趙 芮, 黃晴雯, 余智穎, 韓 錚, 范 楷, 趙志輝, 聶冬霞*

(1. 上海海洋大學(xué)食品學(xué)院, 上海 201306; 2. 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所, 上海 201403; 3. 上海師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 上海 201418)

水果是人們生活中必不可少的食物,其水分含量高、營(yíng)養(yǎng)豐富,在生長(zhǎng)、采摘、銷(xiāo)售等環(huán)節(jié)易受到真菌的侵襲而產(chǎn)生真菌毒素[1],每年約有20%～30%的水果會(huì)受到真菌毒素的污染而導(dǎo)致腐爛[2]。水果中常見(jiàn)的真菌毒素有鏈格孢霉毒素、赭曲霉毒素、展青霉素(PAT)、桔青霉素(CIT)和單端孢霉烯族毒素等[3],大多具有致畸、致癌、致突變等毒性作用[4]。此外,即使已經(jīng)去除腐爛水果的變質(zhì)部分,在未腐爛部分也可能檢出真菌毒素[5],且真菌毒素具有較高的穩(wěn)定性[6],難以完全去除,給人類(lèi)的健康造成潛在危害。我國(guó)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)規(guī)定,水果及其制品中PAT的限量為50 μg/kg,葡萄酒中赭曲霉毒素A(OTA)的限量為2.0 μg/kg,熟制堅(jiān)果中黃曲霉毒素B1(AFB1)的限量為5 μg/kg[7]。歐盟也對(duì)果汁、果干和堅(jiān)果等食品中PAT、OTA和AFB1的限量進(jìn)行了規(guī)定[8]。因此,為確保食品質(zhì)量安全,建立水果中真菌毒素的快速靈敏檢測(cè)方法至關(guān)重要。

目前,真菌毒素的檢測(cè)方法主要有超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)、液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法等,這些方法多針對(duì)單個(gè)或單類(lèi)真菌毒素[9-11];其中,UPLC-MS/MS因其高選擇性和高靈敏度在多種真菌毒素檢測(cè)方面得到了廣泛應(yīng)用[5,12],但其檢測(cè)準(zhǔn)確性及靈敏度受基質(zhì)效應(yīng)影響較大,需要通過(guò)有效的前處理過(guò)程去除基質(zhì)中的大分子雜質(zhì)和其他干擾因素。鮮食水果樣品中主要含糖、色素和纖維素等雜質(zhì),其常見(jiàn)的前處理方法包括液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)和QuEChERS。LLE和SPE等方法成本較高,耗時(shí)費(fèi)力,難以滿(mǎn)足大批量樣品的檢測(cè)[13,14],而QuEChERS因其快速、簡(jiǎn)便、安全、適用性廣、提取凈化效率高等優(yōu)點(diǎn),在真菌毒素檢測(cè)方面具有較好的應(yīng)用前景[15-18]。

本文主要針對(duì)草莓、葡萄、梨和桃4種水果基質(zhì),根據(jù)不同真菌毒素的物理化學(xué)性質(zhì),利用QuEChERS方法和UPLC-MS/MS檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì),建立了同時(shí)檢測(cè)水果中36種真菌毒素的分析方法。本方法操作簡(jiǎn)單便捷,靈敏準(zhǔn)確,能夠?yàn)樗卸喾N真菌毒素的監(jiān)測(cè)、監(jiān)管提供有效技術(shù)手段。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

UPLC XEVO TQ-S超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Waters公司); 5804R離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司); HSC-24B水浴氮吹儀(上海楚定分析儀器有限公司); Milli-Q超純水儀(美國(guó)Millipore公司); AL104分析天平(美國(guó)梅特勒-托利多儀器有限公司); SK8210LHC超聲波清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

甲醇、乙腈、醋酸銨(色譜純,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司); 36%乙酸(分析純,上海阿拉丁生化科技有限公司);無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉(分析純,美國(guó)Sigma-Aldrich公司); 36種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品見(jiàn)表1(青島普瑞邦生物工程有限公司、ROMER國(guó)際貿(mào)易(北京)有限公司);N-丙基乙二胺(PSA, 50 μm)、十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18,40～60 μm,蘇州納譜分析技術(shù)有限公司);實(shí)驗(yàn)所用草莓、葡萄、梨、桃均購(gòu)自上海水果種植基地,水果經(jīng)粉碎混勻后,裝入密閉容器中,于-20 ℃下避光保存。

1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

分別移取適量的36種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品原液,用乙腈稀釋,配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L的36種真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,混勻后保存于棕色試劑瓶?jī)?nèi),置于-20 ℃冰箱中避光保存。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要再配制不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 g試樣于50 mL離心管中,加入10 mL乙酸-乙腈-水(1∶79∶20, v/v/v),渦旋混勻30 s后,超聲提取40 min,加入2.0 g無(wú)水硫酸鎂和0.5 g氯化鈉,立即劇烈振搖30 s,超聲10 min,以8 000 r/min離心5 min;吸取6 mL上清液于含有85 mg C18、15 mg PSA的10 mL離心管中,渦旋振蕩30 s,以8 000 r/min離心5 min,移取5 mL上清液,于40 ℃下氮?dú)獯蹈?用1 mL 5 mmol/L醋酸銨水溶液-乙腈(50∶50, v/v)溶解殘?jiān)?渦旋振蕩30 s,經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。

空白加標(biāo)樣品的前處理:選取經(jīng)檢測(cè)不含36種真菌毒素的4種空白樣品(草莓、葡萄、梨、桃各1份),稱(chēng)取2.0 g試樣于50 mL離心管中,加入一定體積的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液后,按上述方法進(jìn)行樣品前處理。

1.4 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:分別移取一定體積的36種真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,再用空白基質(zhì)提取液進(jìn)行復(fù)溶和定容,配制成36種真菌毒素質(zhì)量濃度分別為0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200 μg/L的系列基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

表 1 36種真菌毒素的質(zhì)譜參數(shù)

1.5 UPLC-MS/MS檢測(cè)條件

色譜柱:Waters XBridge BEH C18柱(100 mm×3 mm, 2.5 μm);流動(dòng)相A為5 mmol/L醋酸銨水溶液,流動(dòng)相B為甲醇。梯度洗脫程序:0～0.2 min, 30%B; 0.2～5 min, 30%B～90%B; 5～7 min, 90%B; 7～7.5 min, 90%B～30%B; 7.5～8.5 min, 30%B。流速為0.4 mL/min;進(jìn)樣量為3 μL;柱溫為40 ℃。

采用電噴霧電離源(ESI)正、負(fù)離子模式同時(shí)掃描;脫溶劑氣、錐孔氣均為高純氮?dú)?碰撞氣為高純氬氣,脫溶劑溫度為500 ℃,離子源溫度為150 ℃;通過(guò)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行定量。36種真菌毒素的保留時(shí)間、母離子、子離子、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。分析數(shù)據(jù)使用MassLynxv4.1和Targetlynx(Waters)軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)考察了Waters XBridge BEH C18(100 mm×3 mm, 2.5 μm)、Waters Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm)、Agilent poroshell 120 EC-C18(100 mm×3 mm, 2.7 μm)和Waters Acquity UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)4種不同型號(hào)、不同粒徑色譜柱對(duì)36種真菌毒素的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Waters XBridge BEH C18柱對(duì)36種真菌毒素的分離效果要明顯優(yōu)于其他3種色譜柱,36種真菌毒素不僅能在8.5 min內(nèi)得到較好分離,且色譜峰形更加尖銳、對(duì)稱(chēng),故選擇Waters XBridge BEH C18柱(100 mm×3 mm, 2.5 μm)進(jìn)行后續(xù)分析。

此外,還考察了5 mmol/L醋酸銨水溶液-甲醇、5 mmol/L醋酸銨水溶液-乙腈、0.1%甲酸水溶液-甲醇和0.1%甲酸水溶液-乙腈4組不同流動(dòng)相體系對(duì)36種真菌毒素色譜峰峰形和分離的影響。實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)采用5 mmol/L醋酸銨水溶液-乙腈作為流動(dòng)相時(shí),交鏈孢霉烯(ALT)、交鏈孢霉甲基醚(AME)、HT2毒素(HT2)、細(xì)交鏈孢菌酮酸(TeA)和騰毒素(Ten)等峰形較差;當(dāng)采用0.1%甲酸水溶液-乙腈作為流動(dòng)相時(shí),AME、ALT、蛇形毒素(DAS)和TeA等峰形較差,CIT峰形拖尾嚴(yán)重,恩鐮孢菌素B1(ENNB1)出峰滯后;當(dāng)采用0.1%甲酸水溶液-甲醇作為流動(dòng)相時(shí),AME、CIT、DAS、ENNB1在峰形、響應(yīng)和出峰時(shí)間上均有明顯改善,但OTA、赭曲霉毒素B(OTB)峰形變差,且HT2出現(xiàn)雙峰;當(dāng)采用5 mmol/L醋酸銨水溶液-甲醇作為流動(dòng)相時(shí),36種真菌毒素的色譜峰形和響應(yīng)強(qiáng)度最好,保留時(shí)間穩(wěn)定。這是因?yàn)榧状寄芨玫貙悠分械哪繕?biāo)物與干擾雜質(zhì)分離[19];且與0.1%甲酸水相比,在流動(dòng)相中添加5 mmol/L醋酸銨更有利于不同目標(biāo)物的離子化,既能保證良好的峰形又能增強(qiáng)大部分目標(biāo)物的響應(yīng)強(qiáng)度[20]。因此,最終選用5 mmol/L醋酸銨水溶液-甲醇作為流動(dòng)相。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過(guò)單進(jìn)樣方式優(yōu)化質(zhì)譜條件,在ESI正、負(fù)離子模式下掃描(m/z100～800),選擇母離子。在確定母離子的基礎(chǔ)上,進(jìn)行子離子掃描,通過(guò)比較響應(yīng)值選擇2個(gè)子離子碎片。利用母離子的信號(hào)強(qiáng)度優(yōu)化錐孔電壓,子離子的信號(hào)強(qiáng)度優(yōu)化碰撞電壓,最終得到的母離子、子離子、錐孔電壓和碰撞電壓如表1所示。在最佳質(zhì)譜條件的基礎(chǔ)上建立了MRM掃描模式,對(duì)于同一個(gè)化合物,響應(yīng)值高的通道作為定量離子通道,響應(yīng)值略低的作為定性離子通道。36種真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的MRM圖譜如圖1所示,不同水果樣品基質(zhì)中的MRM圖譜如附圖1～4所示(www.chrom-China.com),可見(jiàn)各目標(biāo)毒素的峰形區(qū)分度良好。

圖 1 36種真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100 μg/L)的MRM色譜圖Fig. 1 Multiple reaction monitoring (MRM) chromatograms of the 36 mycotoxins (100 μg/L) in mixed standard solutions

2.3 提取溶劑的優(yōu)化

QuEChERS方法常用的提取溶劑為甲醇和乙腈,為了兼顧多種真菌毒素的檢測(cè),可適當(dāng)添加一些酸或水來(lái)提高酸性毒素和極性毒素的提取效果。如圖2所示,比較了甲酸-乙腈(1∶99, v/v)、甲酸-甲醇(1∶99, v/v)、甲酸-乙腈-水(1∶84∶15, v/v/v)、甲酸-乙腈-水(5∶80∶15, v/v/v)、乙腈-水(80∶20, v/v)和乙酸-乙腈-水(1∶79∶20, v/v/v)6種提取溶劑對(duì)36種真菌毒素(草莓空白加標(biāo)樣品,質(zhì)量濃度50 μg/L)提取效果的影響。研究發(fā)現(xiàn),甲酸-乙腈(1∶99, v/v)為提取溶劑時(shí)(圖2a), 32種真菌毒素的回收率為70%～120%;甲酸-甲醇(1∶99, v/v)為提取溶劑時(shí)(圖2b), 24種真菌毒素的回收率為70%～120%;以上結(jié)果表明,乙腈對(duì)真菌毒素具有更好的提取效果。在乙腈中加入不同比例的甲酸和水(圖2c～2e),結(jié)果發(fā)現(xiàn),乙腈-水(80∶20, v/v)作為提取溶劑時(shí)的提取效果優(yōu)于甲酸-乙腈-水(1∶84∶15, v/v/v)、甲酸-乙腈-水(5∶80∶15, v/v/v),33種真菌毒素的回收率為70%～120%,但AFB1和黃曲霉毒素G1(AFG1)的回收率僅為36.1%和31.2%。為了提高AFB1和AFG1的回收率,將甲酸替換為酸性更弱的乙酸,發(fā)現(xiàn)乙酸-乙腈-水(1∶79∶20, v/v/v)提取溶劑對(duì)36種真菌毒素的提取效果最好(圖2f),回收率均為70%～120%,這可能是由于黃曲霉毒素在弱酸中更穩(wěn)定。因此選擇乙酸-乙腈-水溶液(1∶79∶20, v/v/v)作為提取溶劑用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4 凈化材料的優(yōu)化

圖 3 不同凈化材料對(duì)11種真菌毒素回收率的影響(n=3)Fig. 3 Effect of different purification materials on the recoveries of the 11 mycotoxins (n=3)

在空白草莓樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)(加標(biāo)質(zhì)量濃度為50 μg/L),考察不同凈化材料對(duì)36種真菌毒素回收率的影響。在未凈化條件下,36種真菌毒素中有11種真菌毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、AFB1、AFG1、黃曲霉毒素M1(AFM1)、黃曲霉毒素M2(AFM2)、ENNB1、恩鐮孢菌素A1(ENNA1)、恩鐮孢菌素A(ENNA)、PAT、玉米赤霉烯酮(ZEN)和玉米赤霉酮(ZAN))的回收率較差,具有較大的基質(zhì)效應(yīng),這是由于水果樣品中含有大量的色素、有機(jī)酸、鞣質(zhì)和纖維素等雜質(zhì),易造成色譜和質(zhì)譜系統(tǒng)污染,并對(duì)目標(biāo)物的檢測(cè)產(chǎn)生較大干擾,因此需要對(duì)水果樣品進(jìn)行凈化,降低基質(zhì)效應(yīng)(ME)[21]。常見(jiàn)的凈化材料C18能有效去除脂肪和類(lèi)脂等非極性雜質(zhì),PSA主要用于去除碳水化合物、酚類(lèi)、脂肪和極性色素等,因此,本實(shí)驗(yàn)針對(duì)上述在未凈化條件下回收率較差的11種真菌毒素,考察了不同組合比例的C18、PSA凈化材料對(duì)真菌毒素回收率的影響(見(jiàn)圖3)。研究發(fā)現(xiàn),采用90 mg C18+10 mg PSA能夠降低水果基質(zhì)效應(yīng),除AFB1和AFG1的回收率仍大于120%外,其余9種真菌毒素的回收率為70%～120%;采用70 mg C18+30 mg PSA凈化時(shí),PAT的回收率大于120%,基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng);而采用80 mg C18+20 mg PSA和85 mg C18+15 mg PSA均具有較好的凈化效果,但采用85 mg C18+15 mg PSA時(shí)穩(wěn)定性更好,36種真菌毒素的回收率為70%～120%。因此,最終選擇85 mg C18+15 mg PSA作為凈化材料對(duì)不同水果樣品進(jìn)行凈化。

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1基質(zhì)效應(yīng)

通過(guò)考察36種真菌毒素在草莓、葡萄、梨和桃樣品中的信號(hào)抑制/增強(qiáng)程度(signal suppression/enhancement, SSE)來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)[22,23], SSE=S1/S2×100%,其中S1和S2分別為真菌毒素的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率和空白溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。當(dāng)SSE大于100%,表明存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng);SSE小于100%,表明存在基質(zhì)抑制效應(yīng);SSE為80%～120%,表明基質(zhì)效應(yīng)影響較小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,部分真菌毒素如PAT、赭曲霉毒素C(OTC)和DON呈現(xiàn)基質(zhì)抑制效應(yīng),SSE為3.6%～53.4%;少數(shù)真菌毒素如細(xì)格菌素(ALS)、ALT和AME呈現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),SSE大于120%。因此,本研究采用空白基質(zhì)匹配外標(biāo)曲線法進(jìn)行定量,以降低基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.5.2線性范圍、檢出限和定量限

利用空白基質(zhì)提取液對(duì)36種真菌毒素的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋,得到不同質(zhì)量濃度的系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,以含量(X, μg/kg)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo),建立36種真菌毒素的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線;以3倍信噪比(signal to noise ratio,S/N)確定36種真菌毒素的檢出限(limit of detection, LOD)、10倍信噪比確定定量限(limit of quantification, LOQ)。36種真菌毒素在不同水果樣品中的線性范圍、相關(guān)系數(shù)(R2)、LOD和LOQ如表2所示。36種真菌毒素在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2均≥0.990; 36種真菌毒素在4種空白水果基質(zhì)中的LOD和LOQ分別為0.02～5 μg/kg和0.1～10 μg/kg,滿(mǎn)足《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)等國(guó)家及行業(yè)相關(guān)限量標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)需求。

2.5.3回收率和精密度

按照1.3節(jié)方法處理樣品,并進(jìn)行加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn),在4種空白水果基質(zhì)中分別添加低、中、高(5、50、100 μg/L)3個(gè)不同水平的36種真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,根據(jù)測(cè)定值和理論值的比值計(jì)算各自的回收率;日內(nèi)精密度和日間精密度分別為同一天5次平行試驗(yàn)和不同自然日(n=3)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation, RSD)。如附表1～4所示,36種真菌毒素在草莓樣品中的平均回收率為83.8%～118.9%,日內(nèi)精密度為2.0%～13.9%,日間精密度為0.2%～17.3%;在葡萄樣品中的平均回收率為77.0%～118.8%,日內(nèi)精密度為1.7%～14.9%,日間精密度為0.3%～14.9%;在梨樣品中的平均回收率為81.7%～116.3%,日內(nèi)精密度為2.4%～14.8%,日間精密度為1.2%～14.9%;在桃樣品中的平均回收率為81.1%～118.6%,日內(nèi)精密度為1.3%～14.9%,日間精密度為0.3%～14.9%。以上結(jié)果表明,所建立的真菌毒素高通量檢測(cè)方法準(zhǔn)確可靠,可用于草莓、葡萄、梨和桃等實(shí)際樣品的分析。

表 2 36種真菌毒素在4種水果基質(zhì)中的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

2.5.4方法比較

為了考察本方法的適用性,將其與已報(bào)道相關(guān)研究進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果如表3所示。本實(shí)驗(yàn)所建立的QuEChERS-UPLC-MS/MS方法覆蓋真菌毒素?cái)?shù)量多,C18和PSA凈化材料用量少,檢測(cè)時(shí)間短,線性范圍寬,靈敏度高,可用于草莓、葡萄、梨和桃等水果樣品中36種真菌毒素的同時(shí)高通量檢測(cè)。

表 3 與已報(bào)道文獻(xiàn)中真菌毒素檢測(cè)方法的比較

2.6 實(shí)際樣品的檢測(cè)

利用所建立方法對(duì)上海不同地區(qū)的60份水果樣品(草莓、葡萄、梨和桃各15份)進(jìn)行36種真菌毒素的測(cè)定。結(jié)果如表4所示,共有21份(35%)水果樣品檢出真菌毒素,包括PAT、OTA、ZAN、T2毒素(T2)、ALT、ALS、白僵菌素(BEA)、TeA、Ten、AME和麥考酚酸(MPA)等11種真菌毒素,平均含量為0.13～35.85 μg/kg。草莓、葡萄、梨和桃4種基質(zhì)中真菌毒素的檢出率分別為27%、40%、40%和33%,其中在草莓樣品中檢出ALT和PAT兩種真菌毒素,檢出率分別為7%和27%,平均含量為20.52～35.85 μg/kg;在葡萄樣品中檢出AME、BEA、MPA、PAT、Ten 5種真菌毒素,檢出率為7%～20%,平均含量為0.96～6.06 μg/kg;在梨樣品中檢出TeA、OTA、T2、BEA、ZAN和ALS 6種真菌毒素,檢出率為7%～13%,平均含量為0.20～18.65 μg/kg;在桃樣品中,共檢出TeA、AME、OTA、T2和BEA 5種真菌毒素,檢出率均為7%,平均含量為0.13～11.77 μg/kg。有3份(5%)水果樣品同時(shí)檢出兩種或兩種以上的真菌毒素,在1份草莓樣品中同時(shí)檢出ALT和PAT, 1份葡萄樣品中同時(shí)檢出AME、BEA和PAT, 1份梨樣品中同時(shí)檢出TeA和ZAN。此外,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同水果中鏈格孢毒素(ALT、ALS、TeA、Ten、AME)的檢出率較高,檢出率為15%。以上檢測(cè)結(jié)果表明,水果在生長(zhǎng)、采摘、銷(xiāo)售等環(huán)節(jié)可能受到多種真菌侵染而產(chǎn)生真菌毒素,實(shí)際樣品中檢出的OTA和PAT含量雖均低于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn),但仍存在一定風(fēng)險(xiǎn)隱患,需引起重視。

表 4 實(shí)際水果樣品中真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論

本研究基于QuEChERS前處理方法和UPLC-MS/MS檢測(cè)技術(shù),建立了同時(shí)檢測(cè)草莓、葡萄、梨和桃等水果中36種真菌毒素的方法。實(shí)驗(yàn)中對(duì)色譜、質(zhì)譜、提取溶劑、凈化材料等條件進(jìn)行了優(yōu)化,有效減少了基質(zhì)干擾,提高了檢測(cè)靈敏度和回收率。本方法操作簡(jiǎn)單,檢測(cè)時(shí)間短,覆蓋毒素?cái)?shù)量多,線性范圍寬,準(zhǔn)確度和精密度高,能夠滿(mǎn)足國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)檢測(cè)要求,為水果中真菌毒素的污染監(jiān)測(cè)提供了檢測(cè)依據(jù)和技術(shù)參考。實(shí)際水果樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn),35%的樣品檢測(cè)出真菌毒素,其中5%的樣品檢測(cè)出兩種及兩種以上真菌毒素,且鏈格孢毒素污染較為嚴(yán)重。因此,鮮食水果在采收、銷(xiāo)售等環(huán)節(jié)中仍存在真菌毒素侵染的風(fēng)險(xiǎn)隱患,需要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和監(jiān)管。