陳 宇，張 婭，菅 蕊

（1.河北政法職業(yè)學(xué)院，河北石家莊 050000；2.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000）

大量研究顯示，將益生菌用于畜禽生產(chǎn)可以有效提高動(dòng)物免疫能力，使動(dòng)物不易患消化道疾病，同時(shí)可以提高動(dòng)物的消化吸收能力，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育（謝榮國(guó)，2022）。常見的益生菌包括乳酸菌、酵母菌及芽孢桿菌等（馬步倉(cāng)等，2023）。動(dòng)物腸道中益生菌的大量繁殖會(huì)快速搶占動(dòng)物腸道生態(tài)位，導(dǎo)致有害微生物的豐度下降，從而改善腸道菌群結(jié)構(gòu)。腸道微生物群的平衡還可以進(jìn)一步調(diào)節(jié)動(dòng)物消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多種生理過(guò)程，對(duì)機(jī)體健康具有重要作用（王鴻澤等，2023）。

由于畜禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中抗生素超標(biāo)會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物源和人源性致病菌的耐藥性增加，因此，為保障人類健康，目前我國(guó)全面禁止在飼料中使用抗生素，取而代之的是益生菌等替抗產(chǎn)品。越來(lái)越多的研究將益生菌添加到禽類、水產(chǎn)、豬及反芻動(dòng)物飼料中，均得到了很好的效果（姚逸安等，2023）。如在杜寒雜交肉羊日糧中添加1500 mg/kg 含有乳酸菌、雙歧桿菌、酵母菌及芽孢桿菌的復(fù)合益生菌制劑，不僅可以顯著增加平均日增重、胴體重，經(jīng)濟(jì)利潤(rùn)也比對(duì)照組高53.73 元（王沖沖，2023）。在日糧中添加200 g/d 的酵母培養(yǎng)物不僅提高了育肥牛生產(chǎn)性能，同時(shí)提高了大理石紋評(píng)分，并改善了肉色等肉品質(zhì)（薛喜娟等，2023）。本試驗(yàn)以300 kg 左右的西門塔爾雜交肉牛為研究對(duì)象，分析日糧中添加0.5%、1.0%、1.5% 的復(fù)合益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)肉牛生產(chǎn)性能的影響，并通過(guò)檢測(cè)各組肉牛糞樣中的有益菌乳酸桿菌、雙歧桿菌及有害菌大腸桿菌的含量評(píng)價(jià)益生菌對(duì)腸道菌群的影響，為評(píng)價(jià)復(fù)合益生菌在肉牛養(yǎng)殖中的應(yīng)用價(jià)值提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 本試驗(yàn)中采用的復(fù)合益生菌為乳酸桿菌、酵母及枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)物，各種菌株使用對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)后按1 ∶1 ∶1混合，活菌數(shù)達(dá)到5.0×107CFU/g。復(fù)合益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物除了以上各種活菌外，還含有微生物發(fā)酵的代謝產(chǎn)物及發(fā)酵后培養(yǎng)基等其他成分。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)選取60 頭健康狀態(tài)良好的西門塔爾雜交牛（月齡、體重相近），將其隨機(jī)分為4 組，各組牛體重范圍在（300±14.47）kg，且差異不顯著。對(duì)照組（1 組）飼喂基礎(chǔ)日糧，按照全混合日糧（Total Mixed Rations，TMR）標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)，配方成分及營(yíng)養(yǎng)組成見表1。試驗(yàn)組（2、3、4 組）分別在對(duì)照組日糧中添加0.5%、1.0%、1.5% 的復(fù)合益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物。預(yù)飼期10 d，正試期90 d。試驗(yàn)期間分別于每日早晚固定時(shí)間飼喂，各組肉?？勺杂刹墒臣帮嬎渌凑震B(yǎng)殖場(chǎng)常規(guī)飼養(yǎng)管理方式進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)日糧配方成分及營(yíng)養(yǎng)組成

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生產(chǎn)性能的測(cè)定 分別于試驗(yàn)的第1 和91 天飼喂前對(duì)各組試驗(yàn)牛進(jìn)行空腹稱重，用于計(jì)算平均日增重（ADG）。統(tǒng)計(jì)各組肉牛90 d 試驗(yàn)期間的飼料消耗量，用于計(jì)算平均日采食量（ADFI）。根據(jù)ADFI 和ADG 計(jì)算料肉比（F/C）。

1.3.2 腸道菌群的測(cè)定 分別利用對(duì)應(yīng)液體培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌，利用平板法測(cè)定其拷貝數(shù)后，將其按照不同梯度的拷貝數(shù)（CFU）取樣提取DNA，用作Real-time PCR 的模板。根據(jù)文獻(xiàn)分別合成上述3 種菌株的特異性引物進(jìn)行Real-time PCR，引物序列及參考文獻(xiàn)見表2。測(cè)定拷貝數(shù)對(duì)應(yīng)的Ct 值。根據(jù)拷貝數(shù)和Ct值分別繪制以上3 種菌株的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于測(cè)定樣本中對(duì)應(yīng)菌株的含量。

表2 乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌特異性引物

在試驗(yàn)開始第85 天收集了每組試驗(yàn)牛的新鮮糞便樣品100 克，液氮保存，利用DNA 提取試劑盒提取樣品微生物群落總DNA。利用Realtime PCR 分別測(cè)定樣品DNA，分別獲得乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌的Ct 值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每克糞便中對(duì)應(yīng)菌株的拷貝數(shù)的log 值，用于比較各組處理對(duì)腸道菌群繁殖的影響。

1.3.3 經(jīng)濟(jì)效益分析 本試驗(yàn)基于肉牛的生產(chǎn)性能、飼料利用情況和飼料市場(chǎng)價(jià)格進(jìn)行經(jīng)濟(jì)效益分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，當(dāng)P＜0.05 表示組間差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同添加量的復(fù)合益生菌對(duì)肉牛生產(chǎn)性能的影響 由表3 可知，飼喂90 d 后，與對(duì)照組相比，添加不同含量的益生菌均可提高肉牛試驗(yàn)期間的平均日增重和平均日采食量（P＜0.05），尤其是當(dāng)添加1.0% 益生菌后平均日增重最高達(dá)到（1.31±0.04）kg/（頭·d）。同時(shí)料肉比也較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05），但不同添加量的試驗(yàn)組之間不存在顯著差異（P＞0.05）。

表3 日糧添加益生菌對(duì)肉牛生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同添加量的復(fù)合益生菌對(duì)肉牛腸道菌群的影響 由表4 可知，飼喂90 d 后，與對(duì)照組相比，添加含有乳酸桿菌、酵母及枯草芽孢桿菌的復(fù)合益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物可顯著提高肉牛腸道乳酸桿菌的含量（P＜0.05），但對(duì)另外一種腸道有益菌雙歧桿菌的含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。檢測(cè)糞便中大腸桿菌含量后發(fā)現(xiàn)，復(fù)合益生菌可顯著降低大腸桿菌含量（P＜0.05）。

表4 日糧添加益生菌對(duì)肉牛腸道菌群的影響log（CFU/g）

2.3 經(jīng)濟(jì)效益分析 由表5 可知，飼喂90 d 后，與對(duì)照組相比，添加0.5% 和1.0% 的復(fù)合益生菌試驗(yàn)組平均日飼料成本雖略有增加，但平均日利潤(rùn)較高，添加0.5% 的復(fù)合益生菌后平均日利潤(rùn)增加了2.00 元。

表5 日糧添加益生菌對(duì)經(jīng)濟(jì)效益的影響

3 討論

益生菌可以促進(jìn)動(dòng)物吸收能力，降低其消化道疾病，同時(shí)與抗生素相比，益生菌具有綠色、安全的特點(diǎn)，因此，我國(guó)畜禽養(yǎng)殖行業(yè)開始大力推廣益生菌等微生物制劑的使用（馬步倉(cāng)等，2023）。常用益生菌種類繁多，且對(duì)不同應(yīng)用對(duì)象具有較大差異（王沖沖，2023 ；何琴等，2023）。本試驗(yàn)比較了不同添加量的復(fù)合益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)300 kg 肉牛生產(chǎn)性能的影響，結(jié)果表明，添加益生菌可以增加肉牛平均日增重，同時(shí)根據(jù)飼料消耗可以看出益生菌具有提高飼料利用率的作用，且不同含量的試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異。張方（2021）使用乳酸菌、雙歧桿菌等復(fù)合益生菌制劑飼喂肉牛，當(dāng)添加量為2.5%時(shí)，平均日增重與對(duì)照無(wú)顯著差異，增加添加量可以促進(jìn)肉牛生產(chǎn)性能，但5.0%添加組與10%添加組之間無(wú)顯著差異。因此，適量添加益生菌即可達(dá)到促進(jìn)生產(chǎn)性能的作用，過(guò)多可能會(huì)導(dǎo)致適應(yīng)性降低，甚至產(chǎn)生不良反應(yīng)。

為進(jìn)一步確定本試驗(yàn)益生菌的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)復(fù)合益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的經(jīng)濟(jì)效益進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加0.5% 和1.0% 的復(fù)合益生菌可以提高日利潤(rùn)。此外，大量研究顯示，添加益生菌對(duì)肉牛免疫功能可產(chǎn)生積極影響，可能減少疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（劉立軍等，2023）。這表示添加益生菌可以避免肉?；疾『蟮闹委熧M(fèi)用，因此，將益生菌添加到日糧中可帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)效益。

胃腸道微生物群可以傳遞環(huán)境中的信號(hào)，調(diào)節(jié)多種生理功能，對(duì)機(jī)體健康起至關(guān)重要的作用。添加枯草芽孢桿菌和糞腸球菌可以提高鯽魚增重率、特定生長(zhǎng)率，血清學(xué)指標(biāo)顯示其提高了鯽魚超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活性，深入分析發(fā)現(xiàn)，添加上述益生菌可以有效改善鯽魚腸道菌群結(jié)構(gòu)，提高其有益菌比例（何琴等，2023）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加乳酸桿菌、酵母及枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)物能促進(jìn)腸道乳酸桿菌的繁殖，同時(shí)抑制潛在致病菌大腸桿菌的生長(zhǎng)，但對(duì)于雙歧桿菌沒(méi)有作用，而且添加量較大時(shí)，雙歧桿菌還會(huì)受到抑制。因此，還需要針對(duì)飼喂對(duì)象及所處不同時(shí)期進(jìn)一步明確益生菌的使用種類及比例。

綜上所述，在益生菌推廣應(yīng)用過(guò)程中需要綜合考慮益生菌的類型、肉牛個(gè)體差異及綜合經(jīng)濟(jì)效益，確定最佳添加量，并優(yōu)化其應(yīng)用策略，改善肉牛的生產(chǎn)性能。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)中，乳酸桿菌、酵母及枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)物作為飼料添加劑飼喂肉牛90 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其可提高肉牛平均日增重，降低料肉比，促進(jìn)腸道乳酸桿菌的繁殖，并抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，根據(jù)生產(chǎn)性能及經(jīng)濟(jì)效益綜合分析，乳酸桿菌、酵母及枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)物的適宜添加量為0.5%。