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        化學(xué)發(fā)光法在輸血前梅毒特異性抗體逆向篩查中的應(yīng)用價值研究

        2023-10-09 01:01:38陳彩霞
        當(dāng)代醫(yī)藥論叢 2023年17期
        關(guān)鍵詞:螺旋體初篩滴度

        陳彩霞

        (十堰市鄖陽區(qū)人民醫(yī)院,湖北 十堰 442500)

        梅毒屬于慢性性傳播疾病,現(xiàn)已成為嚴(yán)重危害我國公共衛(wèi)生安全的疾病之一。為減少梅毒對我國公民健康的影響,需盡早進行篩查、診斷,以便及時采取相應(yīng)的干預(yù)措施,為我國的公共衛(wèi)生安全提供有效保障[1]。以往臨床常采用正向梅毒篩查流程進行輸血前梅毒特異性抗體篩查,即先行非梅毒螺旋體抗原血清試驗,然后再行梅毒螺旋體抗原血清試驗。正向梅毒篩查流程在面對日益增加的檢測樣本量時,常常會因為樣本需要稀釋、手工操作繁瑣和反應(yīng)時間長等因素而存在漏檢或誤診的情況,加之該方法的檢測結(jié)果需要醫(yī)者用肉眼進行判斷,因此會導(dǎo)致檢測結(jié)果存在一定的主觀性,影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[2]。針對這種情況,需要對篩查模式進行改進,尋找一種簡單、可靠的篩查方法,以提高梅毒篩查的準(zhǔn)確率。化學(xué)發(fā)光法(CLIA)具有自動化、操作簡便、高通量等優(yōu)點,現(xiàn)已成為篩查大批量梅毒樣本的主要方法[3]。基于此,本文采用CLIA 對梅毒特異性抗體進行逆向篩查,同時采用非梅毒螺旋體抗原血清甲苯胺紅不加熱試驗(TRUST)和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)進行復(fù)測,再對TRUST 檢測后呈陽性的標(biāo)本進行滴度檢測,對檢測結(jié)果進行分析,具體報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        對我院產(chǎn)科2019 年1 月至2021 年3 月期間接收的需要進行輸血前梅毒篩查產(chǎn)婦的臨床資料進行收集,共9012 例,年齡為19 ~44 歲,平均年齡為(28.69±5.89)歲;其中初產(chǎn)婦3664 例,經(jīng)產(chǎn)婦5348 例;文化程度:小學(xué)962 例、中學(xué)1225 例、大專3841 例、本科及以上2984 例。共采集研究對象的血清樣本9012 份。

        1.2 方法

        儀器與試劑:本次研究所用的儀器有:Axceed360 型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀﹝博奧賽斯(天津)生物科技有限公司﹞、WLR-H5000 型數(shù)顯混勻器(中國蘇州東吳醫(yī)用電子儀器廠)。本次研究所用的試劑有:CLIA 試劑盒﹝博奧賽斯(天津)生物科技有限公司﹞、TRUST 試劑(中國上海榮盛生物藥業(yè)有限公司)、TPPA 試劑(日本富士瑞必歐株式會社)、質(zhì)控血清(中國上海市臨床檢驗中心)。先采用CLIA 對9012 份血清樣本進行初篩,對初篩結(jié)果呈陽性的樣本給予TRUST、TPPA 復(fù)測,對TRUST 復(fù)測呈陽性的標(biāo)本行滴度檢測。檢測操作需嚴(yán)格按照試劑說明書進行,并對質(zhì)控血清進行測定。

        1.3 觀察指標(biāo)

        對血清樣本經(jīng)CLIA、TRUST、TPPA 及滴度檢測的結(jié)果進行統(tǒng)計,根據(jù)結(jié)果設(shè)定陽性、陰性對照分析。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

        采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析,% 用以表示計數(shù)資料,行χ2 檢驗,±s用以表示計量資料,行t檢驗,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 樣本的梅毒血清學(xué)檢測結(jié)果

        9012 份樣本經(jīng)CLIA 檢測發(fā)現(xiàn)有129 份(1.43%)呈陽性,對129 份初篩呈陽性的樣本進行TRUST、TPPA 復(fù)測,結(jié)果發(fā)現(xiàn):129 份樣本有43 份(33.33%)經(jīng)TRUST、TPPA 復(fù)測后均呈陽性;有1 份(0.78%)為TRUST 檢測呈陽性而TPPA 檢測呈陰性;有78份(60.47%)TRUST 檢測呈陰性而TPPA 檢測呈陽性;有7 份(5.43%)TRUST、TPPA 復(fù)測均為陰性。由此可知,在129 份初篩呈陽性的樣本中,TRUST、TPPA 復(fù)測呈陽性的概率分別為34.11%(44/129)、93.80%(121/129),兩種檢測方法的陽性率經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。129 份初篩呈陽性樣本的TRUST、TPPA 復(fù)測結(jié)果見表1。

        表1 129 份初篩呈陽性樣本的TRUST、TPPA 復(fù)測結(jié)果(份)

        2.2 初篩呈陽性的129 例患者的診斷分析

        對129 例經(jīng)CLIA 初篩后呈陽性的患者進行跟蹤隨訪,結(jié)合實際情況對其病史進行了解,再根據(jù)病史進行分組,發(fā)現(xiàn)129 例患者中有23 例為一期梅毒患者,13 例為二期梅毒患者,4 例為三期梅毒患者,24例為隱性梅毒患者,57 例為治療后梅毒患者,8 例為非梅毒患者。詳見表2。

        表2 初篩呈陽性的129 例患者的診斷分析

        2.3 經(jīng)TRUST 復(fù)測為陽性的43 份樣本的滴度檢測結(jié)果分析

        對經(jīng)TRUST 復(fù)測為陽性的43 份樣本進行滴度檢測,發(fā)現(xiàn)滴度值為1:1 ~1:64,統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)其中一期梅毒、三期梅毒、隱性梅毒、治療后梅毒的TRUST 滴度均≤1:8,滴度偏低;二期梅毒的TRUST 滴度最高為1:64,滴度偏高。另有1 例非梅毒患者的TRUST 滴度為1:1。詳見表3。

        表3 經(jīng)TRUST 復(fù)測為陽性的43 份樣本的滴度檢測結(jié)果分析(例)

        3 討論

        梅毒由梅毒螺旋體感染所致,會對人體的多個器官、組織進行侵犯,從而嚴(yán)重影響機體功能,降低人們的身心健康程度。性接觸傳播、母嬰傳播和血液制品傳播是梅毒的主要傳播途徑。本病不僅危害人類的健康及生命安全,還帶來了嚴(yán)重的社會公共衛(wèi)生問題[4]。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,近年來梅毒在世界的流行范圍越來越廣,每年約有1200 萬新發(fā)病例,患病率逐年遞增,加之抗生素的不合理使用,導(dǎo)致部分患者出現(xiàn)了隱性梅毒,在臨床診斷中誤診、漏診的發(fā)生率較高,不利于患者的早期治療與疾病轉(zhuǎn)歸[4]。臨床針對人體感染梅毒螺旋體后外周血清出現(xiàn)的兩種抗體(非特異性抗體與特異性抗體),將梅毒的血清學(xué)檢測方法分為兩類:非梅毒螺旋體抗原血清試驗與梅毒特異性抗體檢測。其中,非梅毒螺旋體抗原血清試驗包括TRUST、性病實驗室試驗(VDRL),是以牛心肌磷脂為抗原,對待檢樣本中是否出現(xiàn)抗心磷脂抗體進行檢測。梅毒特異性抗體檢測包括TRUST、TPPA,以梅毒螺旋體的成分為抗原,對待檢樣本中的抗梅毒螺旋體抗體進行檢測。TPPA 被美國疾病預(yù)防控制中心確定為梅毒的確診方法,其使用的是雙抗體夾心法,具有較高的敏感性與特異性,是目前國內(nèi)外公認(rèn)的梅毒血清確認(rèn)試驗。當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后,體內(nèi)會終身有抗體存在,采用TPPA 對患者進行檢測不會受到治療方法、病情發(fā)展及干預(yù)措施等因素的影響,檢測結(jié)果有良好的穩(wěn)定性,檢測出的假陽性結(jié)果較少,對各期梅毒的檢測均具有良好的效果。然而,該方法自動化檢測的難度較大,操作步驟繁瑣,所用時間較長,無法儲存原始數(shù)據(jù),需檢驗人員用肉眼進行觀察,當(dāng)樣本數(shù)量較多時,難以實現(xiàn)批量篩查,不能達到快速檢測的目的,這也是該方法在梅毒鑒別診斷中未能得到推廣應(yīng)用的原因。以往臨床對輸血者進行梅毒篩查時常用的篩查模式為正向篩查流程,即先對血液樣本用非梅毒螺旋體抗原血清試驗進行初篩,對初篩呈陽性的樣本再使用梅毒螺旋體抗原血清試驗進行復(fù)測[5]。這種方式適合樣本量較少時的篩查工作。近年來,臨床進行梅毒篩查的數(shù)量大幅度增加,正向篩查流程已無法滿足當(dāng)前的醫(yī)療需求,臨床亟需尋找一種自動化、高通量的篩查模式[6]?;诖耍瑖鴥?nèi)外醫(yī)學(xué)研究者嘗試進行梅毒篩查時使用梅毒血清學(xué)逆向程序,即先使用CLIA 對梅毒螺旋體特異性抗體進行初篩,然后再使用梅毒螺旋體非特異性抗體試驗對陽性樣本進行復(fù)測,以評估梅毒的活動性[7]。

        本次研究中,9012 份樣本經(jīng)CLIA 檢測發(fā)現(xiàn)有129 份(1.43%)呈陽性。CLIA 具有操作簡便、自動化程度高、檢測時間短、重復(fù)性好、高通量等優(yōu)點。該方法雖然可用于梅毒的診斷,但其檢測結(jié)果呈陽性只能說明患者正處于梅毒感染期或有梅毒感染史,并不能對梅毒的活動情況進行判斷,其檢測灰區(qū)的假陰性結(jié)果與S/CO 的假陽性結(jié)果并不能作為臨床治療依據(jù)。因此,為提高梅毒篩查效率,還需對經(jīng)CLIA 檢測呈陽性的樣本進行復(fù)測[8]。本研究中對129 例經(jīng)CLIA 初篩后呈陽性的患者進行跟蹤隨訪,發(fā)現(xiàn)其中有23 例為一期梅毒患者,13 例為二期梅毒患者,4例為三期梅毒患者,24 例為隱性梅毒患者,57 例為治療后梅毒患者,8 例為非梅毒患者。TRUST 是檢測梅毒非特異性抗體的常用方法?;颊吒腥久范韭菪w后釋放出的物質(zhì)而產(chǎn)生的自身抗體即為梅毒非特異性抗體,又稱反應(yīng)素,其出現(xiàn)時間比梅毒特異性抗體晚2 周左右。因此,在疾病初期,患者的檢測結(jié)果通常會呈陰性。梅毒在非活動期或治療期間,非特異性抗體會轉(zhuǎn)陰或下降,因此TRUST 對一期梅毒、三期梅毒的檢出率較低,易出現(xiàn)假陰性結(jié)果[9]。TPPA 為梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗,是以蒼白密螺旋體為抗原,對血清中的抗螺旋體免疫球蛋白M(IgM)和/或免疫球蛋白G(IgG)抗體進行檢測,其特異性和敏感性均較高,但在操作過程中易受到手工操作、血清稀釋和U 型板清潔度較低等因素的影響而對檢測結(jié)果造成干擾,因此無法對大批量的血清樣本進行檢測,加上無法保留原始數(shù)據(jù),令其臨床使用價值受到了一定的影響[10]。本次研究中,在129 份初篩呈陽性的樣本中,TRUST、TPPA 復(fù)測呈陽性的概率分別為34.11%(44/129)、93.80%(121/129), 兩 種 檢測方法的陽性率經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明TPPA 的敏感性、特異性均較TRUST 高。由于方法性能、診斷性能存在局限性,因此任何一種梅毒血清學(xué)檢測方法都無法達到梅毒診斷的需求。歐盟疾控中心推薦先使用梅毒螺旋體抗原血清試驗進行初篩,并以另一種梅毒螺旋體抗原血清試驗作為確證,這種方式不包括非梅毒螺旋體抗原血清試驗和滴度檢測。TPPA 因具有較高的敏感性和特異性,目前已成為臨床公認(rèn)的梅毒抗體檢測的確證方法。TRUST 檢測呈陽性的樣本需要進行滴度檢測,以便對梅毒的活動性及患者的治療效果、預(yù)后進行判斷。本研究結(jié)果顯示,一期梅毒、三期梅毒、隱性梅毒、治療后梅毒的TRUST 滴度均≤1:8,滴度偏低;二期梅毒的TRUST 滴度最高為1:64,滴度偏高;另有1 例非梅毒患者的TRUST 滴度較低,為1:1,可能與血清固定或因懷孕而產(chǎn)生生物學(xué)假陽性有關(guān)。

        綜上所述,與正向梅毒篩查流程相比,逆向梅毒篩查流程更適合樣本量大的梅毒篩查工作,不僅能夠提高篩查的準(zhǔn)確性、敏感性和特異性,還可降低假陰性的發(fā)生率。對于CLIA、TRUST 檢測呈陽性但抗體水平較低的樣本,為防止生物學(xué)假陽性的出現(xiàn),建議對其行確證試驗。

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