史洪飛, 徐伯芃, 徐成鑫, 周修齊, 許宏福

(1. 南京警察學院刑事科學技術(shù)學院, 江蘇 南京 210023; 2. 南寧市公安局特警支隊, 廣西 南寧 530022)

恰特草(Cathaedulis, khat)又名阿拉伯茶、巧茶,是無患子目、衛(wèi)矛科、巧茶屬常綠開花灌木,主要生長在非洲東部、阿拉伯半島海拔1 500～2 500 m的地區(qū)[1,2]。埃塞俄比亞、也門等國家和地區(qū)吸食人數(shù)較多[3,4],國內(nèi)常出現(xiàn)在海關(guān)走私案件中。長期服用恰特草會造成抑郁癥、口腔黏膜黑棘皮病[5],并對心臟、神經(jīng)等組織器官造成嚴重損傷[6]。2013年,國家食品藥品監(jiān)管總局、公安部、衛(wèi)生計生委聯(lián)合發(fā)布的《精神藥品品種目錄(2013年版)》中明確規(guī)定,將恰特草及其主要精神活性成分卡西酮(cathinone)列為第一類精神藥品進行管制,去甲偽麻黃堿(norpseudoephedrine)列為第二類精神藥品進行管制[7],去甲麻黃堿(norephedrine)的精神活性較弱,未列入管制目錄。恰特草的司法鑒定是打擊恰特草走私犯罪的重要一環(huán),新鮮恰特草可從形態(tài)、DNA、理化性質(zhì)三方面進行檢驗,但目前恰特草走私主要采取偽裝成茶葉或粉碎為粉末的方式,且干燥會使恰特草中的DNA發(fā)生降解,因此難以從形態(tài)和DNA角度認定[8]?？ㄎ魍腿ゼ讉温辄S堿的含量是恰特草理化檢驗的重要指標,但由于卡西酮穩(wěn)定性較差,其在運輸和干燥過程中會不同程度地部分降解為去甲偽麻黃堿和去甲麻黃堿,為理化檢驗增加了不確定性。

由于實驗材料獲取困難,國內(nèi)開展的恰特草理化檢驗研究較少,對于干燥恰特草中是否含有可檢測含量的卡西酮成分,國內(nèi)存在爭議。國外對于恰特草中卡西酮、去甲偽麻黃堿、去甲麻黃堿的研究則較為全面,研究內(nèi)容包括植物體內(nèi)不同部位[9-14]、不同產(chǎn)地和品種的恰特草間[10,13,15-17]的含量差異情況,生物堿含量隨干燥和儲存過程的變化情況[11,18-23],在植物和人體內(nèi)的代謝途徑[10,13,24-29]及毒理學性質(zhì)[30-32],提取檢測方法等。相關(guān)研究中對于不同品種恰特草中生物堿成分的含量存在一定爭議:埃塞俄比亞人對恰特草依照顏色分類,普遍認為紅色恰特草藥效更好,卡西酮含量更高,價格也更高[16],但Krizevski等[10]的研究表明二者卡西酮含量相似,且綠色品種中去甲麻黃堿、去甲偽麻黃堿含量更高,由此推測恰特草中可能存在其他物質(zhì)直接或間接地增強了紅色品種恰特草的精神活性作用。

目前對于恰特草中卡西酮、去甲麻黃堿、去甲偽麻黃堿3種主要精神活性成分多采用氣相色譜法[12]、氣相色譜-紅外光譜法[23]、氣相色譜-質(zhì)譜法[9,10,18,21,33,34]、薄層色譜法[13]、毛細管電泳法[35]、離子交換高效液相色譜法[11]、高效液相色譜法[13,16,23,36,37]、高效液相色譜-核磁共振聯(lián)用法[19,21]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[38,39]進行檢測。高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法的研究較少,其能夠通過質(zhì)譜裂解規(guī)律和碎片離子精確質(zhì)量數(shù)準確地對已知[40]、未知[41,42]化合物成分進行結(jié)構(gòu)解析和物質(zhì)確證,相對于高效液相色譜-低分辨質(zhì)譜法,其對同分異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)類似物有更強的分辨識別能力[43];同時,高分辨質(zhì)譜法對前端色譜分離要求較低,擁有更高的檢測通量[44,45],廣泛應用于未知物分析、農(nóng)藥殘留檢測、代謝組學等領(lǐng)域?；诖?本研究團隊利用高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法對恰特草中卡西酮的同系物進行篩查,發(fā)現(xiàn)恰特草中存在甲卡西酮(methcathinone)和乙卡西酮(ethcathinone)成分(相關(guān)確證內(nèi)容將另文發(fā)表)。研究表明甲卡西酮和乙卡西酮均擁有較強的精神活性作用[46],目前,甲卡西酮被列入第一類精神藥品,乙卡西酮被列入《非藥用類麻醉藥品和精神藥品管制品種增補目錄》管制。

本文基于溶劑萃取-高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法建立了恰特草中卡西酮、去甲麻黃堿、去甲偽麻黃堿、甲卡西酮、乙卡西酮等5種生物堿成分的提取檢測方法,為恰特草的理化檢驗鑒定及精神活性成分的研究提供參考。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 1290-6545高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜儀,配電噴霧雙噴離子源(Dual AJS ESI源)(美國Agilent公司); ME104E電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司); Lab Dancer渦旋振蕩儀(德國IKA公司); Pico17微量高速離心機(美國Thermo Fisher公司); Milli-Q純水儀(美國Millipore公司)。

恰特草由國家林業(yè)局森林公安司法鑒定中心提供;卡西酮標準溶液(質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL,純度>99%)購自美國Cerilliant公司;去甲偽麻黃堿標準溶液(質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL,純度>99%)和甲卡西酮、乙卡西酮、去甲麻黃堿標準溶液(質(zhì)量濃度為100 μg/mL,純度>99%)購自天津阿爾塔科技有限公司。

濃鹽酸、氫氧化鈉、二氯甲烷、氯化鈉(分析純)購自南京化學試劑股份有限公司;甲醇、乙腈(色譜純)購自美國Thermo Fisher公司。

1.2 標準溶液配制

單一標準儲備液的配制:精密移取卡西酮、去甲偽麻黃堿標準溶液0.05 mL,去甲麻黃堿、甲卡西酮、乙卡西酮標準溶液各0.50 mL,分別置于5 mL容量瓶中,利用乙腈定容至刻度,混勻,制成質(zhì)量濃度為10 mg/L的單一標準儲備液,置于棕色試劑瓶,-20 ℃保存。

混合標準中間液的配制:精密移取5種生物堿成分的單一標準儲備液各1 mL,置于同一10 mL容量瓶中,利用乙腈定容至刻度,混勻,制成質(zhì)量濃度為1 mg/L的混合標準中間液,置于棕色試劑瓶,-20 ℃保存。

系列混合標準工作溶液的配制:利用0.1%甲酸水溶液將混合標準中間液稀釋成質(zhì)量濃度為1、5、10、25、50、75、100、150、200 μg/L的系列混合標準工作溶液。

表 1 5種生物堿的保留時間、母離子精確質(zhì)量數(shù)、子離子精確質(zhì)量數(shù)、碎裂電壓、碰撞能

1.3 實驗條件

1.3.1樣品前處理條件

精確稱取100 mg粉碎后的干燥恰特草于2 mL聚丙烯離心管中,加入1 mL 0.05 mol/L的鹽酸水溶液,渦旋3 min,以10 000 r/min離心3 min;取上清液600 μL于2 mL離心管中,加入1 mL二氯甲烷,渦旋1 min,以10 000 r/min離心3 min;取上清液300 μL于2 mL微量離心管中,加入80 μL 1 mol/L的氫氧化鈉水溶液,渦旋1 min,加入1 mL乙腈,渦旋振蕩2 min,加入400 mg NaCl固體,渦旋1 min,以10 000 r/min離心3 min;取上清液,用0.1%甲酸水溶液稀釋5倍、100倍、1 000倍,分別對5種目標組分進行定量分析。

1.3.2色譜條件

色譜柱:ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl(100 mm×3.0 mm, 1.8 μm);柱溫:30 ℃;流動相:A為0.1%甲酸水溶液,B為乙腈;進樣量為5 μL;流速:0.3 mL/min;梯度洗脫程序:0～3.0 min, 5%B; 3.0～7.0 min, 5%B～40%B; 7.0～8.0 min, 40%B～60%B; 8.0～10.0 min, 60%B; 10.0～10.5 min, 60%B～5%B; 10.5～12.0 min, 5%B。

1.3.3質(zhì)譜條件

離子源:Dual AJS ESI源;掃描方式:正離子全掃描;毛細管電壓:4 000 V;鞘氣溫度:350 ℃;鞘氣流速:11 mL/min;干燥氣溫度:320 ℃;干燥氣流速:8 mL/min;單極質(zhì)譜全掃描模式(MS),一級質(zhì)譜掃描范圍m/z100～1 000,采集速率為5 spectra/s。目標離子采集模式(Target MS/MS),一級質(zhì)譜掃描范圍m/z100～1 000,采集速率為1 spectra/s,二級質(zhì)譜掃描范圍m/z50～600,采集速率為2 spectra/s。數(shù)據(jù)采集時采用參比離子(C5H4N4,嘌呤,其準分子離子精確質(zhì)量數(shù)為121.050 9)和(C18H18O6, HP-0921,其準分子離子精確質(zhì)量數(shù)為922.009 8)進行實時質(zhì)量校準。5種生物堿的保留時間、母離子精確質(zhì)量數(shù)、子離子精確質(zhì)量數(shù)、碎裂電壓、碰撞能等見表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品稀釋溶劑的優(yōu)化

采用乙腈、不同比例的乙腈-0.1%甲酸水溶液(8∶1、7∶2、6∶3、5∶4、4∶5、3∶6、2∶7、1∶8, v/v)、0.1%甲酸水溶液為稀釋溶劑,將乙腈為溶劑的100 μL混合標準中間液稀釋為1 mL 100 μg/L的混合標準溶液后進樣分析。當使用乙腈、乙腈-0.1%甲酸水溶液(8∶1、7∶2、6∶3、5∶4、4∶5、3∶6, v/v)稀釋混合標準中間液時,5種生物堿成分均存在溶劑效應(出現(xiàn)峰展寬、峰分叉現(xiàn)象),采用乙腈-0.1%甲酸水溶液(2∶7、1∶8, v/v)、0.1%甲酸水溶液為稀釋溶劑時,無明顯溶劑效應產(chǎn)生,因此選擇0.1%甲酸水溶液為標準樣品和實驗樣品的稀釋溶劑。

2.2 色譜柱的優(yōu)化

本文對比了3種色譜柱Eclipse Plus Phenyl-Hexyl (100 mm×3.0 mm, 1.8 μm)、Eclipse Plus C18(100 mm×3.0 mm, 1.8 μm)、SB-C18(50 mm×3.0 mm, 1.8 μm)對5種生物堿(質(zhì)量濃度均為100 μg/L)的分離效果,結(jié)果見圖1。SB-C18色譜柱的固定相采用不封端型鍵合方式,硅膠表面裸漏的硅羥基對堿性化合物會產(chǎn)生額外的吸附作用,造成色譜峰展寬、拖尾,不利于定性定量檢測;Eclipse Plus C18和Eclipse Plus Phenyl-Hexyl色譜柱的固定相采用封端型的鍵合方式,色譜峰峰形良好;Eclipse Plus C18色譜柱的C18鍵合基團對5種生物堿成分的保留選擇性小,無法將卡西酮和去甲偽麻黃堿完全分離;苯基鍵合色譜柱Eclipse Plus Phenyl-Hexyl通過π-π相互作用可以實現(xiàn)5種生物堿成分的基線分離,因此選擇Eclipse Plus Phenyl-Hexyl色譜柱(100 mm×3.0 mm, 1.8 μm)進一步優(yōu)化提取檢測條件。

圖 1 采用3種色譜柱時5種生物堿成分的提取離子色譜圖Fig. 1 Extracted ion chromatograms (EIC) of the five alkaloids using the three columns Peak identifications: 1. norephedrine; 2. norpseudoephedrine; 3. cathinone; 4. methcathinone; 5. ethcathinone.

2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化

毛細管出口區(qū)域的碎裂電壓對目標化合物準分子離子的響應有較強影響,過高或過低均不利于方法靈敏度的提升。過高時5種生物堿成分易發(fā)生源內(nèi)裂解,中性丟失一分子H2O,過低時化合物準分子離子的離子傳輸效率降低。本研究在MS采集模式下,考察了碎裂電壓在110～170 V范圍內(nèi)5種生物堿成分準分子離子峰的響應情況,確定去甲偽麻黃堿和去甲麻黃堿的最佳碎裂電壓為130 V,卡西酮和甲卡西酮為140 V,乙卡西酮為160 V,結(jié)果見圖2。

圖 2 5種生物堿成分在不同碎裂電壓下的提取離子色譜峰面積Fig. 2 Extracted ion chromatographic peak areas of the five alkaloids at different fragmentor

在Target MS/MS采集模式下調(diào)整碰撞能,選取響應最強的子離子作為定量離子,選取響應次強的離子作為定性離子。優(yōu)化碰撞能,使定量離子的響應達到最強,確定去甲麻黃堿、去加偽麻黃堿、甲卡西酮和乙卡西酮的最佳碰撞能為10 eV,卡西酮為26 eV。

2.4 樣品提取條件的優(yōu)化

本文以測定的恰特草中5種生物堿含量為評價標準,優(yōu)化了提取溶劑和提取方法,并通過加標回收試驗,評估了提取液的基質(zhì)效應。

2.4.1樣品提取溶劑和提取方法的優(yōu)化

圖 3 11種提取溶劑和2種提取方法提取的恰特草中5種生物堿成分的測定值Fig. 3 Measured values of the five alkaloids in khat with 11 extraction solvents and two extraction methods

首先考察了7種溶劑(水、甲醇、乙腈、1%甲酸乙腈、0.10 mol/L的鹽酸水溶液、乙腈-水(1∶1, v/v)、甲醇-水(1∶1, v/v))的提取效果。取100 mg干燥恰特草樣品,加入1 mL提取溶劑振蕩,上清液用0.1%甲酸水溶液稀釋,參照1.3節(jié)的色譜-質(zhì)譜條件檢測。結(jié)果顯示,0.10 moL/L的鹽酸水溶液和乙腈-水(1∶1, v/v)提取效果較好,見圖3。為進一步考察不同濃度鹽酸水溶液及不同比例乙腈-水的提取效果,選取0.05 mol/L和0.15 mol/L的鹽酸水溶液、乙腈-水(2∶1、1∶2, v/v)4種提取溶劑,參照上述方法提取檢測。結(jié)果顯示,0.05 mol/L的鹽酸水溶液提取效果最佳,見圖3。

考察了使用0.05 mol/L的鹽酸水溶液分別采用振蕩提取3 min和30 ℃超聲提取15 min兩種提取方法,二者提取效果無顯著差異,結(jié)果見圖3,因此提取方法選擇用時短、簡單快捷的振蕩提取法。

2.4.2提取液原液的基質(zhì)影響考察

取6份干燥恰特草樣品,每份100 mg,其中3份樣品的加標水平為去甲麻黃堿20 mg/kg、去甲偽麻黃堿300 mg/kg、卡西酮200 mg/kg、甲卡西酮0.8 mg/kg、乙卡西酮0.4 mg/kg,用1 mL 0.05 mol/L的鹽酸水溶液對3份恰特草加標樣品及3份未加標樣品進行提取。取300 μL上清液,加入700 μL乙腈,混勻,用0.1%甲酸水溶液稀釋5倍、10倍、100倍、500倍,參照1.3節(jié)的色譜-質(zhì)譜條件分別檢測甲卡西酮、乙卡西酮、去甲麻黃堿、卡西酮和去甲偽麻黃堿。

圖 4 凈化前恰特草樣品中卡西酮二級質(zhì)譜分析特征離子對 (150.0913/117.0573)的提取離子色譜圖及碰撞能為25 eV下卡西酮和兩種卡西酮類似物的二級質(zhì)譜圖 Fig. 4 Extracted ion chromatogram of characteristic ion pair (150.0913/117.0573) of cathinone and secondary mass spectra of cathinone and two cathinone analogues with collision energy 25 eV in khat sample before purify 1. cathinone; 2,3. other configuration.

加標回收率通過如下公式計算:加標回收率=(加標樣品生物堿測定值-未加標樣品生物堿測定值)/標準添加量×100%。由于稀釋倍數(shù)不同,5種化合物加標回收率受基質(zhì)效應的影響存在差異,5種生物堿的加標回收率為120.6%～146.8%。同時提取液中有2種其他卡西酮類似物存在,其二級質(zhì)譜碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)和相對豐度與卡西酮相同,但色譜保留時間存在較大差異,結(jié)果見圖4。

綜上,為去除雜質(zhì)成分,減少對色譜柱和離子源的污染,降低基質(zhì)效應,提升定量分析的準確性,消除卡西酮類似物對恰特草中卡西酮成分定性定量分析的干擾,需建立并優(yōu)化提取液的凈化方法。

2.5 樣品凈化條件的優(yōu)化

5種生物堿成分均為水溶性生物堿[46],在酸性條件下為離子狀態(tài),易溶于水,不溶于非極性有機溶劑,在堿性條件下為分子狀態(tài),易溶于極性有機溶劑。實驗利用生物堿的溶解特性通過溶劑萃取法實現(xiàn)恰特草提取液的凈化。

2.5.1NaOH溶液添加量的優(yōu)化

實驗中用1 mL二氯甲烷凈化提取液,去除色素、甾醇和其他極性較弱的小分子化合物;加入1 mol/L NaOH溶液,調(diào)節(jié)pH值,使5種生物堿成分轉(zhuǎn)變?yōu)榉肿訝顟B(tài),并使提取液中的大分子蛋白質(zhì)發(fā)生變性,生成絮狀沉淀。本文考察了不同體積(0、30、40、50、60、70、80、90、100 μL)的1 mol/L NaOH溶液對測定恰特草中5種生物堿含量的影響,結(jié)果顯示,NaOH溶液的最佳添加量為80 μL,見圖5。凈化完成后用乙腈萃取提取液,加入固體NaCl使乙腈和水分層,取上清液,利用0.1%甲酸水溶液稀釋,參照1.3節(jié)中的色譜-質(zhì)譜條件檢測,結(jié)果顯示,該方法消除了卡西酮類似物對恰特草中卡西酮成分定性定量分析的干擾,見圖6。

圖 5 不同體積1 mol/L NaOH溶液凈化后恰特草中5種生物堿成分的測定值Fig. 5 Measured values of the five alkaloids in khat under different volumes of 1 mol/L NaOH solution

圖 6 凈化后的恰特草樣品中5種生物堿的提取離子色譜圖Fig. 6 Extracted ion chromatograms of the five alkaloids in the purified khat sample Characteristic ion pairs: a. 152.1070/134.0964 for norephedrine and norpseudoephedrine, 150.0913/117.0573 for cathinone; b. 164.107/146.0964 for methcathinone, 178.1226/160.1121 for ethcathinone. Peak identifications: 1. norephedrine; 2. norpseudoephedrine; 3. cathinone; 4. methcathinone; 5. ethcathinone.

2.5.2凈化對生物堿回收率及樣品基質(zhì)效應的影響

凈化后恰特草中5種生物堿成分的測定值低于凈化前,為評價凈化效果,明確測定值降低的原因,實驗探究了凈化過程對生物堿回收率及樣品基質(zhì)效應的影響。

凈化過程對生物堿回收率的影響:用0.05 mol/L的鹽酸水溶液配制3份1 mL質(zhì)量濃度為600 μg/L的5種生物堿混合標準溶液。參照1.3節(jié)中條件提取檢測,5種生物堿回收率為98.1%～104.3%。

凈化過程對樣品基質(zhì)效應的影響:制備6份恰特草加標樣品和6份未加標樣品,取3份恰特草加標樣品和3份未加標樣品參照1.3節(jié)中的方法提取檢測,5種生物堿成分的加標回收率為92.8%～108.6%。另取3份恰特草加標樣品和3份未加標樣品,除不采用二氯甲烷凈化外,參照1.3節(jié)中的條件提取檢測,5種生物堿成分的加標回收率為115.4%～129.6%。

結(jié)果顯示,凈化過程對5種生物堿的回收率無顯著影響。使用NaOH溶液除去大分子蛋白質(zhì),樣品仍存在較強的基質(zhì)效應,使用二氯甲烷能有效去除部分色素、甾醇和其他極性較弱的小分子化合物,與NaOH溶液同時使用,能有效減弱樣品的基質(zhì)效應。

2.6 方法學驗證

2.6.1線性范圍、檢出限及定量限

將1、5、10、20、25、50、75、100、150、200 μg/L系列混合標準工作溶液參照1.3節(jié)的色譜-質(zhì)譜條件檢測,以定量離子色譜峰面積為縱軸(y),化合物的質(zhì)量濃度為橫軸(x),利用Agilent MassHunter Quantitative Analysis B.07.01 (for Q-TOF)軟件繪制工作曲線,依據(jù)恰特草中5種生物堿的含量,選取合適的線性范圍,計算相關(guān)系數(shù)(r2),5種生物堿的相關(guān)系數(shù)均≥0.997 6。

利用Agilent MassHunter Qualitative Analysis B.07.00軟件以peak to peak的方式計算信噪比,以目標化合物的信噪比等于3(S/N=3)確定該化合物的檢出限,以S/N=10確定該化合物的定量限。檢出限為0.08～0.75 μg/L,定量限為0.25～2.50 μg/L,滿足恰特草的檢驗鑒定要求。5種生物堿成分的線性回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限與定量限見表2。

表 2 5種生物堿成分的線性回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限與定量限

表 3 兩份恰特草樣品中5種生物堿成分的加標回收率及其相對標準偏差(n=6)

2.6.2加標回收率與方法精密度

在方法實際應用過程中,發(fā)現(xiàn)不同恰特草中生物堿成分的含量存在差異。因此另取A、B兩份生物堿含量差異較大的干燥恰特草樣品評價加標回收率和方法精密度。

取12份A組干燥恰特草樣品,每份100 mg,其中6份加標水平為去甲麻黃堿20.0 mg/kg、去甲偽麻黃堿300.0 mg/kg、卡西酮200.0 mg/kg、甲卡西酮0.8 mg/kg、乙卡西酮0.4 mg/kg;取12份B組干燥恰特草樣品,每份100 mg,其中6份加標水平為去甲麻黃堿20.0 mg/kg、去甲偽麻黃堿500.0 mg/kg、卡西酮30.0 mg/kg、甲卡西酮0.2 mg/kg、乙卡西酮0.2 mg/kg。參照1.3節(jié)中的條件提取檢測。參照公式(1)計算恰特草中生物堿的含量,由于前處理過程中1 mL提取液中僅有300 μL提取液用于進一步凈化檢測,因此公式中需對恰特草質(zhì)量乘以系數(shù)0.3,計算加標回收率,結(jié)果見表3。5種生物堿成分的添加回收率為90.7%～105.2%,該方法擁有良好的提取效果,且凈化過程能有效減弱樣品基質(zhì)效應,滿足恰特草中生物堿成分的提取檢測要求。

(1)

式中:ω為生物堿含量(mg/kg);V為提取溶液體積(L);D為上清液稀釋倍數(shù);C為利用標準曲線計算的稀釋液中生物堿成分的質(zhì)量濃度(μg/L);M為干燥恰特草質(zhì)量(g)。

儀器精密度實驗:對同一瓶提取液6次連續(xù)進樣,計算測定結(jié)果的平均值及RSD;日內(nèi)方法精密度實驗:一天內(nèi)不同時間對A、B兩份干燥恰特草各重復6次實驗;日間方法精密度實驗:由3名實驗員在6天內(nèi)重復實驗6次。實驗儀器精密度為0.5%～2.3%,日內(nèi)方法精密度為1.0%～2.5%,日間方法精密度為1.3%～3.3%,方法具有良好的穩(wěn)定性和重復性,見表4。

2.7 實際樣品檢驗

為檢驗提取檢測方法和檢測結(jié)果的可靠性,參照1.3節(jié)中的提取檢測方法對國家林業(yè)局森林公安司法鑒定中心受理的15份干燥恰特草檢材進行檢測,15份干燥恰特草檢材均檢出去甲麻黃堿、去甲偽麻黃堿、卡西酮、甲卡西酮、乙卡西酮5種生物堿成分,說明該方法適用于干燥恰特草中生物堿成分的檢測。

表 4 兩份恰特草樣品中5種生物堿的含量及實驗儀器精密度、日內(nèi)方法精密度、日間方法精密度

3 結(jié)論

本研究基于溶劑萃取-高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法建立了干燥恰特草中卡西酮等5種生物堿成分的提取檢測方法。通過優(yōu)選提取溶劑種類、優(yōu)化凈化條件和色譜-質(zhì)譜條件,除去了提取液中的雜質(zhì)成分,減少了樣品分析對離子源和色譜柱的污染,減弱了樣品基質(zhì)效應,實現(xiàn)了5種生物堿的同時檢測。經(jīng)實際樣品分析驗證,該方法凈化效果好,定量準確,靈敏度高,重復性好,能夠滿足恰特草的理化檢驗鑒定要求,并確認去甲麻黃堿、去甲偽麻黃堿、卡西酮、甲卡西酮和乙卡西酮5種精神活性成分普遍存在于干燥恰特草中,為恰特草的理化檢驗鑒定提供參考,并為恰特草中未知精神活性成分的發(fā)現(xiàn)和研究提供指引。