林穎烽

福建醫(yī)科大學(xué)腫瘤臨床醫(yī)學(xué)院·福建省腫瘤醫(yī)院 （福建福州 350014）

肝癌是一種繼發(fā)于肝炎病毒感染、肝硬化和遺傳性代謝性疾病的多因素疾病，在我國(guó)屬于高發(fā)性疾病，發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中均排名第三，并呈逐年上升趨勢(shì)[1-2]。在臨床診療中，大多數(shù)肝癌患者就診時(shí)已發(fā)展至晚期，治療手段較單一且受局限[3-5]。因此，尋找肝癌早期診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物，對(duì)于提高患者預(yù)后水平具有重要意義。FZD（frizzled）家族是Wnt 信號(hào)通路的一類(lèi)跨膜受體，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)性，其中FZD7 是FZD 10 個(gè)亞型中的一種[6-7]。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ZD7 在肝癌中呈特異性表達(dá)，可能促進(jìn)肝癌的惡性行為[8-9]?；诖?，本研究探討FZD7 在肝癌中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響，以期為臨床診療活動(dòng)提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 UALCAN 數(shù)據(jù)庫(kù)分析

UALCAN[10]數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)開(kāi)放式、資源共享的公共數(shù)據(jù)庫(kù)，內(nèi)容涵蓋TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)，收錄了超過(guò)31 種公開(kāi)發(fā)表的腫瘤基因轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)及預(yù)后信息。本研究基于UALCAN 數(shù)據(jù)庫(kù)收集已經(jīng)發(fā)表的肝癌組織和正常組織的樣本信息，研究FZD7 在肝癌組織和正常組織中的表達(dá)水平及FZD7 在肝癌不同臨床分期中的表達(dá)水平。

1.2 Kaplan-Meier Plotter 分析

Kaplan-Meier Plotter[11]是一個(gè)基于GEO、TCGA、EGA 數(shù)據(jù)庫(kù)存在的生存隨訪信息，在線分析21 種腫瘤預(yù)后的工具。本研究利用Kaplan-Meier Plotter 在線工具及網(wǎng)站已收集的肝癌預(yù)后數(shù)據(jù)，繪制FZD7 高表達(dá)患者和低表達(dá)患者的預(yù)后曲線圖，研究FZD7 在肝癌中的預(yù)后價(jià)值。

1.3 GO 分析和KEGG 富集分析

GO 分析是一種被廣泛應(yīng)用于注釋特定基因和基因產(chǎn)物生物學(xué)功能的工具，可分為生物過(guò)程（bioprocess，BP）、分子功能（molecular function，MF）和細(xì)胞成分（cell component，CC）。KEGG 是一個(gè)高通量數(shù)據(jù)庫(kù)，在基因組水平上解釋細(xì)胞和其他生物的高級(jí)生物學(xué)功能。本研究基于DAVID[12]在線網(wǎng)站收集的高通量樣本數(shù)據(jù)和算法程序，分析FZD7基因在肝癌組織中GO 分布和KEGG 富集情況。

2 結(jié)果

2.1 FZD7 在肝癌組織和正常組織中的表達(dá)

FZD7 在肝癌組織中呈高表達(dá)，且表達(dá)水平明顯高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。

圖1 FZD7 在肝癌組織和正常組織中的表達(dá)水平

2.2 FZD7 在肝癌不同臨床分期中的表達(dá)

隨著肝癌臨床分期增加，F(xiàn)ZD7 表達(dá)水平不斷升高，由圖2 可知，F(xiàn)ZD7 在肝癌Ⅳ期的表達(dá)水平最高。

圖2 FZD7 在肝癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中的表達(dá)水平

2.3 FZD7 的預(yù)后分析

如圖3 所示，F(xiàn)ZD7 高表達(dá)患者的生存率明顯低于FZD7 低表達(dá)患者，F(xiàn)ZD7 表達(dá)與肝癌患者的預(yù)后成負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

圖3 FZD7 在肝癌患者中的預(yù)后價(jià)值

2.4 FZD7 的GO 分析與KEGG 富集分析

FZD7 的GO 分 析 結(jié) 果 顯 示，BP 主 要 富 集在extracellular matrix organization、extracellular structure organization、external encapsulating structure organization，CC 主 要 富 集 在collagen-containing extracellular matrix、fibrillar collagen trimer、banded collagen fibril，MF 主 要 富 集 在extracellular matrix structural constituent、extracellular matrix structural constituent conferring tensile strength、platelet-derived growth factor binding，KEGG 通路主要富集在Protein digestion and absorption、Wnt signaling pathway、AGE-RAGE signaling pathway，見(jiàn)圖4。由此可知，F(xiàn)ZD7 基因在BP、CC、MF 功能方面主要富集在細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞外膜等結(jié)構(gòu)上，F(xiàn)ZD7 基因在KEGG 通路主要富集在蛋白消化、Wnt 等轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路上。

圖4 FZD7 在肝癌組織中的BP、CC、MF、KEGG富集分析結(jié)果

3 討論

肝癌是我國(guó)組織常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，每年新發(fā)病例達(dá)38.8 萬(wàn)人。由此可見(jiàn)，我國(guó)肝癌的診治形勢(shì)較為嚴(yán)峻[13-15]。肝癌的早期癥狀較為隱匿，患者不易察覺(jué)，當(dāng)患者出現(xiàn)癥狀時(shí)往往已經(jīng)發(fā)展到中晚期，晚期患者手術(shù)治療的存活率及療效均欠佳，化療藥物的效果也較為有限。因此，早期診斷及治療干預(yù)對(duì)于提高肝癌患者預(yù)后、降低疾病死亡率具有重要意義。

FZD7 是FZD 家族中唯一一個(gè)在進(jìn)化過(guò)程中高度保守的成員，其在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中能夠調(diào)節(jié)人胚胎干細(xì)胞分化與自我更新，同時(shí)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在不同表達(dá)，可能與腫瘤的惡性行為相關(guān)[16]。賀子秋等[17]研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌患者FZD7 陽(yáng)性率較高，提示FZD7 可能是前列腺癌的一類(lèi)早期診斷標(biāo)志物。于冰等[18]的研究顯示，在三陰乳腺癌中FZD7 的表達(dá)明顯升高，且高表達(dá)的患者預(yù)后不佳。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)ZD7 在肝癌組織中呈高表達(dá)，且表達(dá)水平明顯高于正常組織，隨著肝癌臨床分期的增加，F(xiàn)ZD7 表達(dá)水平不斷升高，此結(jié)果與Merle 等[19]在乙型肝炎致癌模型中獲得的結(jié)果相似。此外，本研究結(jié)果還顯示，F(xiàn)ZD7 高表達(dá)患者的生存率明顯低于FZD7 低表達(dá)患者，提示FZD7 可能是肝癌的一個(gè)預(yù)后生存指標(biāo)。

Wnt 信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，可通過(guò)影響EMT 過(guò)程促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[19-21]，而FZD7 作為Wnt 信號(hào)通路的一類(lèi)跨膜受體，可能通過(guò)此途徑促進(jìn)腫瘤惡性行為。于冰[18]等人研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者中FZD7 差異表達(dá)最明顯，并通過(guò)Wnt 通路調(diào)節(jié)三陰乳腺癌EMT。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)ZD7 基因在肝癌組織中的GO 主要富集在細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞外膜等結(jié)構(gòu)上，F(xiàn)ZD7 基因在KEGG 通路主要富集在蛋白消化、Wnt 等轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路上。這些結(jié)果與Vincan 等[22]在結(jié)直腸癌中的研究結(jié)果及預(yù)測(cè)的通路相似。因此，本研究推測(cè)肝癌組織中FZD7 可能通過(guò)改變細(xì)胞外膜結(jié)構(gòu)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)分解，調(diào)節(jié)Wnt 信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞EMT 過(guò)程，加快惡性轉(zhuǎn)變及轉(zhuǎn)移進(jìn)程。

綜上所述，F(xiàn)ZD7 在肝癌組織中呈高表達(dá)，且與肝癌不良預(yù)后存在相關(guān)性，可作為肝癌預(yù)后診斷的有效指標(biāo)，并可能進(jìn)一步成為關(guān)鍵的治療靶點(diǎn)，為靶向FZD7 藥物對(duì)肝癌作用的研究提供一定的參考依據(jù)。