易感程度與個(gè)人體質(zhì)有關(guān),氣虛皆易感,陰虛易感風(fēng)熱[21]。

        銀青抗感方處方量較大、化學(xué)成分復(fù)雜;前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中比較了不同比例的流動(dòng)相系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)乙腈系統(tǒng)相較于甲醇系統(tǒng)出峰時(shí)間更短,磷酸水溶液相較于甲酸水溶液峰形更好,故選擇乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相。采用DAD 檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描,結(jié)果表明金銀花(君藥)、野菊花(臣藥)在327 nm 波長(zhǎng)下分離度較好,板藍(lán)根(臣藥)在245 nm 下可以檢測(cè)出表告伊春含量,連翹(佐藥)在202 nm 波長(zhǎng)下色譜峰豐富且分離度較好,故選用327、245、202 nm 這3 個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)。最后對(duì)進(jìn)樣前處理進(jìn)行了考察,分別考察溶劑種類(甲醇、水)和除雜方式(離心、過(guò)膜),結(jié)果表明樣品濃度為50%的甲醇水溶液時(shí)異綠原酸A、B、C 的含量更高。 本研究通過(guò)HPLC 建立了銀青抗感口服液樣品的指紋圖譜,發(fā)現(xiàn)了16 個(gè)共有峰,并指認(rèn)了其中的10 個(gè)共有峰,且結(jié)果表明10 批樣品的相似度均>0.9,說(shuō)明 10 批銀青抗感口服液樣品的相似度高,所建立的指紋圖譜能較全面地反映制劑中的整體質(zhì)量。

        通過(guò)建立3 種不同動(dòng)物模型,給予不同劑量銀青抗感口服液以評(píng)估其藥效。在干酵母致熱實(shí)驗(yàn)中,TNF-α是一種內(nèi)源性致熱源,激活時(shí)可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞釋放IL-1β,IL-6 等因子,三者共同調(diào)節(jié)作用引起體溫升高,同時(shí)TNF-α、IL-1β、IL-6 也是典型的促炎因子,可引起炎癥反應(yīng)[22]。筆者觀察到銀青抗感口服液可顯著降低模型大鼠的體溫,ELISA結(jié)果顯示銀青抗感口服液可顯著降低模型鼠血清中的TNF-α、IL-1β及IL-6等因子,表明銀青抗感口服液具有解熱及抗炎的功效。

        白細(xì)胞數(shù)是血常規(guī)中的主要成分,具有抗感染、免疫調(diào)節(jié)等功能,包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等。當(dāng)身體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí),白細(xì)胞計(jì)數(shù)會(huì)出現(xiàn)病理性升高[16]。筆者發(fā)現(xiàn)銀青抗感口服液可改善模型鼠耳組織的水腫和充血,顯著降低模型鼠血清中白細(xì)胞指數(shù),降低模型鼠的扭體次數(shù),表明銀青抗感口服液具有抗炎及鎮(zhèn)痛的功效。

        綜上所述,本研究中HPLC 方法結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于銀青抗感口服液方的質(zhì)量評(píng)價(jià)。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明銀青抗感口服液具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛的功效,可為后續(xù)銀青抗感口服液治療風(fēng)熱感冒的機(jī)制研究提供依據(jù)。

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